贵州苗族人群MICA和MICB基因多态性及单倍型分析

为了探讨贵州苗族人群主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类链相关基因(MHC classⅠchain-related gene,MIC gene)MICA和MICB的分布特征,以丰富基因数据库中相关信息,进而研究某些疾病的遗传特征和进化史,采用基于序列特异性引物的聚合酶链反应(PCR-sequence-specific primer,PCR-SSP)和基于序列分型的聚合酶链反应(PCR-sequence-based typing,PCR-SBT)检测150例中国贵州苗族人群外周血DNA样本,分析该人群的MICA和MICB基因分布,用卡方检验对MICA和MICB基因分布频率的差异进行评估。基因分型结果显示,中国贵州苗族人群中MICA*019、MICA*045、MICA*008:04、MICA*002:01、MICA-A9、MICA-A4、MICB*005:02和MICB*002等位基因的频率显著高于其他等位基因。MICA和MICB等位基因的单倍型分析显示,MICA*019-MICB*005:02和MICA*008:04-MICB*005:02两种单倍型的分布频率较高,分别为17.40%和16.30%。PCR-SSP和PCR-SBT分析显示,MICA*010与MICB*005:02、MICA*002:01与MICB*005:02以及MICA*009:01与MICB*005:02这3种MICA和MICB等位基因存在连锁不平衡(P<0.01)。上述结果表明,中国贵州苗族人群MICA和MICB基因具有多态性且存在显著的连锁不平衡。本研究为中国少数民族MIC基因序列数据库提供了人群样本数据,该数据为研究MICA和MICB基因在同种异体移植和疾病易感性中的可能作用提供了基础资料。

广州地区106例汉族人群MICA和MICB微卫星基因座单体型研究

利用聚合酶链反应和荧光(6-FAM)自动化检测技术对广东地区汉族106例无亲缘关系样本进行MICA基因外显子5和MICB基因内含子1微卫星基因座多态性及其单体型分布调查。根据群体资料估算两者间的单体型频率、连锁不平衡参数、相对连锁不平衡参数。结果显示,广州地区汉族人群MICA和MICB微卫星基因座基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡法则,共检出MICA微卫星基因座5个等位基因,MICB微卫星基因座14个等位基因。其中MICA A5基因频率最高(0.2877),A4基因频率最低(0.1321)。MICB CA14等位基因频率最高(0.3255),CA19、CA28等位基因频率最低(0.0047),未检出CA27。21种MICA-MICB单体型频率大于1％(连锁不平衡参数>0),其中单体型A5-CA14(16.73％),A5.1-CA18(8.75％),A4-CA26(3.76％),A9-CA15(3.66％)和A6-CA21(2.61％)为强连锁常见单体型(x^2>3.84,P<0.05)。

湖南汉族人群MICB等位基因多态性与白血病的相关性研究

目的:研究湖南汉族人群MICB等位基因的多态性与白血病的相关性。方法:MICB等位基因分型用PCR-SSP和PCR-SBT的方法。结果:白血病患者中有13种MICB等位基因被检测出,其中MICB*005:02/010基因频率较对照组显著偏低(OR=0.416,P<0.05)。不同类别白血病之间MICB等位基因多态性没有显著差异。结论:MICB*005:02/010等位基因可能与白血病的保护相关。

MICB基因的克隆及其在原核系统中的表达

目的将中国汉族人群中不同分布频率的MICB基因克隆到原核表达系统,表达MICB蛋白并对蛋白进行鉴定和纯化,为体外建立MICB抗体检测方法和研究MICB等位基因功能奠定基础。方法收集外周血标本测序分析MICB基因2～4号外显子,获取不同分布频率的基因型,分别将分布频率】50%的MICB*005等位基因,分布频率为10%左右的MICB*00201、MICB*00401的等位基因,和分布频率【1%的MICB*018等位基因的外周血标本提取总RNA,经RT-PCR获取此4个等位基因的cDNA。扩增此4个MICBcDNA2～4号外显子,将目的片段连接至TOPO克隆载体,提取质粒测序分析,

流式荧光法检测抗MICB抗体的建立及初步应用

目的建立稳定、快速和特异的抗MHC-I类链相关基因B(MICB)抗体流式荧光检测方法,了解MICB抗体在健康人群中的分布频率。方法克隆、表达和分离纯化MICB融合蛋白,将其包被在Luminex微球表面,建立MICB抗体流式荧光检测方法。评价方法的线性范围、特异性、精密度、准确性,并用此方法检测500例健康人血清MICB抗体。结果 MICB抗体流式荧光检测方法在血清抗体浓度在3.1～100.0μg/mL之间,具有较好的线性关系,相关系数为0.995。回收实验和重复实验结果显示,其回收率为97.4%～99.6%,批内变异系数为3.4%、2.9%,批间变异系数为4.5%、4.9%。该检测方法与MICA抗体无交叉反应。500例健康人血清中发现4例MICB等位基因特异性抗体。结论 MICB抗体流式荧光检测方法的特异性和灵敏度较高,结果稳定可靠。MICB抗体在器官移植中的作用需进一步研究。

MICB基因2～6外显子测序方法的建立及其应用

目的MHCⅠ类链相关基因B（MICB）是非经典的HLAⅠ类分子,可与NKG2D相互作用调节NK细胞的活性。本研究旨在建立MICB基因2～6外显子的聚合酶链反应-序列测序方法（PCR-SBT）,并分析汉族人群MICB在高分辨基因分型水平上的分布特征。方法根据GenBank数据库MICB基因有关序列（ID NC000006.11）,采用Primer3input计算机软件辅助设计引物,利用聚合酶链反应扩增MICB基因2～6外显子序列片段,扩增片段采用双酶切纯化后,按BigDye terminator v3.1sequencing Kit试剂盒操作进行测序反应,利用Assign3.5SBT分析软件指定等位基因型。

miR-296-5p靶向MICB促进口腔鳞癌生长的分子机制

目的:研究微小RNAmiR-296-5p对口腔鳞癌细胞存活及自然杀伤细胞因子分泌的影响,并探讨其机制。方法:运用免疫组织化学方法检测癌旁组织、口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达;qRT-PCR法检测组织和口腔鳞癌细胞Cal27中miR-296-5p的表达;将anti-miR-296-5p组(转染anti-miR-296-5p)、miR-296-5p组(转染miR-296-5pmimics)、pcDNA3.1-MICB组(转染pcDNA3.1-MICB)、anti-miR-296-5p+si-MICB组(anti-miR-296-5p和si-MICB共转染),均用脂质体转染至Cal27细胞;MTT法检测各组细胞的存活率;ELISA法检测各组细胞中TNF-α、IFN-γ的含量;Westernblot检测各组细胞中MICB的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中MICB的蛋白表达显著降低,miR-296-5p的表达显著升高(P<0.05);抑制miR-296-5p、过表达MICB均可显著下调Cal27细胞的存活率,上调NK细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量;miR-296-5p可抑制野生型MICB细胞的荧光活性,且负向调控MICB的表达;敲减MICB可逆转抑制miR-296-5p对Cal27细胞存活率的下调及对NK细胞因子含量的上调作用。结论:下调miR-296-5p可抑制口腔鳞癌细胞的存活,促进NK细胞的杀伤作用,其机制可能与靶向负调控MICB有关,其可为口腔鳞癌的靶向治疗提供依据。

MICB基因多态性与肺癌的易感关联性研究

目的:研究海南汉族人群MICB等位基因的多态性与肺癌易感性之间的关联性。方法:采用PCR-SSP(PCR sequence-specific primers)和PCR-SBT(PCR sequence-based typing)方法对样本MICB等位基因的多态性进行检测。结果:肺癌患者中检出14种MICB等位基因;和对照组相比较,MICB*00502等位基因在肺癌患者组分布频率较少(43.5%vs 57.8%),MICB*016等位基因在肺癌患者组分布较多(5.9%vs 0.6%);MICB*016等位基因可能对肺癌易感(OR=11.19,95%CI:2.59-48.24,Pc<0.05);MICB*00502等位基因可能对肺癌不易感(MICB*00502:OR=0.56,95%CI:0.42-0.76,Pc<0.05)。结论:MICB等位基因的多态性与肺癌的易感性之间存在关联性。

MICB基因多态性与乳腺癌的易感关联性研究

目的:研究海南汉族人群MICB等位基因的多态性与乳腺癌易感性之间的关联性。方法:采用PCRSSP(PCR sequence-specific primers)和PCR-SBT(PCR sequence-based typing)方法对样本MICB等位基因的多态性进行检测。结果:乳腺癌患者中检出14种MICB等位基因;和对照组相比较,MICB*002和MICB*014等位基因在乳腺癌患者组分布频率较少,MICB*002和MICB*014等位基因可能对乳腺癌不易感(MICB*002:OR=0.31,95%CI:0.19-0.51,Pc<0.05;MICB*014:OR=0.32,95%CI:0.17-0.60,Pc<0.05)。MICB*016和MICB*003等位基因在乳腺癌患者组分布较多;MICB*016和MICB*003等位基因可能对乳腺癌易感(MICB*016:OR=10.68,95%CI:2.52-45.28,Pc<0.05;MICB*003:OR=3.57,95%CI:1.34-9.49,Pc<0.05);MICB*002/002和MICB*014/014基因型可能对乳腺癌不易感(MICB*002/002:OR=0.12,95%CI:0.04-0.36,Pc<0.05;MICB*014/014:OR=0.30,95%CI:0.10-0.89,Pc<0.05)。结论:MICB等位基因的多态性与乳腺癌的易感性之间存在关联性。

贵州侗族人群MICB等位基因多态性研究

目的:探讨贵州侗族健康人群MICB等位基因的分布特点。方法:收集100例健康无亲缘关系的贵州侗族人新鲜血液样本,采用世界卫生组织(WHO)推荐的标准盐析法从样本新鲜血液中提取基因组DNA,并用PCR-SSP、PCR-SBT两种方法对样本DNA进行MICB等位基因分型。结果:在贵州侗族人群中,检出7种MICB等位基因,其中MICB*005:02等位基因频率最高,其频率为58.50%,其次为MICB*002:01等位基因频率22.00%;而MICB*003及MICB*005:03等位基因频率最低,两者频率分别为1.50%。结论:贵州侗族人群MICB等位基因具有高度的多态性,该数据为研究MICB基因在同种异体器官移植和疾病易感性中的可能作用奠定了实验基础。

低表达MICA/MICB导致NK细胞对人鼻咽癌多药耐药细胞(CNE2/DDP)杀伤活性下降

目的探讨HLAⅠ类分子及MHCⅠ类链相关分子(MICA/MICB)在人鼻咽癌细胞株CNE2及多药耐药细胞株CNE2/DDP的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响。方法流式细胞仪检测CNE2和CNE2/DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA/MICB的表达情况;LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性;效靶比10∶1时,用抗HLAⅠ类分子单抗(W6/32)和抗MICA/MICB单抗(BAMO-1)分别封闭HLAⅠ类分子和MICA/MICB,观察NK细胞杀伤CNE2、CNE2/DDP细胞活性的变化。结果CNE2/DDP细胞表面HLAⅠ类分子和MICA/MICB的表达均较CNE2细胞明显减少(P<0.01)。NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性在效靶比5∶1时分别是(9.37±2.14)%、(4.37±0·63)%;效靶比10∶1时分别是(27.14±1.82)%、(15.79±2.87)%;效靶比20∶1时分别是(36.40±4.28)%、(26.20±4·18)%;效靶比301时分别是(54.67±2.80)%、(40.29±2.73)%。各效靶比时NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性与HLAⅠ类分子和MICA/MICB相关,NK细胞对CNE2/DDP细胞的杀伤活性明显低于CNE2细胞(P<0.01)。效靶比10∶1时,W6/32明显增强NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性(P<0.01),BAMO-1明显抑制NK细胞对CNE2、CNE2/DDP细胞的杀伤活性(P<0.01)。结论HLAⅠ类分子和MICA/MICB在CNE2、CNE2/DDP的表达差异影响着NK细胞的杀伤活性,MICA/MICB在多药耐药肿瘤细胞的低表达导致耐药肿瘤细胞对NK细胞杀伤敏感性下降。

NK细胞免疫编辑后的人鼻咽癌细胞株CNE2 HLA I类分子和MICA/MICB的表达及其对NK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞与表达NKG2D配体的人鼻咽癌细胞株CNE2混合培养24h时CNE2细胞表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的变化及编辑前、后的CNE2细胞对NK细胞杀伤敏感性的差异.方法:PCR-SSP法检测NK细胞KIR分型,流式细胞仪检测编辑前的CNE2细胞(单纯培养的CNE2细胞),编辑后的CNE2细胞(NK细胞与CNE2细胞10∶1混合培养24h)表面HLAI类分子及MHCI类链相关分子(MICA/MICB)的表达情况,LDH释放法测定3例健康者的NK细胞在不同效靶比时对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前、后的CNE2细胞表面MICA/MICB的表达率分别为(88.67±2.81)%和(34.53±3.15)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);编辑前、后的CNE2细胞表面HLAI类分子表达率分别为(99.77±0.12)%和(97.80±0.87)%,两者相比差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞对编辑前、后的CNE2细胞的杀伤活性在效靶比10∶1时分别为(26.96±1.47)%和(6.60±0.86)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01);效靶比20∶1时分别为(35.74±3.59)%和(11.57±2.02)%,两者相比差异有统计学意义(P<0.01).结论:CNE2细胞与NK细胞持续性接触24h,CNE2细胞表面HLAI类分子表达无改变,MI-CA/MICB表达下调,导致编辑后的CNE2细胞激发NK细胞杀伤活性下降.本研究初步证明了NK细胞对编辑后的肿瘤细胞杀伤活性下降的分子基础,同时为我们如何提高NK细胞的杀伤活性提供了新的干预的靶点.

MICB/NKG2D信号通路在免疫逃逸和癌症治疗中的研究进展

人类主要组织相容性复合物Ⅰ类相关基因B(MHC Class Ⅰ polypeptide-related sequence B,MICB),属于非经典HLA-Ⅰ类基因家族成员。MICB基因具有多态性,目前共发现40个多态性位点和26种MICB蛋白[1]。基因编码的MICB蛋白称为应激性蛋白或者诱导性蛋白,主要表达在细胞膜表面,是NK细胞膜表面的配体[2]。机体正常细胞的表面MICB蛋白表达量少或表达缺失,但在肿瘤细胞或者病毒感染细胞表面,MICB蛋白表达明显增多[3]。

主要组织相容性复合体Ⅰ相关分子A(MICA)和MICB与终末期肾病相关性研究进展

终末期肾病(ESRD)是肾功能发生不可逆地衰退,病情进展至疾病的终末阶段。主要组织相容性复合体Ⅰ相关分子A(MICA)、MICB是人组织相容性复合体Ⅰ类相关基因(MIC)家族的两个主要成员,有同样的跨膜蛋白结构,其基因均定位于6号染色体短臂的MHCⅠ类基因区,同源序列达90%以上。采用聚类分析法发现MICA、MICB在ESRD患者体内肾小管上皮细胞中高表达,其诱导的微炎反应以肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10升高为主要特征,高水平的MICA、MICB脱落入血形成可溶性的MICA(sMICA)、sMICB,与自然杀伤(NK)细胞表面的自然杀伤细胞家族2成员D(NKG2D)特异性结合,通过胞内内吞和降解抑制NK细胞活性,使微炎反应持续存在。采用高通量血液透析,避免透析通路隐匿性感染,可有效控制患者微炎反应。

腹腔镜直肠癌根治术对血清MICA和MICB水平的影响及安全性分析

探讨腹腔镜直肠癌根治术的手术效果及对血清可溶性人类MHC-I类分子链相关基因A蛋白(MICA)、可溶性人类MHC-I类分子链相关基因B蛋白(MICB)水平的影响和安全性。选取2016年1月—2017年12月实施手术治疗的80例直肠癌根治术患者,根据手术方法分为腹腔镜组(腹腔镜直肠癌根治术治疗)和开腹组(开腹手术直肠癌根治术)各40例,对比两组的手术效果及手术前后的血清人类软骨糖蛋白39(YKL-40)、血红素加氧酶(HO-1)、MICA、MICB水平差异。腹腔镜组手术时间长于开腹组(P<0.05),术中出血量、术后3 d引流总量、住院时间均低于开腹组(P<0.05),两组淋巴结清除数目差异无统计学意义(P>0.05);术前,两组患者的血清HO-1、YKL-40、MICA、MICB水平差异无统计学意义(P>0.05);术后3d,腹腔镜组血清HO-1、YKL-40、MICA均显著低于开腹组(P<0.05),MICB水平两组差异无统计学意义(P>0.05);腹腔镜组手术并发症率7.50%,低于开腹组的25.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。腹腔镜直肠癌根治术手术效果安全可靠、创伤小,对患者的血清HO-1、YKL-40影响更小,可降低MICA的表达。

MICB基因多态性及其与免疫性疾病相关性的研究进展

MICB是主要组织相容性复合体I类基因超家族成员之一,具有较高多态性。MICB在机体正常细胞表达量低或缺失表达,但在恶性肿瘤或感染等应激情况下,其表达会上调。MICB是NK细胞的压力诱导型配体,与受体NKG2D相结合。NKG2D是表达在NK细胞和T细胞亚群的活化受体,在感染和肿瘤细胞的识别和裂解过程中发挥重要的作用。本文对MICB的多态性及其与免疫性疾病的相关性进行综述,并对MICB研究的临床意义进行讨论。

广东汉族人群MICA和MICB微卫星多态性分布

目的 调查广东地区汉族人群 MICA基因第 5外显子和 MICB基因第 1内含子微卫星多态性分布。方法 应用聚合酶链反应和荧光 ( 6 - FAM)自动化检测技术 ,对广东地区共 10 6名无亲缘关系样本进行 MICA和 MICB微卫星基因分型 ,并计算这两个微卫星的基因频率、基因型频率、个体鉴别力、期望杂合性、多态性信息含量和非父排除率。结果 MICA和 MICB微卫星基因型分布符合 Hardy- Weinberg平衡。MICA A5基因频率最高为 0 .2 877,A4基因频率则最低为 0 .132 1;A5 - 5 .1( 14 .15 % )和 A5 - 5 ( 10 .38% )基因型分布频率较高。 MICB CA14等位基因频率最高为 0 .32 5 5 ,CA19、CA2 8等位基因频率最低为0 .0 0 4 7,未检出 CA2 7。 CA14 - CA14 ( 14 .15 % )基因型分布频率较高。结论 MICA基因第 5外显子和MICB基因第 1内含子微卫星适合作为中国人群的遗传标志 ,用于人类学、遗传疾病基因连锁分析。

MICB 0106等位基因与湖北汉族人溃疡性结肠炎的相关性

目的MHCI类相关基因（MHC class Ⅰ chain-related gene，MIC）与MHCI类基因连锁，同源性很高。我们的前期研究发现MICA和MICB微卫星多态性与溃疡性结肠炎（UC）相关，本研究继续探讨MICB第2、3、4外显子基因多态性与UC的相关性，以期发现UC的易感基因。方法采用聚合酶链反应．单链构象多态性方法（PCR-SSCP），对105例湖北汉族UC患者和213例正常对照者进行MICB基因分型。结果UC患者的MICB 0106等位基因频率较正常组显著增高（19．0％比8．9％，P=0．000，Pc〈0．001，OR=2．402，95％CI为1．488～3．879）。在临床亚型分析中，MICB0106等位基因频率在全结肠炎、中重度UC组及有肠外表现的UC患者中均显著增高（分别为24．4％比8．9％，P=0．000，Pc〈0．001，OR=3．294，95％CI为1．800～6．027；24．1％比8．9％，P=0．000，Pc〈0．001，OR=3．249，95％CI为1．893～5．576；20．5％比8．9％，P=0．002，Pc=0．012，OR=2．626，95％CI为1．418～4．861）。而且MICB0106等位基因频率在男性和年龄≥40岁的患者中比正常组显著增高（分别为22．1％比8．0％，P=0．001，Pc=0．006，OR=3．276，95％CI为1．737～6．178；28．8％比8．3％，P=0．000，Pc〈0．001，OR=4．500，95％CI为2．381～8．504）。结论MICB0106等位基因与湖北汉族人UC存在显著相关性，而且与全结肠炎、中重度UC、肠外表现、男性及年龄≥4JD岁的患者有关，提示携带MICB0106等位基因的个体对UC存在遗传易感性。

MICB基因的克隆表达及其在抗体测定中的初步应用

目的：构建可行的MICB （ major histocompatibility complex class Ⅰ chain-related gene B）基因原核表达系统及蛋白质纯化体系,利用表达纯化蛋白建立ELISA方法初步应用于肾移植患者中MICB抗体的检测。方法外周血RNA经RT-PCR和特异性引物扩增获得MICB基因cDNA, MICB cDNA和原核表达载体pET-28a分别双酶切后连接构建重组表达载体,转染宿主菌E. coli BL21 DE3,IPTG诱导表达。亲和层析的Ni-NTA Spin纯化蛋白质,并通过Western blot鉴定。利用纯化蛋白建立ELISA法检测肾移植患者中MICB抗体。结果构建3个MICB常见等位基因2、3外显子的pET-28a-MICB重组表达体系,经Ni-NTA Spin纯化获得重组的MICB蛋白,Western blot鉴定。利用3个不同MICB蛋白质成功构建了ELISA方法,初步检测24份肾移植患者标本MICB抗体,显示不同的重组蛋白敏感性存在差异。结论本研究建立MICB基因克隆与体外表达技术,鉴定并纯化具有生物活性的蛋白质,同时建立MICB抗体检测的ELISA方法,为进一步研究MICB与移植免疫的关系提供基础资料。

海南汉族人群MICB等位基因多态性与类风湿性关节炎相关性研究

目的研究海南汉族人群MHCI类链相关基因B（MHCclassIchain-relatedgeneB，M1CB）等位基因多态性与类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）的相关性。方法用世界卫生组织推荐的标准盐析法提取外周静脉血DNA，采用PCR-序列特异性引物（PCRsequencespecificprimer，PCR-SSP）和PCR产物直接测序分型（PCR-sequencebasedgenotyping，PCR-SBT）方法对样本MICB基因的多态性进行检测分析。结果RA患者及对照组中共有10种MICB等位基因被检测出，两组中MICB。005：02等位基因频率分布最高，其频率为52．6％比42．0％，但MICB＊002等位基因频率在RA组明显低于对照组（13．1％比25．5％），差异具有统计学意义（P〈0．05），MICB＊014等位基因频率在RA组亦明显低于对照组（8．1％比15．3％），差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论MICB＊002和MICB＊014等位基因与RA的易感性之间存在负相关，可能是RA的保护性基因。