miR-152靶向Mirk/Dyrk1B调控人卵巢癌干细胞紫杉醇敏感性的研究

目的探讨miR-152对人卵巢癌干细胞球紫杉醇敏感性的影响及可能的机制。方法分离培养人卵巢癌干细胞球,构建miR-152的差异表达体系,用CCK-8法检测紫杉醇作用下卵巢癌干细胞存活率;用荧光素酶报告基因系统鉴定miR-152与Mirk/Dyrk1B的靶向调控关系;蛋白印迹检测改变miR-152表达水平对Mirk/Dyrk1B及耐药相关蛋白的影响。结果过表达miR-152或降低Mirk/Dyrk1B表达水平可增强人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。miR-152能够特异性结合Mirk/Dyrk1B 3’-UTR区域。miR-152与Mirk/Dyrk1B差异表达影响人卵巢癌干细胞球耐药相关蛋白的表达水平。结论 miR-152可能通过靶向调节Mirk/Dyrk1B影响人卵巢癌干细胞球对紫杉醇的敏感性。

K^+通道基因MIRK在网纹甜瓜植株中的表达分析

在网纹甜瓜(Cucumis melovar.reticulatus Naud.)叶片中克隆了一个cDNA片段,片段长1 330 bp。这段cDNA序列及由此推测的氨基酸序列分析和多序列比对表明扩增的片段是编码K+通道MIRK(Melon Inward Rectifying K+Channel)基因的5′端。由此cDNA片段推测的氨基酸序列包含了6个跨膜片段S1到S6,其间有一个对离子选择性有重要作用的特征序列结构GYGD(Gly-Tyr-Gly-Asp)。进化树分析显示MIRK属于KAT1亚家族,和在葡萄叶片中克隆的K+通道SIRK最相近。半定量RT-PCR试验表明,MIRK在甜瓜植株中根、茎、叶、花、果实等各器官中均有表达,主要在叶片和初期发育的果实中表达,在雌花和茎中也有表达,在根中的表达量最低。MIRK在甜瓜不同器官中的表达模式显示MIRK可能在甜瓜植株发育过程中起重要作用。

人工改造甜瓜钾离子通道基因△KAT2/MIRK转拟南芥的生理特性分析

K＋通道是介导植物K＋吸收转运的主要途径之一。甜瓜K＋通道MIRK对外源Na＋敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外（即S5-P-S6）。为了验证MIRK受Na＋抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na＋抑制的同源K＋通道基因KAT2孔道区替换到MIRK序列上,生成人工改造甜瓜K＋通道基因△KAT2/MIRK。电生理实验结果显示△KAT2/MIRK仍保持了MIRK介导K＋的属性,但其内向电流则不受外源Na＋的抑制。将MIRK和△KAT2/MIRK分别转化到拟南芥K＋通道KAT1突变体kat1中,抗性筛选和PCR检测结果表明成功获得p35S：：MIRK-kat1和p35S：：△KAT2/MIRK-kat1转基因植株。分别用50、100 mmol/L的Na Cl溶液处理转基因拟南芥和kat1突变体,发现MIRK及△KAT2/MIRK在kat1中的过表达可以介导K＋内流,并参与植株对盐胁迫的响应。

人工改造甜瓜钾离子通道基因ΔAT2/MIRK转拟南芥的生理特性分析

K^+通道是介导植物K^+吸收转运的主要途径之一。甜瓜K^+通道MIRK对外源Na^+敏感,生物信息学分析其敏感位点可能位于孔区外(即S5-P-S6)。为了验证MIRK受Na^+抑制位点,本研究将拟南芥中不受Na^+抑制的同源K^+通道基因KAT2孔道区替换到MIRK序列上,生成人工改造甜瓜K^+通道基因ΔAT2/MIRK。电生理实验结果显示ΔAT2/MIRK仍保持了MIRK介导K^+的属性,但其内向电流则不受外源Na^+的抑制。将MIRK和ΔAT2/MIRK分别转化到拟南芥K^+通道KAT1突变体kat1中,抗性筛选和PCR检测结果表明成功获得p35S::MIRK-kat1和p35S::ΔAT2/MIRK-kat1转基因植株。分别用50、100mmol/L的NaCl溶液处理转基因拟南芥和kat1突变体,发现MIRK及ΔAT2/MIRK在kat1中的过表达可以介导K^+内流,并参与植株对盐胁迫的响应。

转甜瓜钾离子通道基因MIRK拟南芥植株的耐盐性分析

植株的钾营养状况与其耐盐性密切相关,钾离子通道是植物钾吸收转运的主要途径之一。为了研究钾离子通道在植株耐盐性方面所起的作用,我们利用FloralDip法将甜瓜钾离子通道基因MIRK转入拟南芥,Kan检测和PCR结果表明MIRK已经整合到拟南芥基因组中。以不同浓度的NaCl溶液处理转化植株(T3),并测定其耐盐性相关指标。结果分析表明,转基因植株的钾钠含量比值K+/Na+约为对照植株的2.3倍,相对电导率仅为对照植株的57.7%,相对含水量和Fv/Fm值均高于对照植株,叶绿素含量为对照植株的1.2倍。以上差异均达显著水平。MIRK的转入在一定程度上提高了拟南芥的耐盐能力。

Mirk/Dyrk1b在上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

目的:探讨Mirk/Dryk1b(Minibrain-related kinase/Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase1B)在卵巢组织中的表达及其临床意义。方法:利用免疫组化检测Mirk/Dyrk1b在30例上皮性卵巢癌、20例上皮性卵巢囊腺瘤、10例正常卵巢组织中的表达。结果:Dyrk1b在上皮性卵巢癌中的表达明显高于上皮性卵巢囊腺瘤及正常卵巢组织(P<0.05),而其在正常的卵巢组织中几乎不表达;Dyrk1b的阳性率与卵巢癌的组织学分化程度有明显的相关性(P<0.01),与卵巢癌的临床分期、有无淋巴转移等无明显相关性(P>0.05)。结论:Dyrk1b在上皮性卵巢癌中高表达,提示其可能参与了肿瘤的发生和发展,并有望成为临床早期诊断的肿瘤标志物和新的卵巢癌治疗的靶基因。

甜瓜钾离子通道MIRK受Na~＋抑制的分子机理

甜瓜钾离子通道MIRK受Na+抑制,本研究通过钾离子通道氨基酸序列比对,发现MIRK与其他钾离子通道在3个位点上有较明显差异。采用基因定点突变方法获得3个MIRK突变体,将突变体在非洲爪蟾卵母(Xenopus laevis oocytes)细胞中表达后利用双向电压钳技术研究了Na+对MIRK通道电流的调整作用,以探索MIRK受Na+抑制的可能氨基酸位点。结果显示,MIRK受外界Na+的抑制不是由其单一氨基酸引起,可能涉及MIRK第232～234位丝氨酸、赖氨酸、谷氨酰胺及第241位天冬酰胺等多个氨基酸的共同调节。

Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达及其临床意义。方法利用免疫组化检测Dyrk1B在60例宫颈癌组织、60例宫颈癌癌旁组织和60例正常宫颈组织中的表达，分析Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达状况以及与宫颈癌临床参数的关系。结果Dyrk1B在宫颈癌组织中的表达（60／60，100％）明显高于癌旁组织（26／40，65％）和正常宫颈组织（16／40，40％），三组间比较差异有统计学意义（χ2=88．21，P〈0．01）。Dyrk1B的强阳性率与宫颈癌的组织学分化程度有明显相关性（P〈0．05），与宫颈癌患者的年龄、临床分期和有无淋巴转移等无明显相关性（P〉0．05）。结论Dyrk1B在宫颈癌中高表达，提示其可能参与了肿瘤的发生和发展，并有望成为宫颈癌早期诊断的标志物和治疗的靶基因。