叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28的抑制作用

目的体外实验初步探讨叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28生长的影响。方法通过集落形成试验观察叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28集落形成的影响;将不同浓度叶下珠醇提物作用于MKN28细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定叶下珠醇提物对MKN28细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测叶下珠醇提物作用48 h后MKN28细胞的凋亡情况。结果在2 mg/mL和1 mg/mL 2个浓度下叶下珠醇提物对MKN28胃癌细胞集落形成具有不同程度的抑制作用,浓度大者,抑制作用更强。MTT法测定细胞增殖抑制率结果表明,叶下珠醇提物对MKN28细胞增殖有抑制作用,其抑制效应具有浓度和时间依赖性。流式细胞检测提示叶下珠醇提物能诱导人胃癌细胞MKN28发生凋亡。结论叶下珠醇提物能抑制人胃癌细胞MKN28增殖,凋亡是其作用机制之一。

加热诱导人胃癌细胞株MKN28凋亡的动力学研究

目的 观察加热诱导人胃癌细胞株MKN 2 8凋亡的最佳强度、凋亡细胞的特点及细胞周期的变化。方法 采用丫啶橙 (AO )荧光染色、流式细胞术和电镜观察不同时间长度的加热诱导人胃癌细胞株MKN 2 8的凋亡。结果 经 43℃的加热后 ,MKN 2 8细胞的AO染色阳性率随着加热时间延长而上升 ,且凋亡的诱导在 2h内即可启动。流式细胞术提示细胞周期亦发生变化 ,G1期细胞从 6 0 .1%下降至 42 .9% ;S期从 2 8.5 %上升至 40 .3 % ;G2 /M期细胞从 11.4%上升到 16 .8% ;并见凋亡特有的AP峰。超微结构显示 :细胞变圆 ,细胞核浓缩 ,染色质趋边缘化分布。结论 加热可诱导人胃癌细胞株MKN 2 8凋亡 ,且凋亡的诱导在较短时间内即可完成。

胃癌细胞MKN28(p53-/-)对NSAIDs诱导凋亡敏感性的研究

目的 1.明确非甾体消炎药 (NSAIDs)能否诱导p5 3基因突变的胃癌细胞MKN2 8凋亡。 2 .明确NSAIDs对MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl 2、bax表达的调控。方法 1.通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响。 2 .应用丫啶橙染色、Annexin V/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡。 3.应用RT PCR(逆转录 聚合酶链反应 )方法检测bcl 2、bax基因水平的改变。结果 1.NSAIDs药物吲哚美辛 (Indo)和阿斯匹林 (Asp)对胃癌细胞株MKN2 8均有生长抑制作用 ,且呈时间 /浓度依赖性增强。 2 .在Indo 80 0 μmol/L、Asp8mmol/L作用 4 8～ 96h后 ,MKN2 8细胞凋亡数量稍有增多 ,但不具有统计学意义。 3.随着药物作用时间的延长 ,MKN2 8细胞的bcl 2基因mRNA表达逐渐减弱 ,bax基因表达逐渐增强。结论 1.NSAIDs可抑制MKN2 8胃癌细胞株增殖。 2 .NSAIDs不能诱导p5 3基因突变的MKN2 8胃癌细胞株发生显著的凋亡 ,提示p5 3基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡。 3.NSAIDs可使MKN2 8细胞凋亡相关基因bcl

EGCG对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法:Western blot检测EGCG对EZH2蛋白表达的影响;阿霉素诱导经EGCG处理的MKN28细胞衰老,衰老相关--半乳糖苷酶(senescence associated--galactosidase,SA--gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞核中衰老相关异染色质灶(senescence-associated heterochromatic foci,SAHF)的形成;噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术检测EGCG对MKN28细胞生长和周期的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化.结果:EGCG可明显抑制EZH2蛋白表达,经EGCG处理的MKN28细胞在阿霉素诱导下SA--gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于阿霉素组和EGCG组,分别为72.16%±4.03%、34.42%±7.06%、15.40%±1.70%和86.44%±4.33%、47.73%±3.03%、80.28%±1.24%;与空白对照组相比,经不同浓度EGCG处理的MKN28细胞其周期G0/G1比例以及生长抑制率会随浓度的增高而增大(P<0.05),在阿霉素的诱导下此趋势更为明显.结论:EGCG可通过抑制EZH2表达来促进阿霉素对MKN28细胞的衰老诱导作用.

LGR5 shRNA真核表达载体的构建及在MKN28细胞的干扰效果检测

构建并鉴定LGR5的shRNA真核表达载体,研究其对胃腺癌细胞LGR5基因表达的抑制作用.根据GenBank数据库提供的LGR5cDNA序列,选择设计一段靶向LGR5的shRNA序列,经退火成互补双链,克隆到质粒pGPU6/GFP/Neo中,构建重组载体并测序鉴定.将构建成功的特异性表达载体(pGPU6/GFP/Neo-LGR5)转染人胃腺癌细胞系后,应用荧光显微镜分析转染效率.利用荧光实时定量PCR对细胞内源性LGR5的表达进行检测.测序结果表明:靶向LGR5的重组pGPU6/GFP/Neo-LGR5载体构建成功.荧光实时定量PCR结果显示:与对照组相比,LGR5shRNA真核表达载体可以使胃腺癌细胞中LGR5的mRNA水平明显降低78.96%(P<0.01).本工作可以为进一步研究LGR5在胃癌发生发展中的作用提供帮助.

OPN基因沉默抑制MKN28细胞生长、侵袭及凋亡

目的检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人胃癌细胞MKN28生长、侵袭及凋亡的影响。方法利用脂质体转染的方法 ,进行胃癌转移相关基因骨桥蛋白(OPN)的siRNA,并通过荧光定量PCR以及免疫荧光的方法 ,进行siRNA效果鉴定。根据siRNA的抑制效果,将细胞分为正常对照组、非特异干扰组、特异干扰24h组、特异干扰36h组和特异干扰48h组,比较对照组与不同siRNA作用时间组的细胞增殖、细胞凋亡、迁移黏附能力的改变。结果 siRNA作用48h组,OPN的表达最低;相应地,其细胞活力降低,增殖抑制率达30.20%,迁移黏附能力降低,基质膜上的细胞数目明显减少[对照组与OPN干扰组比较:(42.0±9.4)vs(21.8±6.9),P<0.01],细胞对基底膜基质和纤维连接蛋白的黏附百分比明显降低[对照组与OPN干扰组比较:基底膜基质,(41.5±8.4)%vs(20.5±4.5)%;纤维连接蛋白,(25.3±4.5)% vs(14.6±2.5)%],凋亡增加。结论 OPN基因沉默能有效抑制人胃癌细胞MKN28的生长、侵袭,并促进凋亡的发生。

Hedgehog信号通路在胃癌细胞中活化并通过GLI1促进MKN28细胞增殖

目的研究Hedgehog：（HH）信号通路在胃癌细胞中的活化形式及其转录因子GLI1对胃癌细胞增殖和体外成瘤能力的影响。方法通过反转录PCR分析HH通路相关组成分子在7株细胞系中的表达情况．化学合成针对HH信号通路转录因子GLI1的siRNA并转染胃癌MKN28细胞。通过CCK8法和体外克隆形成实验．观察GLII siRNA转染胃癌MKN28细胞后的细胞增殖能力和克隆形成能力的变化。结果在不同胃癌细胞株中．HH信号通路各相关基因的表达情况存在差异，SHH在6株胃癌细胞系中均表达上调．PTCH在KATOⅢ细胞系、SUFU在MKN28和KATOⅢ表达下调。转染GLI1 siRNA后，MKN28细胞中GLI1 mRNA表达受到明显抑制；经GLI1 siRNA作用的MKN28细胞生长明显缓于阴性对照和未处理组（P=0．014），克隆形成数目及体外克隆形成能力降低（P〈0．001）。结论HH信号通路在胃癌细胞系中被普遍激活，HH信号通路活化后可通过转录因子GLI1促进MKN28细胞增殖．

热疗对人胃癌细胞MKN28的细胞周期及节律基因Bmall影响的实验研究

目的研究加热对胃癌MKN28细胞周期变化是否与节律基因Bmall表达相关，为胃癌择时热疗提供理论依据。方法体外复苏和培养胃癌细胞MKN28；对照组37℃下培养，实验组43qC分别加热0．5h、1.0h和1．5h，用显微镜观察细胞形态变化，采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率；采用流式细胞术检测细胞周期分布的变化；采用实时定量逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测Bmall基因表达变化。结果加热后细胞形态发生显著变化，MTT实验提示37℃加热对细胞生长无明显抑制，细胞43℃热疗0．5h、1．0h和1．5h后细胞抑制率分别为（21．76±4．36）％、（25．30±4．36）％和（27．62±3．78）％，处理后细胞的增殖均受到抑制且抑制趋势具有时间依赖性；流式细胞术显示43℃加热1h后GO^G1最短而G2／M最长，同时实时定量RT-PCR结果显示BmallmRNA表达最低，细胞周期GO-G1变化规律和BmallmRNA变化规律一致。结论热疗可改变胃癌细胞周期及钟基因Bmall表达，提示择时执疗的可行件．

RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

[目的]研究RIN1过表达对人胃腺癌MKN28细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。[方法]①采用Western blot法和免疫荧光法检测RIN1在MKN28细胞中表达;②采用Burd-U标记检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞增殖能力变化;③采用Transwell法、细胞划痕法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞侵袭和迁移能力变化;④采用AV/PI染色法、Hoechst染色法检测MKN28细胞高表达RIN1后细胞凋亡情况。[结果]①RIN1在MKN28细胞中呈高表达,表达量是空载对照组的3.22倍,且主要分布在细胞质中;②Burd-U染色结果显示,RIN1高表达MKN28细胞的阳性率显著性升高,与空载对照组相比为75.6%±5.4%vs 25.6%±1.1%(P<0.01);③RIN1高表达MKN28细胞的侵袭和迁移能力明显增强,与空载对照组相比分别为122.0±7.0 vs 65.00±2.52(P<0.01)和54.22%±3.45%vs 38.6%±2.45%(P<0.01);④RIN1高表达MKN28细胞株细胞凋亡数显著性减少,与空载对照组相比为21.63%±2.60%vs 8.07%±1.60%(P<0.01)。[结论]RIN1过表达促进MKN28细胞增殖、侵袭和迁移,抑制MKN28细胞凋亡;RIN1可能是介导胃癌发生的癌基因之一。

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体诱导胃癌细胞株MKN28细胞凋亡及机制探讨

目的探讨肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制。方法采用MTT法培养、分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。

热疗合用顺铂的体外热动力学研究

用ＭＴＴ比色法进行热疗联合顺铂对人胃癌细胞ＭＫＮ２８细胞毒作用的动力学研究发现，随着温度的升高和加温时间的延长，细胞毒作用增强；４３℃３０分钟以上的热疗有较强的细胞毒作用；４３℃３０分钟以下的热疗作用较弱，与顺铂合用有明显的协同作用，二者同时合用的效果优于热疗后化疗或先化疗后热疗。

热疗和顺铂合用诱导人胃癌细胞株MKN_（28）凋谢的研究

采用体外细胞毒试验（ＭＴＴ法），观察热疗与顺铂合用对人胃癌细胞株ＭＫＮ２８的细胞毒作用。结果显示，单独热疗组在４３℃以上作用明显，较低温度热疗联合顺铂有明显协同作用。超微结构的变化表明，其细胞毒作用与诱导细胞凋谢有关。

TRAIL途径在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

背景与目的:探讨TRAIL途径在维生素E琥珀酸酯(VES)所诱导的人胃癌MKN28细胞凋亡过程中的作用。材料与方法:人胃癌MKN28细胞,分为VES不同浓度(5、10、20μg/ml)作用的3个实验组,和溶剂对照组(乙醇),共4组。各组受试物作用细胞24h后,采用DAPI染色法观察VES诱导细胞凋亡的情况;采用WesternBlot分析VES各实验组不同作用时间(0、6、12、18、24h)对MKN28细胞的TRAIL相关蛋白(DR4、DR5、DcR1和DcR2)表达的影响。结果:VES明显诱导MKN28细胞凋亡,5、10、20μg/ml实验组VES作用MKN28细胞12h,其DR4和DR5表达增强,而DcR1和DcR2的表达下降;当10μg/ml浓度组VES作用细胞时,随着时间的延长,DR4和DR5的表达逐渐增强,12h达到峰值。结论:TRAIL途径可能参与了VES诱导的MKN28细胞凋亡。

Twist基因转染胃癌细胞对VEGF表达的影响

①目的研究Twist基因转染人胃癌细胞株MKN28对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。②方法利用DNA的限制性内切酶双酶切技术鉴定重组质粒PCDNA3.1-Twist、脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达Twist蛋白的Twist-MKN28(PCD-NA3.1-Twist转染的MKN28胃癌细胞株)细胞模型;采用Western blot检测细胞中Twist的表达;采用ElISA法检测细胞上清液中VEGF的蛋白表达量;采用半定量逆转录多聚酶链反应RT-PCR技术检测细胞中VEGF的mRNA表达量。③结果阳性质粒组Twist-MKN28细胞的Twist蛋白表达强于空白质粒组PCDNA3.1-MKN28和未转染组MKN28;Twist-MKN28组细胞上清液VEGF蛋白分泌明显增加,与PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较差异有显著性(P<0.05),Twist-MKN28组细胞VEGF mRNA半定量结果和MKN28组、PCD-NA3.1-MKN28组比较,其表达量分别增加28.3%和26.5%,而PCDNA3.1-MKN28组和MKN28组比较无明显改变。④结论 Twist可促进人胃癌细胞株MKN28中VEGF的表达。

新基因C1orf63功能的初步研究

目的检测C1orf63基因在肝癌和癌旁组织中的定位,以及C1orf63在多种人肝癌细胞系和人胃癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平;检测干涉C1orf63后对人胃癌细胞MKN28的细胞周期的影响。方法免疫组化染色法检测C1orf63基因在组织中的定位;Real-time PCR和Western blot分别检测C1orf63基因在细胞中的表达;脂质体转染法将干涉片段转染至MKN28细胞中,Real-time PCR和Western blot法筛选有效干涉片段;流式细胞术检测C1orf63干涉后对MKN28细胞的细胞周期的影响。结果 C1orf63在肝癌和癌旁组织细胞中都有胞浆表达,在MKN28细胞中表达量较高,在MKN45细胞中表达量较低;成功筛选出C1orf63基因的有效干涉片段;C1orf63干涉后,胃癌细胞MKN28发生G1期阻滞,经统计学分析,C1orf63干涉后MKN28细胞增殖指数降低(P<0.05)。结论 C1orf63在人肝癌和癌旁组织细胞胞浆中都有表达,在MKN28细胞中表达量最高;干涉C1orf63基因后,可使MKN28细胞发生G1期阻滞,为该基因功能的后续研究奠定了基础。

叶下珠醇提物对人胃癌细胞的抑制作用

目的体外实验初步探索叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28增殖、迁移及迁移能力的影响。方法不同质量浓度的叶下珠醇提物作用于人胃癌细胞MKN28,MTT法测定其对MKN28的增殖抑制率,细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 MTT法结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28的增殖有明显抑制作用,并且呈现质量浓度和时间依赖性;细胞划痕实验结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28迁移能力有明显抑制作用;Transwell小室侵袭实验结果显示叶下珠醇提物对人胃癌细胞MKN28侵袭能力有明显抑制作用。结论叶下珠醇提物能有效抑制人胃癌细胞MKN28的增殖、侵袭及迁移。

PDCD5和TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨PDCD5及TRAIL对胃癌细胞株MKN28体外诱导凋亡的作用及机制。方法培养,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期.AO/EB染色进行观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞增殖,并可诱导凋亡。PDCD5对MKN28细胞抑制增殖、诱导凋亡作用不明显。PDCD5、TRAIL联合应用对MKN28细胞有显著的抑制增殖、诱导凋亡作用。两者具有协同作用。结论 TRAIL对MKN28细胞株有一定程度的凋亡诱导作用。PDCD5对MKN28细胞的凋亡作用不明显。TRAIL联合PDCD5可以高效诱导MKN28细胞凋亡。

TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究TRAIL对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制,并研究此过程中Caspase-3的表达规律及与凋亡效应的相关性。方法培养细胞,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,细胞免疫组化检测细胞Caspase-3的表达水平,AO/EB染色观察凋亡细胞。结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡。细胞阻滞于G0/G1期,Caspase-3在MKN28细胞中低表达,经TRAIL处理细胞后高表达。AO/EB染色后可见典型细胞凋亡特征。结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性。TRAIL通过上调Caspase-3的表达,阻滞细胞周期,诱导MKN28细胞的凋亡。

不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物表达与腹膜转移潜能相关的体外研究

目的比较不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达及其活性与腹膜转移潜能的关系。方法采用ELISA和Western印迹方法,比较不同胃癌细胞系uPA表达的差异,并测定其活性。在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间,在显微镜下直接计数与间皮细胞黏附的胃癌细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果4株胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)的uPA表达以SGC7901最高,uPA活性以MKN45最高,AGS两者皆最低。MKN45的黏附能力明显强于MKN28(P<0.05)、SGC7901(P<0.05)和AGS(P<0.01),但其迁移和侵袭能力与SGC7901和MKN28相比差异无统计学意义;而AGS在3方面均明显弱于其他3株细胞。结论4株胃癌细胞uPA表达量及其活性差异较大,并且与其腹膜转移潜能呈正相关。

更正声明

本刊2020年第27卷第8期596-604页《维生素E琥珀酸酯促进人胃癌MKN28细胞凋亡机制研究》一文,因作者校对疏漏,将第三作者姓名写为“王奕丹”,现更正为“王弈丹”。