青蒿琥酯对人胃腺癌MKN45细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用

目的研究青蒿琥酯(ART)对人胃腺癌MKN45细胞株的体外增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法以不同浓度的ART作用于体外培养的人胃腺癌MKN45细胞株,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法检测不同浓度的ART作用于MKN45细胞株时凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶9(caspase-9)和半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)等表达情况。结果 MTT实验显示,ART作用48 h后对MKN45细胞增殖有显著抑制作用,抑制作用随着药物浓度的增加而递增(P<0.05),IC50值为13.41μmol.L-1。13.41μmol.L-1ART对MKN45细胞增殖存活有明显的抑制作用,且对细胞抑制作用与药物作用时间和浓度呈正相关(P<0.05)。随着ART浓度的增加,ART对MKN45细胞凋亡率逐渐升高(P<0.05)。ART使MKN45细胞Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax、caspase-9及caspase-3蛋白表达明显增高,并随药物浓度的增加,其对凋亡相关蛋白表达的调控作用也明显增强。结论 ART能体外抑制人胃腺癌MKN45细胞株的生长并诱导细胞发生凋亡。

流式细胞检测高压CO_2对胃癌MMP2和MMP9水平的影响

目的:探讨高压二氧化碳(CO2)对胃癌细胞腹腔侵袭转移能力的影响。方法:体外培养高侵袭力人胃癌MKN45细胞株,在高压CO2(25 mmHg)及不同持续时间(1、2、3 h)干预后,应用流式细胞技术,检测其MMP2和MMP9的表达水平变化。结果:高压CO2作用后胃癌MKN45细胞株MMP2和MMP9蛋白表达有所变化。与常规细胞培养比较,MMP2和MMP9表达差异较为明显(P<0.001,P<0.01)。结论:CO2对胃癌细胞的侵袭能力会产生一定的影响,高压CO2环境对胃癌细胞的侵袭能力影响较大。

顺铂对人胃癌细胞系p53及其异构体△133p53蛋白表达的影响

目的探讨顺铂对MKN45胃癌细胞系p53及其异构体△133p53蛋白表达的影响及临床意义。方法 PRMI1640血清培养的MKN45胃癌细胞系分为不同浓度梯度顺铂实验组及未加药物对照组。应用免疫细胞化学法检测p53蛋白表达情况。结果免疫细胞化学结果显示DDP组药物血清作用后,△133p53随着药物浓度增加,表达呈减少趋势,△133p53在胃癌组织中的表达呈负相关关系(P<0.01)。结论在顺铂诱导胃癌细胞系MKN45生长抑制的实验中,△133p53异构体蛋白表现出与野生型p53蛋白相反的趋势,并提示△133p53异构体蛋白本身可以作为肿瘤生物学行为的重要预测因子。

双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对不同胃癌细胞抑制作用的比较

目的比较肝细胞生长因子第一环状结构域基因(hepatocyte growth factor kringle 1,HGFK1)溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MGC803的抑制杀伤效果。方法以野生型腺病毒(AD5-EGFP)和空载体双靶向腺病毒(TH-AD-EGFP)为对照组,以双靶向HGFK1溶瘤腺病毒(TH-AD-HGFK1-EGFP)为试验组在感染复数(MOI)为100的条件下分别感染这三种胃癌细胞,测定其在72小时的细胞生存率状况(CCK8试验),并比较三种胃癌细胞试验组的差异。结果试验组双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞的72小时细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.001),MKN45试验组明显低于SGC7901和MGC803试验组(分别是P=0.004和P=0.002)。而SGC7901试验组和MGC803试验组之间没有明显差别(P=0.599)。结论双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞SGC7901、MKN45、MGC803均具有抑制杀伤作用,但对SGC7901和MGC803的抑制效果明显高于MKN45。

冬凌草甲素诱导胃癌细胞MKN45凋亡的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45生长及调亡的影响及其机制。方法MTT法检测冬凌草甲素对MKN45细胞生长抑制作用：AO／EB和Hoechest33258荧光染色法及倒置显微镜观察细胞形态学变化：单细胞分析系统PI单染检测细胞周期变化：采用单细胞分析系统Annexinv—PE和7-AAD双染色法检测细胞凋亡率：Western blot检测凋亡相关蛋白Bel-2、Bax和caspase-3的表达改变。结果冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的生长抑制作用，普通形态学、AO／EB及Hoechest33258荧光染色均可见典型的细胞凋亡改变。冬凌草甲素作用MKN45细胞12h后的细胞凋亡率为8．7％～17．9％，24h后的细胞凋亡率为13．9％．29．3％，与未加药对照组（12h：3．3％；24h：4．8％）比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）。细胞周期分析显示冬凌草甲素使MKN45细胞增殖阻滞于G2-M期。Western blot检测显示．冬凌草甲素作用MKN45细胞后，Bax和caspase-3蛋白的表达随着药物作用浓度增高而增加．而Bcl-2蛋白表达无明显变化．Bcl-2／Bax比值减低。结论冬凌草甲素对胃癌细胞MKN45具有明显的增殖抑制作用：冬凌草甲素可能通过增加Bax蛋白表达．改变Bcl-2／Bax比率．继而启动caspase途径诱导胃癌细胞MKN45凋亡。

rmhTNF-α对人胃癌细胞系MKN45中的NF-κBp65表达的影响

目的在rmh TNF-α-MKN45人胃癌细胞系模型中,观察NF-κB p65基因及蛋白表达的变化情况。方法以不同浓度的rmh TNF-α(0IU/ml,50IU/ml,100IU/ml,200IU/ml)作用人胃癌细胞系MKN45后,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,巢式逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB p65基因的表达变化水平,并进行统计学分析,组间差异用单因素方差分析,组内比较用T-test。免疫荧光细胞化学(IF)方法检测NF-κB p65蛋白在胃癌细胞系MKN45的核转位变化情况。结果 CCK-8法结果显示,细胞增殖抑制率随rmh TNF-α浓度的增加而增加,差异有统计学差异;RT-PCR结果显示,随着rmh TNF-α浓度的增加,NF-κB p65 mRNA表达量下降,且组间差异具有统计学意义;IF结果显示,随着rmh TN浓度的增加NF-κB p65蛋白的核内活性下降。结论在rmh TNF-α抑制胃癌细胞系MKN 45的模型中,可能是通过下调NF-κB p65的基因表达及抑制NF-κB p65蛋白的核转位来抑制肿瘤增殖。

VIP对裸鼠MKN45移植瘤的影响

目的探讨血管活性肠肽(VIP)对裸鼠MKN45移植瘤的影响。方法将18只人胃癌MKN45细胞株的移植瘤裸鼠随机均分为三组,分别每天皮下注射VIP 10μg·100μl-1.只-1(VIP组)、VIP受体拮抗剂[D-p-C1-phe6,Leu17]-VIP(V4380)10μg·100μl-1.只-1(拮抗剂组)和PBS100μl/只(对照组)。每周称量裸鼠体重及移植瘤体积,4周后处死裸鼠,称量移植瘤重量及体积。用免疫组化及RT-PCR检测移植瘤组织中胞外信号调节激酶(ERK)蛋白及mRNA表达的变化。结果给药第28天,VIP组裸鼠体重明显轻于拮抗剂组(P<0.05)。给药的第14、21天,VIP组移植瘤体积明显小于其它两组(P<0.01)。VIP组ERK蛋白的表达显著低于拮抗剂组(P<0.05)。结论 VIP可能通过抑制肿瘤细胞ERK/NF-κB通路对人胃癌细胞MKN45裸鼠移植瘤有潜在抑制作用。