胰高血糖素样肽-1抑制软脂酸诱导的MIN6细胞凋亡

目的探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对软脂酸(PA)诱导的MIN6细胞凋亡及分泌胰岛素功能的影响。方法传代培养处于对数生长期的胰岛β细胞MIN6细胞株分为三组。PA组:加入0.5 mmol/L PA孵育36 h;GLP-1+PA组:加入10 nmol/LGLP-1,12 h后再加入0.5 mmol/L PA继续孵育36 h,期间每12 h加1次相同浓度的GLP-1;对照组:未加GLP-1或PA,其他培养条件相同。MTT比色法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率;放射免疫分析法测定MIN6细胞胰岛素分泌量。结果PA组MIN6细胞凋亡率为(39.41±10.16)%,细胞活力较对照组减少25.8%(P<0.05);GLP-1+PA组MIN6细胞凋亡率为(32.80±8.06)%,细胞活力较PA组增强13.88%(P<0.05),其高糖和低糖状态下胰岛素分泌均明显高于PA组(P<0.05)。结论GLP-1可以抑制PA诱导的MIN6细胞凋亡,同时改善细胞胰岛素分泌功能。

小鼠Reg3α基因cDNA成功转染MIN6细胞株并促其生长

目的建立一过表达Reg3α cDNA的胰岛MIN6细胞株，研究其在低葡萄糖环境中的生长特性。方法将全长Reg3α cDNA插入到质粒载体pcDNA3．1中，并将Reg3α-pcDNA3．1和pcDNA3．1空载体用脂质体法转染胰岛MIN6细胞，分别获得Reg3α cDNA过表达和空载体pcDNA3．1MIN6细胞。应用Real—time PCR和Western blot方法检测这两种细胞在低葡萄糖培养基中Reg3α的表达，并用MTT法测定Reg3α过表达对MIN6细胞生长的影响。结果有三株Reg3α转染的细胞株显示Reg3α的高表达，在空载体转染的MIN6细胞株中未检测到Reg3α的表达，Reg3α mRNA和蛋白水平分别平均升高6～10倍。用Western blot检测发现Reg3α蛋白释放到培养液。采用MTT法测定，与空载体转染的MIN6细胞株相比，三株Reg3α稳定转染细胞株，7d后细胞数目升高2倍。结论本研究结果表明已成功地建立了过表达Reg3α cDNA的胰岛MIN6细胞。Reg3α可能具有内分泌作用，促进胰岛细胞生长。

琼脂糖/聚苯乙烯磺酸微囊化胰β细胞株MIN6体外胰岛素释放反应的研究

本研究应用琼脂糖/聚苯乙烯磺酸(PSSa)微囊化胰β细胞株MIN6作为一种新型人工生物胰岛,采用静态培养胰岛素释放试验和灌流实验,探讨其在体外糖刺激时胰岛素的释放反应.静态培养胰岛素释放试验结果显示,低糖浓度(3.3mmol/L)时胰岛素的分泌释放量为8.824±0.698μU/(100microbeads·h);高糖浓度(16.7mmol/L)刺激时胰岛素的分泌释放量为28.045±4167μU/(100microbeads·h),约为低糖浓度时的3.2倍,有显著性差异(P<0.05).灌流实验结果显示,用16.7mmol/L糖浓度刺激,胰岛素的释放量逐渐增加,约在高糖刺激后50分钟时胰岛素的释放量达到高峰,约为38.66μU/(100microbeads·h);将糖浓度改变为3.3mmol/L,胰岛素的释放量逐渐下降.实验结果表明,琼脂糖/聚苯乙烯磺酸免疫隔离膜微囊化胰β细胞株MIN6作为一种新型人工生物胰岛,具有良好的糖刺激胰岛素释放反应,为进一步进行实验及临床移植的深入研究提供了基本的实验依据.