MKP-1基因对藏猪高原低氧适应性的影响

本研究旨在探究丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(Mitogen-activated Protein Kinase Phosphatase-1,MKP-1)基因对藏猪高海拔低氧适应性是否存在影响。选取藏猪、约克夏猪和定远猪采集耳组织,通过Sanger测序检测不同猪种MKP-1基因外显子区序列多态性和基因型,计算基因型频率并进行组间差异分析。选取6月龄饲养于同样海拔高度(3 000 m)的藏猪和约克夏猪各6头,屠宰并采集心脏组织,利用荧光定量PCR技术测定藏猪和约克夏猪心脏组织中MKP-1基因表达量。在MKP-1基因第1外显子发现1个C-373T多态位点,基因型分布在藏猪、约克夏猪和定远猪种群体中均符合哈迪-温伯格平衡。组间差异分析发现藏猪T等位基因频率显著高于约克夏猪和定远猪,基因型频率分布差异显著。荧光定量PCR结果显示MKP-1基因在高海拔藏猪心脏组织中的表达量显著高于约克夏猪。研究结果表明MKP-1基因很有可能对藏猪的低氧适应能力起调节作用,为进一步研究藏猪的高原低氧适应机制提供重要依据。

MKP-1在血管紧张素Ⅱ导致心肌肥大反应中的调控作用

本研究主要从丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 1(MKP 1)角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在血管紧张素Ⅱ介导的新生大鼠心肌细胞肥大反应中的作用及调控机制。实验以心肌细胞蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积作为心肌肥大反应的指标 ,以凝胶内MBP原位磷酸化测定MAPK活性 ,以免疫印迹法 (Westernboltting)分别测定MKP 1及磷酸化p44MAPK、p42MAPK蛋白表达。结果发现 :(1)AngⅡ (10 -7mol/L)处理 48h ,心肌细胞 3H 亮氨酸掺入率、蛋白含量及细胞表面积明显增加 ,AngⅡ增加 3H 亮氨酸掺入的作用可被血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )拮抗剂CV11974(10 -6mol/L)明显抑制 (抑制 85 % ) ,被MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5× 10 -5mol/L)部分抑制 (抑制 32 5 % ) ;(2 )CV11974或PD0 980 5 9可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达及MAPK酶活性 (以γ 32 P ATP掺入表示 ) ;(3)以磷酸化MAPK蛋白表达反映MAPK活性 ,可见AngⅡ处理心肌细胞5min ,MAPK活性即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h后基本恢复正常 ;而MKP 1蛋白表达 30min即见增加 ,持续 2h以上 ;(4 )用放线菌素D (actinomycinD)处理心肌细胞 30min可明显抑制MKP 1的表达 ,同时使AngⅡ致磷酸化MAPK蛋白表达时间延长至 2h以上。

上皮性卵巢肿瘤组织MKP-1及p-ERK_(1/2)蛋白表达的研究

研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)相关蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(mitogen activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylation extracellular signal-regulated kinases,p-ERK1/2)在上皮性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达差异,并探讨其在卵巢癌发生、发展中的作用,为卵巢癌的治疗提供新的思路及实验依据。选取64例上皮性卵巢癌、35例卵巢上皮性交界瘤及32例卵巢上皮性良性肿瘤患者的组织,另选取26例正常卵巢组织作对照,进行MKP-1及p-ERK1/2的免疫组化分析,并同时对其中部分病例进行上述蛋白的western-blot研究。结果显示正常卵巢、良性肿瘤、交界瘤及卵巢癌组织MKP-1的表达依次递减,各组之间进行两两比较均有显著性差异(P<0.01),FIGOⅢ期与Ⅳ期卵巢癌组织MKP-1的表达显著低于Ⅰ期与Ⅱ期卵巢癌组织(P<0.01);而p-ERK1/2在正常卵巢、良性肿瘤、交界瘤及卵巢癌组织的表达依次递增,各组之间进行两两比较也均有显著性差异(P<0.01),FIGOⅢ期与Ⅳ期卵巢癌组织p-ERK1/2的表达显著高于Ⅰ期与Ⅱ期卵巢癌组织(P<0.01)。且免疫组化及western-blot均显示MKP-1与p-ERK1/2在卵巢癌组织中的表达存在显著的负相关性,(r=-0.90,P<0.01及r=-0.78,P<0.01)。本研究结果表明MKP-1与p-ERK1/2的异常表达可能跟上皮性卵巢肿瘤的发生、发展有关,它们之间的表达失衡可能是卵巢癌发生、发展的原因之一。

MAPK及MKP-1在肾性高血压大鼠心肌肥大过程中的变化

【目的】研究肾性高血压大鼠 (renalhypertensiverats ,RHR)心肌肥大发生发展过程中心肌组织丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)活性、蛋白表达及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 (MKP 1)蛋白表达的变化以及血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 1型受体(AT1)拮抗剂TCV116作用。【方法】①制作两肾一夹肾性高血压大鼠模型 ;②以左心室质量与体质量比值作为心肌肥大的指标 ;③以胶内MBP原位磷酸化法测定MAPK活性 ,以免疫印迹法检测MKP 1蛋白表达。【结果】①大鼠肾动脉狭窄术后 8周心肌肥大已发生 ,12周至 16周心肌肥大进一步加重 ;②术后 8周、12周、16周大鼠心肌组织MAPK活性逐渐增加 ,各周龄组MKP 1蛋白表达虽然均高于同周龄对照组 ,但随肾动脉狭窄时间延长呈下降趋势 ,心肌MAPK活性与心肌肥大程度呈显著正相关 ,而与MKP 1蛋白表达呈显著负相关。③TCV116可有效抑制心肌肥大及MAPK活性、MKP 1蛋白表达的变化。【结论】AngⅡ是介导两肾一夹肾性高血压大鼠心肌肥大的重要因子 ;AngⅡ主要通过AT1受体介导心肌肥大反应及MAPK激活 ;MAPK是心肌肥大的重要信号通路 ,随肾动脉狭窄时间的延长 ,MKP 1表达逐渐下降可能是导致MAPK持续激活并导致心肌肥大加剧的重要原因。

高糖对肾小球系膜细胞MKP-1蛋白表达泛素化调节的影响

目的探讨高糖作用的肾小球系膜细胞MKP-1蛋白表达与泛素-蛋白酶体调节途径的关系。方法大鼠肾小球系膜HBZY-1细胞株分为8组,将高糖作为刺激因子,特异性泛素蛋白酶体抑制剂MG132作为干预因素。用蛋白免疫印迹法检测各组系膜细胞MKP-1的表达,实时定量PCR法检测各高糖组MKP-1mRNA的表达。结果高糖组系膜细胞MKP-1表达较正常血糖组均减少(P<0.05),各高糖组MKP-1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),高糖组加入MG132后,系膜细胞MKP-1表达增加(P<0.05)。结论高糖可通过泛素蛋白酶体途径诱导肾系膜细胞MKP-1蛋白表达减少。提示泛素蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病MAPK通路的信号调节。

LncRNA Mirt2通过调控MKP-1/JNK通路保护心肌细胞避免缺氧复氧损伤

目的探讨LncRNA Mirt2在心肌细胞H9C2缺氧复氧损伤过程中的作用及其机制。方法检测LncRNA Mirt2在急性心肌损伤患者血液中的水平。建立H9C2心肌细胞缺氧复氧模型,检测LncRNA Mirt2在H9C2缺氧复氧模型中的表达。采用脂质体转染法将LncRNA Mirt2 mimics和阴性对照转染入H9C2细胞中,qRT-PCR验证转染效率。实验分为对照组、缺氧复氧组、过表达对照组和Mirt2过表达组。Western blot分析IL-1β和IL-6的蛋白表达;EILSA分析IL-1β和IL-6浓度变化;CCK-8分析细胞活力,Caspase-3相对活性检测,TUNEL染色分析细胞凋亡;Western blot分析核糖聚合酶(PARP)、剪切的核糖聚合酶(Cleaved PARP)、Caspase-3前体(Pro-Caspase-3)、Caspase-3剪切体(Cleaved Caspase-3)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、c-Jun氨基末端激酶(t-JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK),t-c-Jun,磷酸化c-Jun蛋白(p-c-Jun)的蛋白表达。结果Mirt2在急性心肌损伤患者血液中表达下调,同时在H9C2缺氧2 h复氧12 h细胞中表达下调。在H9C2细胞缺氧复氧模型中:与对照组相比,Mirt2过表达组炎性因子IL-1β和IL-6的表达显著降低;CCK-8实验和凋亡实验检测结果表明,与过表达对照组相比,Mirt2过表达组细胞活力增强,凋亡数减少;Western blot结果表明,与过表达对照组相比,过表达Mirt2减少Cleaved PARP/Cleaved Caspase-3的表达,p-JNK、p-c-Jun的表达并增加了MKP-1的蛋白表达。结论Mirt2在缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤过程中发挥保护作用,其作用机制可能是通过激活MKP-1/JNK通路。

蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病大鼠肾脏MKP-1表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对早期糖尿病肾病的治疗作用及对大鼠肾脏MKP-1蛋白表达的影响,探讨糖尿病肾病治疗新方法。方法健康雄性Wistar大鼠30只分为对照组(NC组,n=10);糖尿病模型组20只,用STZ诱导糖尿病大鼠模型后分为糖尿病组(DC组,n=10)和MG132干预组(n=10)。MG132干预组给予MG132 0.1 mg/(kg.d)腹腔注射,对照组和糖尿病组每天给予等量生理盐水腹腔注射,喂养至6周和8周时处死大鼠。于6周和8周时收集各组大鼠尿液检测24 h尿微量白蛋白(UAER)、尿蛋白/尿肌酐比值(Up/Ucr)。Western blot检测各组大鼠MKP-1蛋白表达水平。结果 (1)各模型组24 h UAER、Up/Ucr较NC组增加(P<0.05),MG132干预组较DC组少(P<0.05);8周与6周比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)与NC比较,DC组和MG132干预组MKP-1蛋白表达量明显降低(P<0.01),其中以DC组降低最为显著,MG132干预组与DC组比较差异有统计学意义(P<0.05);各组8周和6周比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病肾病时MKP-1泛素化降解增加;蛋白酶体抑制剂MG132可抑制MKP-1的泛素化降解,MKP-1蛋白量增加,从而抑制MAPK通路的活化,具有潜在治疗糖尿病肾病的作用。

MKP-1和磷酸化ERK蛋白在急性脊髓损伤大鼠模型中表达的实验研究

探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)相关蛋白丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(Mitogen activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)和磷酸化细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinases,ERK)在大鼠脊髓损伤后表达的变化及其意义。20只SD大鼠,随机分为实验组及假手术对照组。实验组采用改良Allen′S打击法制作脊髓损伤动物模型,假手术对照组同法暴露脊髓,但不损伤脊髓。2组大鼠术后12h取手术段脊髓,用苏木精——伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化和检测脊髓标本损伤段的MKP-1和磷酸化ERK蛋白表达的差异。实验组脊髓HE染色显示存在大量出血坏死后形成的囊腔,组织和神经细胞水肿以及神经纤维溶解消失。免疫组化和Western Blot结果发现,术后第12h实验组MKP-1蛋白的表达减少,同时磷酸化ERK-1蛋白的表达量却明显增加,差别有显著性意义(P<0.01)。脊髓组织受重物打击后可下调MKP-1蛋白的表达,同时显著增加磷酸化ERK蛋白,而这可能是脊髓损伤的机制之一。

AFP和MKP-1对无法切除的肝细胞癌患者经TACE术治疗的预后预测价值

目的探讨甲胎蛋白(AFP)、丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)对无法切除的肝细胞癌(HCC)患者接受经导管动脉化学治疗栓塞术(TACE)治疗后1年无进展生存率(PFS)和总生存率(OS)的预测价值。方法选择2016年1月至2018年12月在东莞东华医院介入科首次接受TACE治疗的197例无法切除的HCC患者作为研究对象,根据术前MKP-1基因表达情况和AFP水平进行分组,采用LSD-t检验或χ^(2)检验分别比较MKP-1阳性组与MKP-1阴性组及AFP≥400 ng/mL组与AFP<400 ng/mL组的临床病理特征,采用Kaplan-Meier生存分析分别比较MKP-1阳性组与MKP-1阴性组及AFP≥400 ng/mL组与AFP<400 ng/mL组在TACE术后1年的PFS和OS,采用Cox回归分析评价术前MKP-1基因表达状态和AFP水平对无法切除的HCC患者经TACE术治疗后1年的PFS和OS的影响。结果MKP-1阳性组与MKP-1阴性组、AFP≥400 ng/mL组与AFP<400 ng/mL组的临床病理特征差异均无统计学意义(P均>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,MKP-1阴性组在TACE术后6、9、12个月的PFS和OS均显著低于MKP-1阳性组(80.6%、51.4%、42.3%比100.0%、85.6%、71.6%,90.7%、68.5%、52.9%比100.0%、100.0%、78.7%,P均<0.05)。AFP≥400 ng/mL组在TACE术后6、9、12个月的PFS和OS均显著低于AFP<400 ng/mL组(84.6%、57.6%、31.5%比100.0%、90.8%、58.4%,80.1%、52.7%、44.1%比100.0%、93.8%、81.9%,P均<0.05)。Cox回归分析显示,术前AFP水平和MKP-1基因表达均为HCC患者TACE术后1年PFS和OS的独立影响因素。结论术前AFP≥400 ng/mL、MKP-1基因表达阴性均预示无法切除的HCC患者经TACE术治疗后1年的PFS和OS较低,预后较差。

MKP-1增强组蛋白去乙酰化酶抑制剂对脑胶质瘤干细胞敏感性及其作用机制

目的探讨MKP-1对组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACi)作用脑胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSC)敏感性的影响及可能的作用机制。方法收集武汉市第三医院神经外科2016年1月至2018年12月收治的53例脑胶质瘤患者肿瘤及健康脑组织。RT-PCR检测MKP-1表达,分离并培养脑胶质瘤干细胞,采用MTT实验检测HDACi MS-275作用脑胶质瘤干细胞的IC50。以MKP-1过表达质粒转染干细胞构建差异表达MKP-1的脑胶质瘤干细胞模型,MTT实验分析HDACi MS-275的敏感性,CCK-8实验检测细胞增殖情况,RT-PCR及Western blot实验检测肿瘤干细胞相关因子SOX2、SOX9的表达,Western blot实验检测p38、JNK、ERK1/2的表达。结果MKP-1在脑胶质瘤组织中的表达较健康脑组织明显降低(P<0.001)。HDACi MS-275作用GSC的IC50为(55.12±7.31)nmol/mL,作用后细胞增殖能力较对照组明显降低(P<0.001),MKP-1表达明显升高(P<0.001)。HDACi MS-275作用过表达MKP-1脑胶质瘤干细胞的IC50较对照组和空白组明显降低(P<0.001)。MKP-1组GSC增殖能力,SOX2、SOX9 mRNA和蛋白表达量均较对照组和空白组明显降低(P<0.001)。MKP-1组JNK和p38表达较均对照组和空白组降低(P<0.001),但ERK1/2表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论脑胶质瘤干细胞对HDACi的敏感性与MKP-1表达有关,MKP-1可能通过调控SOX2、SOX9、p38、JNK而影响脑胶质瘤干细胞对HDACi的应答。

MKP-1和MKP-3与疼痛关系的研究进展

MKP-1和MKP-3是MAPKs(P38、ERK1/2和JNK)的天然负性调节因子,对MAPKs的去磷酸化作用有重要意义。现已证实MAPKs分子信号通路是疼痛传导的相关通路之一,参与痛觉过敏的触发和维持。已有研究表明通过干扰MKP-1和MKP-3的活性,调节MAPKs信号通路可以减少疼痛。MKP-1和MKP-3能有效缓解疼痛,未来极有可能成为新的镇痛药物靶点和新的研究方向。

MKP-1在骨关节炎中作用相关研究的进展

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种最常见的进行性关节退变疾病,常见于中老年人群,病变可累及几乎所有关节。OA的病理特点是关节内软骨和其他软组织（如韧带和膝关节的半月板）的破坏。软组织的破坏伴随着毗邻骨组织的重建和增生以及不同程度的滑膜炎症[1]

大鼠脑创伤后MKP-1表达上调、NO的生成减少

目的研究创伤性脑损伤(TBI)周围皮质中丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)的表达变化,探讨其对一氧化氮(NO)含量的影响及机制。方法用自由落体法制作大鼠TBI模型;酶化学法检测周围皮质中NO的含量;免疫组织化学和免疫印迹等方法检测脑皮质MKP-1、e NOS及MAPKs的表达。结果对照组脑皮质NO水平为34.4±3.2μmol/L,TBI损伤后3、6、24及72 h均显著下降,分别为20.8±2.5、23.9±3.8、24.0±1.6及26.8±2.6μmol/L(均P<0.05)。脑损伤周围皮质中胞质和突起呈棕黄色的MKP-1免疫阳性细胞数量增加。脑损伤后3和6 h MKP-1蛋白表达水平明显增加(P<0.05),随后降低至正常水平;e NOS蛋白表达水平在脑损伤后3和6h则明显降低(均P<0.05),至24 h接近正常水平;p ERK和p-P38 MAPK蛋白表达水平在脑损伤后3和6 h也分别下降(均P<0.05)。结论大鼠TBI后,皮质中MKP-1表达上调可能负向调控MAPK信号而降低e NOS水平,引起NO生成减少造成脑血流灌注不足。

血府逐瘀汤及拆方对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞MKP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨血府逐瘀汤及其拆方对动脉粥样硬化血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)负反馈因子丝裂原蛋白激酶磷酸酶(MKP-1 mRNA)表达的影响。方法:采用高脂饲料复制动脉粥样硬化模型,原位杂交法检测主动脉MKP-1mRNA的表达。结果:模型组与空白组比较,模型组MKP-1 mRNA表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);各药物组与模型组比较,血府组和四逆组MKP-1mRNA表达增多(分别为P<0.01,P<0.05),差异有统计学意义;桃红组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血府逐瘀汤可以有效升高血管平滑肌MKP-1mRNA的表达,可能是其抗动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖的机理之一。

雌二醇对MKP-1的调控与围绝经期抑郁症的相关性研究

目的探讨围绝经期女性雌二醇水平对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)代谢通路的调控与高发的抑郁症的关系。方法根据汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)评分及ICD-10"抑郁发作"的诊断标准入选196例研究对象并采集外周血标本。采用电化学发光法检测雌二醇(E_2),ELISA双抗体夹心法检测MKP-1蛋白水平,比较各组之间的差异及其相关性。结果围绝经期抑郁症组与其他三组比较,E_2水平降低(Z值分别为-1.887、-6.561、-7.563,均P<0.05),MKP-1水平升高(P<0.05),HAMD评分和E_2分级呈负相关关系(R=-0.227,P=0.033);HAMD与MKP-1显示正相关(R=0.287,P=0.000);E_2分级与MKP-1显示负相关(R=-0.264,P=0.000)。结论围绝经期雌激素水平的降低引发MKP-1水平升高,可能导致抑郁症的高发。

动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化及MKP-1表达的变化

目的:观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)表型转化和丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)表达的动态变化.方法:分别用HE染色、免疫组化和逆转录-聚合酶链(RT-PCR)方法检测假损伤组(S组)和损伤后不同时间点血管形态学改变及血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)和MKP-1 mRNA及蛋白表达的变化.结果:①损伤后1 d中膜腔侧、3 d管腔内表面可见增殖的VSMC,5～7 d新生内膜(neointima,NI)形成并逐渐增厚,14～35 d NI进行性增厚;各组中膜均有增殖的VSMC向腔面集聚.②S组中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性;中膜于损伤后1～14d,NI于5～14 d PCNA阳性细胞率逐渐增多,14 d达高峰,28 d后开始逐渐减少,但NI阳性率多于中膜.③S组中膜SMα-actin表达为阳性,内皮为阴性;中膜阳性面积于损伤后1 d开始减少,3 d最为明显,5 d后开始逐渐增加,NI阳性表达弱于中膜.④S组中膜MKP-1呈弱阳性或阳性表达,损伤后1d即开始下降,5～7 d达最低,14 d稍有回升,至35 d仍未回到假损伤组水平;NI阳性表达弱于中膜.MKP-1表达变化与PCNA表达变化呈负相关.结论:VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,MKP-1参与了损伤后VSMC表型转化的调节.

microRNAs调控MKP-1在抑郁症发病机制中的研究进展

本文综述了重度抑郁症的研究现状,并介绍了靶基因MKP-1与microRNAs同抑郁症的关系,同时分析了microRNAs与靶基因MKP-1的调控关系,通过生物信息学预测方法和生物学实验方法来建立二者的联系,主要谈及了let-7a与miR-101两种microRNAs在抑郁症中的研究。通过探索microRNAs调控MKP-1这一新的研究热点,为抑郁症发病机理的研究开拓出新的思路。

粉防己碱对VSMC表型转化和p38及MKP-1表达的影响

研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)抑制内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和对p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的影响。采用HE染色检测28 d假损伤组(S组)、损伤组(I组)和损伤+Tet治疗组(Tet组)血管形态学改变;分别使用免疫组化、Western blot和RT-PCR技术检测I组和Tet组7、14、28 d增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、p38 MAPK和MKP-1表达的变化。结果为:①28天S组血管壁各层结构完整;I组新生内膜(NI)面积显著增加,管腔面积(LA)显著缩小;Tet组NI增殖较I组明显减轻,LA增加。②损伤后7 d,Tet组与I组之间血管壁SMα-actin、PCNA、p38 MAPK和MKP-1表达基本一致,NI增殖程度亦基本相同。Tet组14和28 d,血管壁中PCNA和p38 MAPK表达均低于I组;而MKP-1表达均高于I组;14、28 d SMα-actin表达均略高于I组。因此Tet可不同程度地拮抗内膜损伤后P38MAPK信号转导途径及其调节,抑制VSMC表型转化,继而减缓NI增殖。

补肾培元胶囊调控MKP-1/JNK抑制A549细胞增殖及诱导细胞凋亡实验研究

目的:研究补肾培元胶囊治疗肺腺癌的抗肿瘤机制。方法:采用不同浓度补肾培元胶囊含药血清培养A549细胞,观察细胞形态;CCK-8法检测补肾培元胶囊对A549细胞增殖的影响;流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染色法)测定细胞凋亡率;RT-qPCR法分别检测氨基末端激酶(Jun N terminal kinase,JNK)、丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 (Mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)的mRNA表达差异。结果:补肾培元胶囊含药血清培养A549细胞后细胞体积缩小,部分不能贴壁生长,细胞质及细胞核固缩,其中以30%含药血清组及35%含药血清组的细胞形态改变最为明显。CCK-8检测结果显示补肾培元胶囊含药血清可抑制A549细胞增殖,且具有一定的时间—浓度依赖性;流式细胞术结果显示补肾培元胶囊含药血清可诱导A549细胞凋亡;RT-q PCR结果显示补肾培元胶囊干预A549细胞后可升高JNK、MKP-1 mRNA表达水平。结论:补肾培元胶囊可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与调控MKP-1/JNK信号通路有关。

碱性成纤维细胞生长因子对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK/ERK、MKP-1通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖及MEK1/2、ERK1/2及MKP-1表达的影响。方法:培养人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-2),MTT比色法测定不同浓度bFGF对细胞增殖的影响;免疫沉淀法纯化蛋白并ERK试剂盒测定ERK活性;免疫印迹法测定p-MEK1/2、p-ERK1/2及MKP-1表达。结果:MTT实验显示bFGF明显增强ACC-2细胞增殖,免疫沉淀法显示bFGF上调ERK活性,免疫印迹法显示bFGF明显增强p-MEK1/2、p-ERK1/2表达及抑制MKP-1表达。结论:bFGF可促进人涎腺腺样囊性癌ACC-2细胞株增殖,其途径与上调ERK活性、激活MEK/ERK通路、抑制MKP-1表达有关。