Tuftsin衍生物TP影响肿瘤相关巨噬细胞MIP-1α分子表达

目的探讨TP对肿瘤相关的趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)表达的影响。方法使用RT-PCR的试验方法,检测小鼠巨噬细胞Ana-1细胞和肿瘤组织中提取的巨噬细胞中MIP-1α的表达;建立小鼠S180肉瘤细胞皮下移植瘤双瘤模型,待肿瘤体积生长至约250 mm3时,将其中一侧建立术后残瘤模型,并开始以8 mg·kg-1剂量的TP给药,隔天1次,给药4次后,分离肿瘤组织,免疫组化检测MIP-1α的表达。结果不同浓度TP对小鼠TAMs的MIP-1α表达较空白对照组明显减少,并呈剂量依赖性;体内试验中,TP处理组的荷瘤小鼠的肿瘤组织MIP-1α与对照组相比表达明显降低,接近于阳性药环磷酰胺组;但是MIP-1α在小鼠Ana-1细胞和TAMs中的mRNA表达量差异没有统计学意义;不同浓度TP对小鼠Ana-1细胞的MIP-1α表达差异也没有统计学意义。结论 TP不能影响小鼠Ana-1细胞系的MIP-1α表达,但TP对肿瘤组织中的巨噬细胞MIP-1α的表达有明显影响;MIP-1α有可能是TP抗癌作用机制的新靶点。

MIP-1α诱导Jurkat细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层能力分析

本研究为探究人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞脑转移发生中枢神经系统白血病的机制及MIP-1α在T-ALL模式细胞Jurkat穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)过程中的作用。应用real-time PCR、siRNA试验、跨内皮迁移试验和细胞黏附试验,分别检测MIP-1α的表达、Jurkat细胞穿透能力、迁移能力和黏附力。结果表明,Jurkat细胞作为研究T-ALL细胞穿过血脑屏障(BBB)机制的模式细胞MIP-1α表达均高于正常人T淋巴细胞以及其他3种T-ALL细胞系(HSB2、CEM、SUP-T1),Jurkat细胞分泌的MIP-1α使其穿过HBMEC单层能力增强。MIP-1αsiRNA干扰后的Jurkat细胞对HBMEC黏附和跨内皮迁移力下降。结论:Jurkat细胞分泌的MIP-1α参与了Jurkat细胞穿过HBMEC单层的过程。

RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MCP-1趋化因子在慢性肝病患者的水平

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化(LC)、乙肝相关肝细胞癌(HCC)患者体内正常T细胞表达和分泌调节活化因子(RANTES)、巨噬细胞炎症蛋白(MIP-1α和MIP-1β)和单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的表达水平。方法收集2010年2月至2011年11月首都医科大学附属北京佑安医院收治的CHB患者(40例)、LC患者(40例)、HCC患者(53例)的血液标本,采用Luminex技术检测血清趋化因子RANTES、MIP-1α、MIP-1β和MCP-1的表达水平,并以25例健康志愿者血液标本作为正常对照。结果趋化因子MIP-1α、MIP-1β和MCP-1在正常对照组表达水平的中位数分别为9.590、106.490和72.330 pg/ml,高于CHB组、LC组和HCC组;趋化因子RANTES在HCC组的表达水平为16 948.440 pg/ml,依次高于正常对照组、CHB组、LC组,差异有统计学意义(α<0.008)。结论趋化因子RANTES的表达水平与乙肝相关HCC的发生关系密切,可以作为HCC发生发展的辅助监测指标。

小鼠MIP1-α重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

目的 :构建小鼠趋化因子 MIP1-α(m MIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达 ,为肝癌基因治疗提供实验基础。 方法 :PCR扩增含有 m MIP1-α的质粒 ,将腺病毒骨架质粒 p Ad Easy- 1以及线性化的重组穿梭质粒 p Track- CMV-m MIP1-α共转化 BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒经过 2 93细胞的包装、扩增和纯化后 ,感染小鼠肝癌细胞株 Hepa1- 6 ,一步法提取细胞总 RNA,RT- PCR检测 m MIP1-α的 m RNA。琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中 m MIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性。 结果 :得到了携带 m MIP1-α的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 1 1 efu/ ml,在感染后的 Hepa1- 6细胞中检测到 m MIP1-α的表达 ,上清中 m MIP1-α的趋化指数为 6 .3。结论 :成功地构建了携带 m MIP1-α的重组腺病毒载体 ,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础。

NF-κB和MIP-1与多形核白细胞在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 :探讨在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中NF κB、MIP 1的变化与多形核白细胞 (PMNs或PMNLs)浸润的关系 .方法 :SD大鼠 84只 ,随机分为对照组 (1 2只 ) ,假手术组(1 2只 ) ,实验组 (包括I/R 1h组、I/R 3h组、I/R 6h组、I/R 1 2h组和I/R 2 4h组 ,每组 1 2只 ) .在相应时间点处死大鼠后 ,取脑 .用ELISA法测定脑组织匀浆中MIP 1的浓度 ;用免疫组化方法检测NF κB和MPO的着色情况 ,并应用计算机图像分析系统进行灰度分析 .结果 :NF κB在再灌注后 1h表达升高 ,3h达高峰 ,2 4h仍处较高水平 ;大鼠脑组织MIP 1表达再灌注后于 1h开始升高 ,1 2h达高峰 ,2 4h有所下降 ,但仍处于较高水平 ,MPO于再灌注 6h开始升高 ,2 4h达高峰 .结论 :NF κB可能通过促进MIP 1表达 。

血清TTF-1、MIP-1α水平与甲状腺乳头状微小癌的关系研究

目的探讨TTF-1、MIP-1α在PTMC诊断中的临床价值,为临床PTMC的诊断提供新途径。方法选择PTC患者42例、PTMC患者45例及TD患者40例做为研究对象,所有患者均经病理确诊。所有患者经病理确诊并入组后,取空腹静脉血,采用酶联免疫法检测血清TTF-1、MIP-1α水平。比较三组患者血清TTF-1、MIP-1α结果差异。结合病理诊断结果,将三组患者的血清TTF-1、MIP-1α水平分别制作ROC曲线,确定三组患者血清TTF-1、MIP-1α的临界限值。根据血清TTF-1、MIP-1α的临界限值,采用不同的组合(血清TTF-1、MIP-1α、血清TTF-1+MIP-1α)对所有患者分别做出PTC、PTMC、TC的诊断结果,计算血清TTF-1、MIP-1α、血清TTF-1+MIP-1α诊断PTMC的灵敏度、特异度和准确度,并比较不同方案的诊断价值。结果三组患者一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。PTC组患者血清TTF-1、MIP-1α水平均明显高于PTMC和TD患者(P<0.05),PTMC组患者血清TTF-1、MIP-1α水平均高于TD组患者(P<0.05)。血清TTF-1指标的ROC曲线左侧拐点为(4.3μg/L),血清MIP-1αROC曲线左侧拐点为(55.6 ng/L)。血清TTF-1+MIP-1α诊断PTMC的灵敏度、特异度均明显高于单纯的血清TTF-1、MIP-1α。结论血清TTF-1、MIP-1α与甲状腺癌变程度关系密切,血清TTF-1联合MIP-1α诊断PTMC具有较高的临床价值,避免了高频超声诊断的设备和操作人员的经验限制,诊断PTMC具有一定的临床价值。

趋化因子IL-8,MCP-1和MIP-1对非小细胞肺癌血管生成的作用和意义

目的:检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中趋化因子白细胞介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)mRNA的表达,分析它们与微血管计数(MVC)的相互关系及其对NSCLC临床病理特征的意义。方法:采用原位杂交法检测40例NSCLC和10例正常肺组织石蜡切片标本中IL-8,MCP-1和MIP-1mRNA的表达情况,采用免疫组织化学法测定上述标本中微血管(MV)计数。结果:40例NSCLC组织中IL-8,MCP-1和MIP-1mRNA的阳性系数均值明显高于10例肺组织对照组,差异有统计学意义,并且随着NSCLC临床病理的改变而出现相应的变化,表现为T3组>T2或T1组,III期组>II期组>I期组,有淋巴结和远处转移组>无转移组,生存时间≤3年组大于生存时间>3年组。IL-8,MCP-1和MIP-1mRNA阳性表达相互之间以及与MVC之间均存在着密切的正相关。结论:上述结果提示NSCLC组织中趋化因子IL-8,MCP-1和MIP-1可能相互协同,共同促进肿瘤血管生成,并影响肿瘤的进展、转移和预后。

E-cadherin、MCP-1和MIP-1β在B16黑色素瘤荷瘤鼠中的表达及意义

目的检测皮肤B16黑色素瘤小鼠体内E-cadherin、MCP-1、MIP-1β的表达,探讨其与树突状细胞在体内迁移过程中的调控的关系。方法取C57纯系小鼠30只,分为12d肿瘤组,25d肿瘤组及正常对照组,每组10只。肿瘤组将B16黑色素瘤细胞人工植入C57小鼠背部皮下,制荷瘤鼠模型,采用免疫组织化学SABC法检测肿瘤病变中心区及交界区皮肤中E-cadherin、MCP-1、MIP-1β表达。结果肿瘤接种后第12天的MCP-1和MIP-1β在淋巴结和肿瘤中心区和交界区表达的面密度和数密度明显增高,分别与对照组和肿瘤第25天组比较差异有显著性(P<0.01)。肿瘤组的E-cadherin在淋巴结和肿瘤组织中表达降低,第25天组尤其明显;第25天组与第12天组E-cadherin表达分布面密度和数密度比较差异有显著性(P<0.01),第12天组和对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论在肿瘤状态下,E-cadherin、MCP-1和MIP-1β有促进树突状细胞向淋巴组织和肿瘤局部迁移和聚集的作用。E-cadherin、MCP-1、MIP-1β的异常表达在皮肤黑色素瘤的恶性进展过程中起重要作用。

逆转录病毒载体介导大鼠乳腺癌细胞共表达MIP-1α和B7-1

目的:建立共表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的大鼠乳腺癌细胞株,并进行体外活性检测。方法:应用含不同选择标记的重组逆转录病毒载体,经1mg/mlG418和2μg/ml puromycin双药物筛选后获得MIP-1α+B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株。RT-PCR、免疫组化检测mMIP-1α的表达,RT-PCR、流式细胞术检测mB7-1的表达;将共表达MIP-1α和B7-1的肿瘤细胞与大鼠脾淋巴细胞混合培养后,MTT法检测淋巴细胞的增殖指数、琼脂糖打孔法检测共表达MIP-1α和B7-1肿瘤细胞对单个核细胞的趋化活性。结果:经脂质体转染包装细胞产生的重组逆转录病毒上清病毒滴度达4.6×107CFU/L。细胞生长曲线显示,重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响。重组逆转录病毒感染的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1有B7-1和MIP-1α mRNA及蛋白的表达。淋巴细胞增殖指数PI值SHZ-88/PLXSN组为(0.76±0.25),SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1组为(1.95±0.31),后者体外刺激淋巴细胞增殖能力增强(P<0.01),SHZ-88/pBabe puro组的趋化指数为(0.99±0.19),mMIP-1α+mB7-1组的为(3.88±0.33),后者显著增强了趋化活性。结论:通过逆转录病毒载体介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株具有招引单个核细胞,并将其激活的体外生物学活性。

PPARγ激动剂对RSV感染的A549细胞MCP-1、MIP-1α、IL-8表达的作用及机制

目的研究A549细胞呼吸道合胞病毒(RSV)感染不同时间后单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、白介素-8(IL-8)在mRNA和蛋白水平的变化,进一步观察15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和罗格列酮干预后MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA表达和蛋白水平的变化,探讨PPARγ激动剂对RSV感染趋化因子表达的影响及机制。方法建立RSV感染的细胞模型,将传代培养的细胞随机分成6组:A组(15d-PGJ2+RSV组)、B组(罗格列酮+RSV组)、C组(RSV组)、D组(PDTC+RSV组)、E组(PPARγ拮抗剂GW9662+罗格列酮+RSV组)、F组(细胞对照组),各组分别在培养12、24、48h收获细胞及上清液待测。应用ELISA检测MCP-1、MIP-1α、IL-8蛋白水平,实时定量RT-PCR检测MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA表达。结果 C组与F组相比,MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA及蛋白的表达均在12h开始升高,其中mRNA表达在24h达高峰,48h有所下降,与12h比较差异无统计学意义(P均>0.05);而蛋白表达在48h达高峰,与12h比较差异有统计学意义(P均<0.05);D组各时间点3种趋化因子蛋白和mRNA表达均明显低于C组(P均<0.05),但仍高于F组(P均<0.05)。A组、B组与C组相比,各时间点MCP-1、MIP-1α、IL-8蛋白及mRNA表达均明显降低(P均<0.01);E组与C组3种趋化因子蛋白及mRNA表达的差异无统计学意义,但仍高于F组(P均<0.05)。结论 RSV感染可导致MCP-1、MIP-1α、IL-8 mRNA及蛋白表达升高;15d-PGJ2、罗格列酮均可抑制上述作用,其作用可被GW9662所阻断;PPARγ激动剂的作用机制与抑制NF-κB通路激活有关。

MIP-1α和MMP-9在鼻息肉中的表达及其临床意义

目的:检测鼻息肉患者中MIP-1α和MMP-9的表达情况及其在鼻息肉发生发展中的作用及意义。方法:选择40例鼻息肉患者的鼻息肉组织和20例鼻中隔偏曲患者需要部分切除的下鼻甲黏膜组织,采用免疫组织化学技术检测鼻息肉组织和下鼻甲组织中MIP-1α和MMP-9的表达情况并进行相关性分析,同时光镜下观察分析两组标本的组织病理学特征。结果:鼻息肉组织中MIP-1α和MMP-9的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。在病例组MIP-1α水平与MMP-9成正相关。结论:MIP-1α和MMP-9在鼻息肉中的高表达,提示两者可能参与了鼻息肉的发病。

小剂量局部胰岛素联合应用重组人表皮生长因子对烧伤大鼠创面MIP-2和MCP-1表达的影响

目的评价小剂量局部胰岛素联合重组人表皮生长因子(rhEGF)对烧伤大鼠创面MIP-2和MCP-1表达的影响。方法 150只成年雄性大鼠建立深II度烧伤模型后随机分为对照组,实验组A和实验组B,每组50只。对照组大鼠创面予生理盐水处理,实验组A大鼠创面予rhEGF处理,实验组B大鼠创面予小剂量局部胰岛素联合rh EGF。同时在实验的3、6、9、12、14 d 5个时点,每组大鼠随机选取10只进行实验。观察各组大鼠创面愈合率,同时通过实时定量PCR检测MIP-2和MCP-1基因的表达并采用Western blot分析MIP-2和MCP-1蛋白表达水平,了解小剂量局部胰岛素联合rh EGF对烧伤大鼠创面MIP-2和MCP-1表达的影响。结果实验组大鼠创面愈合程度和速度较对照组明显,同时实验组B较实验组A创面愈合更快,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠MIP-2和MCP-1基因和蛋白表达量在相同时间点较对照组明显升高,且实验组A大鼠上述基因和蛋白表达量在相同时间点较实验组B明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小剂量局部胰岛素联合rh EGF能够有效地促进烧伤大鼠创面MIP-2和MCP-1的表达,对促进创面的早期愈合意义明显。

趋化因子MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达

本文旨在研究MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2在慢性髓系白血病细胞中的表达,同时观察P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶对MIP-1α和MCP-1及其受体CCR-1和CCR-2mRNA表达的影响。在bcr/abl融合基因阴性和阳性慢性髓系白血病细胞中,采用半定量RT-PCR方法检测MIP-1α、MCP-1、CCR-1、CCR-2mRNA的表达水平。结果表明MIP-1αmRNA和CCR-1mRNA在bcr/abl融合基因阳性细胞中不表达,但在bcr/abl融合基因阴性细胞中表达,而MCP-1mRNA和CCR-2mRNA在bcr/abl融合基因阳性和阴性细胞中均不表达。当P210bcr/abl融合蛋白中酪氨酸激酶被抑制后,MIP-1α和CCR-1的mRNA表达水平恢复至正常水平。结论:P210bcr/abl融合蛋白抑制慢性髓系白血病细胞中MIP-1α和CCR-1mRNA的表达,但对MCP-1和CCR-2mRNA的表达无影响。

共染MIP-1α与B7-1诱导乳腺癌大鼠免疫应答能力的研究

目的探讨共染MIP-1α与B7-1诱导乳腺癌大鼠的免疫应答能力。方法采用SHZ-88乳腺癌细胞造模；每日观察SD大鼠接种乳腺癌细胞后有无肿瘤生长；将荷瘤大鼠随机分成对照组、MIP-1α组、B7-1组和联合组注射对应的转基因细胞进行治疗，分剐在1～4用观察肿瘤体积变化和生存时间，收集大鼠外周血栓测CD4＋、CD8＋百分比和CD4＋／CD8＋比值以及白细胞介素2（IL-2）、人γ干扰素（IFN-γ）水平并进行比较。结果对SD大鼠分别接种SHZ-88、SHZ-88／MIP-1α、SHZ-88／B7-1及SHZ-88／MIP-1α＋B7-1细胞10d后，各组的致瘤率分别为100％、20％、30％及0％；对照组、MIP-1α组、B7-1组和联合组注射对应的转基因细胞治疗后，联合组的肿瘤体积在1～4周均明显小于其他组，生存时间明显长于其他组，外周血CD4＋、CD8＋百分比和CD4＋／CD8＋比值以及IL-2、IFN-γ水平均明显高于其他组，以上比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论共染MIP-1α与B7-1，可诱导乳腺癌大鼠机体的免疫应答能力，起到抗肿瘤的作用。

转染MIP-1α和B7-1基因增强小鼠的抗淋巴瘤效应

目的观察转染趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤的效应。方法将MIP-1α和B7-1基因慢病毒重组载体转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞,应用RT-PCR检测MIP-1α和B7-1基因mRNA表达,Western blot法检测MIP-1α和B7-1蛋白表达;转基因EL-4细胞注入小鼠右腋皮下,观察成瘤情况;灭活的转基因EL-4细胞注入成瘤小鼠体内,观察其增强小鼠抗淋巴瘤效应。结果 RT-PCR检测发现EL-4/MIP-1α+B7-1细胞内有MIP-1α及B7-1mRNA表达,Western blot显示MIP-1α及B7-1蛋白表达;MIP-1α组、B7-1组较对照组成瘤时间延长,成瘤率降低,肿瘤平均体积较小,而联合组成瘤性消失;MIP-1α和B7-1治疗组的肿瘤平均体积、重量及肿瘤器官转移率明显小于对照组(P<0.05),而联合组的肿瘤平均体积及重量明显小于MIP-1α和B7-1组(P<0.05),而且联合组小鼠平均生存期,均较单基因组、对照组明显延长(P<0.05)。结论转染MIP-1α和B7-1基因能够明显增强小鼠机体抗淋巴瘤效应,明显延长荷瘤小鼠的平均生存期,为淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。

MCP-1和MIP-1α在牙龈炎和牙周炎患者体液中的表达水平及意义

目的分析巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在健康受试者、牙龈炎患者以及牙周炎患者龈沟液、唾液及外周血清的表达水平,评价MIP-1α、MCP-1在牙周炎病理进程中的意义。方法按标准纳入健康受试者(20人)、牙龈炎患者(20例)以及牙周炎患者(20例),分别记录其年龄、性别、探诊深度(PD)、菌斑指数(PI)、附着丧失(CAL)以及出血指数(BOP)。检测其唾液、龈沟液及外周血清中MIP-1α、MCP-1表达水平。结果各组受试者年龄分布、性别构成比间比较差异无统计学意义(P>0.05)。牙龈炎组各项临床指标高于健康组,牙周炎组高于牙龈炎组,差异有统计学意义(P<0.05)。牙周炎组龈沟液及唾液中MIP-1α和MCP-1浓度均高于其他组别(P<0.05)。牙龈炎组患者龈沟液MIP-1α、MCP-1以及唾液MIP-1α浓度均高于健康组(P<0.05)。各组间血清中检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论局部组织内MIP-1α、MCP-1随着牙周炎症进展而升高,且与牙周炎各临床指标呈正相关。

PSGL-1基因敲除小鼠血中MIP-1γ和TNF-α的表达

目的研究PSGL-1缺失对遗传基因工程小鼠外周血血常规的影响,并检测外周血中炎症因子IGFBP-6、TNF-α和MIP-1γmRNA表达水平。方法用血常规检测方法检测正常C57/BL/6小鼠和PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠(PSGL-1-/-小鼠)的外周血中血常规的差异;其次,提取两种鼠的血液的mRNA,逆转录为cDNA,采用real-time PCR方法,检测C57小鼠与PSGL-1-/-小鼠外周血中炎症因子TNF-α和MIP-1γmRNA的差异。结果与对照组C57小鼠相比,PSGL-1-/-基因工程小鼠在12周龄时外周血中中性粒细胞(*P<0.05)、淋巴细胞(**P<0.01)和白细胞细胞(***P<0.001)总数显著增加炎症因子TNF-α以及MIP-1γ表达增加(P<0.05)。结论 PSGL-1的缺失改变了小鼠细胞因子并影响了外周血的血细胞组成,MIP-1γ和TNF-α炎症因子上调,有可能影响了小鼠的免疫功能。

MIP-1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响

目的 :探讨MIP - 1β对长期培养体系中造血祖细胞增殖的影响。方法 :在骨髓长期培养的第 3、4、5周 ,分别加入MIP - 1β ,每周半换液时换出上清进行细胞计数 ,做CFU -GM培养。第 6周做3HTdR自杀实验 ,检测CFU -HPP。结果 :加MIP - 1β组上清中有核细胞数 ,CFU -GM数较对照组略有增加 ,但无显著差异(P >0 .0 5 ) ;第 6周MIP - 1β组造血祖细胞3HTdR自杀率较对照组明显增高。 (P <0 .0 5 )。CFU -HPP与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :MIP - 1β可解除骨髓基质层的内源性抑制活性 。

趋化因子MCP-1、MIP-lα、RANTES与自身免疫性疾病

趋化因子是一组复杂的小分子量分泌蛋白超家族。自身免疫性疾病的发病机制目前还尚未明了,近年来研究显示在广泛的炎症和自身免疫性疾病中已经观察到上调或下调趋化因子和趋化因子受体的表达,能够影响疾病的易感性、发展和严重性。本文对趋化因子的概况、MCP-1、MIP-lα、RANTES结构与生物学功能以及三者在自身免疫性疾病中的作用作一综述。

重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物扩增获得目的基因小鼠MIP-1α和B7-1基因的全长编码序列cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析。MIP-1α和B7-1目的基因质粒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,采用Western Blot法检测其蛋白表达,实时荧光定量PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度。结果成功构建了重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,实时荧光定量PCR证实MIP-1α、B7-1基因重组慢病毒载体的滴度均达2.00E+8 TU/mL。结论本研究成功构建并包装出高滴度的小鼠MIP-1α和B7-1基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础。