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来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因的合成与融合表达
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作者 侯欣彤 董媛 +5 位作者 林瑞东 于梁 任媛媛 李剑光 高朝辉 滕利荣 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1670-1674,共5页
将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳... 将来源于Alcaligenes A-6的D-氨基酰化酶基因用大肠杆菌中的丰沛密码子替换,利用化学和基于聚合酶链反应(PCR)技术的酶促方法进行基因全合成,利用pET-32a构建重组表达载体pET-dan,转化进E.coil BL21(DE3)中进行融合表达.经SDS-PAGE电泳、Western-blot检测和活性测定发现,D-ANase可在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白可达到菌体总蛋白的69.2%,密码子优化后基因构建的工程菌发酵活性为96 U/mL,重组蛋白经超声细胞破碎及Ni2+柱亲和层析纯化,比活可达1692.3 U/mg,纯度可达95%以上. 展开更多
关键词 D-氨基酰化酶 产碱杆菌 基因合成 融合表达
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Secretory carcinoma——impact of translocation and gene fusions on salivary gland tumor
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作者 Ryoko Inaki Masanobu Abe +4 位作者 Liang Zong Takahiro Abe Aya Shinozaki-Ushiku Tetsuo Ushiku Kazuto Hoshi 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 2017年第5期379-384,共6页
Secretory carcinoma(SC), previously described as mammary analogue secretory carcinoma(MASC), is a recently described salivary gland tumor which morphologically resembles mammary secretory carcinoma. The first desc... Secretory carcinoma(SC), previously described as mammary analogue secretory carcinoma(MASC), is a recently described salivary gland tumor which morphologically resembles mammary secretory carcinoma. The first description of SC/MASC, reported by Skálová et al. in 2010, was as a rare salivary carcinoma imitating secretory carcinoma of the breast. SC/MASC is a unique salivary gland tumor with morphological overlap with acinic cell carcinoma(Aci CC), mucoepidermoid carcinoma(MEC), and adenocarcinoma not otherwise specified(ADCNOS). SC/MASC shares similar clinicopathological features with Aci CC. As a critical difference between SC/MASC and Aci CC, SC/MASC characteristically has the chromosomal translocation t(12;15)(p13;q25) which leads to a fusion gene between the ETV6 gene on chromosome 12 and the NTRK3 gene on chromosome 15. This genetic background is an important differential diagnostic finding for excluding other salivary gland tumors and may be a critical factor determining the prognosis for patients with SC/MASC. Research in recent years has provided a large body of new data on SC/MASC and suggests the possibility that the ETV6-NTRK3 translocation could be a therapeutic target. Here, we review the morphological and clinicopathological features of SC/MASC and discuss new directions for therapy. 展开更多
关键词 Secretory carcinoma mammary analogue secretory carcinoma MASC ETV6-NTRK3 fusion gene salivary gland tumor
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伴有6;9染色体易位急性髓系白血病患者DEK-CAN融合基因表达分析 被引量:8
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作者 汪亚伦 王彤 +2 位作者 许凤 冮岩 王杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期232-236,共5页
本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患... 本研究旨在探讨急性髓系白血病(AML)患者6;9染色体易位与DEK-CAN融合基因表达之间的关系及临床意义。患者骨髓细胞短期培养后按常规方法制备染色体,采用R显带技术进行染色体核型分析。用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nest-PCR)对4例AML患者的骨髓或外周血单个核细胞DEK-CAN融合基因表达进行了分析,并对其中3例行异体骨髓移植(allo-BMT)患者进行动态随访。结果表明:4例急性髓系白血病患者为t(6;9)(p23;q34)易位;4例初诊、再发及完全缓解期患者均不同程度检出DEK-CAN融合基因,占100%;其中初诊、再发期表达明显增强,完全缓解期减弱;3例患者allo-BMT后1-24个月均表达DEK-CANmRNA。临床资料显示4例AML患者中2例于CR后1-24个月复发(其中1例接受异体骨髓移植)、死亡,其余2例完全缓解,在治疗中先后接受异体骨髓移植,现仍然生存。结论:DEK-CAN基因是AML发病的分子基础,检测DEK-CAN融合基因对于AML的诊断、疗效观察及预后判断有重要意义。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 6 9染色体易位 DEK-CAN融合基因
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牛分枝杆菌ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量:5
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作者 房红莹 马魁 +5 位作者 张欣 崔敏 陈钜豪 蒋启荣 刘付启荣 罗满林 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期504-509,共6页
以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6基因和CFP-10基因通过(G1y4Ser)3接头连接,得到了融合基因。将融合基因片段先克隆于pMD18-T载体,再亚克隆到... 以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得了ESAT-6和CFP-10两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)将ESAT-6基因和CFP-10基因通过(G1y4Ser)3接头连接,得到了融合基因。将融合基因片段先克隆于pMD18-T载体,再亚克隆到表达载体pET32a(+)中,通过限制性内切酶消化、菌液PCR鉴定、序列分析证实得到含预期序列的重组质粒pET-ESAT-6-CFP-10;该质粒转化BL21(DE3);经IPTG诱导,表达出了40ku的融合蛋白;用Ni螯合层析方法纯化该蛋白,经SDS-PAGE检测,出现了清晰的单一条带;Western-blotting试验结果显示,该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。结果表明,ESAT-6基因和CFP-10基因在大肠杆菌中融合表达成功并具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 ESAT-6基因 CFP-10基因 融合表达
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huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定 被引量:4
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作者 孙强明 戴长柏 +4 位作者 李洪钊 丁云菲 马雁冰 刘红岩 徐维明 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期253-257,共5页
目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0... 目的 构建及表达具有huIL 6和huGM CSF双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7)融合蛋白分子。方法 应用PCR技术对huIL 6和huGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在二者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成pBV2 2 0 IL 6 GM CSF(9- 12 7)表达质粒 ,将表达质粒导入E .coliDH5α中 ,诱导表达融合蛋白。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白。使用MTT法测量其huIL 6和huGM CSF生物学活性。结果 pUC18 IL 6 GM CSF(9- 12 7)的序列与理论设计完全一致 ,表达质粒在E .coliDH5α中得到高效表达 ,表达的融合蛋白占总蛋白含量的 30 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在。通过QSepharoseH .P .离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白 ,其纯度达到 96 %以上。融合蛋白具有huIL 6和huGM CSF的双重生物学活性 ,其促进huIL 6依赖细胞株B9和huGM CSF依赖细胞株TF 1增殖的比活性分别为 2 .86× 10 7U/mg和 3.33× 10 8U/mg。结论 获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL 6 GM CSF(9- 12 7) 展开更多
关键词 GM-CSF 融合蛋白 基因表达 基因克隆 白细胞介素-6 生物活性蛋白
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猪白细胞介素4,6融合基因和CpG基序对猪蓝耳病疫苗免疫的强化效应 被引量:6
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作者 陈建林 杨肖 +8 位作者 章欢 李栋 程驰 赵钟钟 陈茜 章华兵 黄杰 陈文龙 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第6期1012-1016,1026,共6页
为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、... 为探索新型高效安全的猪蓝耳病疫苗免疫佐剂,本实验用离子交联法制备壳聚糖纳米颗粒包裹猪融合基因PIL-46和CpG基序的真核表达质粒(CNP-(VRIL-46+VR1C)),将CNP-(VRIL-46+VR1C)肌注接种过猪蓝耳病灭活苗的长白川白杂交猪,接种后1、2、4、6和8周采取实验猪静脉血,用Sandwich ELISA检测血清中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量,同时检测外周血液免疫细胞数量的变化。结果发现实验猪接种CNP-(VRIL-46+VR1C)后1~8周内,其血清中IL-2、IL-4、IL-6和IgG、IgA、IgM及特异抗体的含量较对照组均显著增多(P<0.05),淋巴细胞和单核细胞数量也明显升高(P<0.05)。这些表明接种CNP-(VRIL-46+VR1C)的实验猪的特异体液和细胞免疫水平均显著多于对照组,提示PIL-46基因和CpG基序组合能显著增强猪的特异体液和细胞免疫机能,明显提高其免疫防御力,具有研制为高效安全的分子免疫增强剂的应用前景。 展开更多
关键词 猪白细胞介素4 6融合基因 CPG基序 蓝耳病 免疫
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猪白细胞介素6和α干扰素基因的融合及其原核表达 被引量:2
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作者 霍海龙 赵跃 +8 位作者 王锐 李卫真 张永云 刘丽仙 王配 苗永旺 钱林东 字荣英 霍金龙 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期329-334,共6页
为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL... 为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL6和IFNα的成熟肽基因序列,并分别与克隆载体pMD18连接后转化Esche-richia coli DH5α,提取质粒酶切并连接构建重组质粒pMD18-IL6-IFNα。将该重组质粒和表达载体pET32a同时酶切并连接构建pET32-IL6-IFNα重组质粒,依次转化E.coli DH5α和E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,并经不同终浓度的IPTG以及不同时间的诱导表达。结果成功构建了IL6和IFNα的融合表达载体,SDS-PAGE检测pET32-IL6-IFNα融合蛋白在E.coli Rosetta(DE3)中得到了较高表达,且经1.00 mmol/L IPTG诱导7.0 h后表达量最大,目的蛋白的相对分子量为44 960,与理论预期值一致。SDS-PAGE检测显示融合蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在。 展开更多
关键词 白细胞介素6 Α干扰素 基因融合 原核表达
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猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究 被引量:2
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作者 张桂红 林海波 +7 位作者 詹国英 廖明 任涛 罗开健 曹伟胜 徐成刚 江经纬 辛朝安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期474-477,共4页
用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的... 用DNA重组技术,将已克隆的猪IL-6基因阅读框片段插入非融合原核表达质粒pBV220中的适当位置,获得重组质粒pBVpIL-6,转化大肠杆菌DH5α后,42℃诱导阳性表达菌。经SDS-PAGE检测发现目的蛋白获得了高效表达,表达量约占总蛋白的20%。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经过变性溶解和复性后用酶联免疫吸附试验(ELISA)做定性定量检测。ELISA结果证实了所表达的蛋白为猪IL-6,复性后具有一定活性,并测出了复性后活性蛋白的浓度。 展开更多
关键词 白细胞介素-6基因 非融合原核表达 SDS-PAGE ELISA
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猪白细胞介素2与融合白细胞介素4/6基因共表达的免疫效应研究 被引量:2
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作者 杨璐一 肖永乐 +5 位作者 万小平 罗公明 王晔 陈义辉 孙文魁 高荣 《四川动物》 CSCD 北大核心 2014年第2期167-173,共7页
目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染... 目的构建猪融合白细胞介素4/6与猪白细胞介素2基因的共表达载体,研究其共表达对小鼠免疫的协同效应。方法以2A自剪接技术首次构建猪融合白细胞介素4/6与白细胞介素2基因的共表达重组质粒,以壳聚糖纳米材料包裹制成纳米颗粒,进行体外转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR分析,最后肌肉注射小鼠进行体内实验并分析。结果成功构建了重组共表达质粒VRIL4/6-2;壳聚糖包裹后转染HEK293细胞,48 h后收集细胞,RT-PCR检测显示目的基因能够在HEK293细胞中高效地转录与表达。小鼠接种实验结果表明,实验组血清中的IgG和IgG2a的含量比对照组显著增加,并且VRIL4/6-2-CS接种组的小鼠体液免疫水平明显增高(P<0.05);VRIL4/6-2实验组的CD4+淋巴细胞显著多于其它实验组(P<0.05);实验组IL-2、IL-4、IL-6、IL-23基因的表达水平明显高于对照组(P<0.05),实验组小鼠外周血白细胞、血小板和血红蛋白的含量均显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL4/6-2共表达质粒能够更好的增强动物体液免疫和细胞免疫机能,可作为提高动物体液免疫和细胞免疫的经济高效安全新型免疫调节剂,具有潜在的重要应用前景。 展开更多
关键词 猪融合白细胞介素4 6基因 猪白细胞介素2基因 共表达 免疫 小鼠
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牛结核杆菌MPB70-ESAT-6融合蛋白的原核表达及抗原反应性分析 被引量:1
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作者 姜秀云 董阳 +5 位作者 包艳红 张建宁 方诗文 金海玲 王宁 马红霞 《中国兽药杂志》 2019年第3期7-12,共6页
为增强单个蛋白的抗原性,利用(Gly4Ser)3柔性连接肽将牛结核杆菌MPB70和ESAT-6融合。采用重叠延伸PCR技术将牛结核杆菌mpb70与esat-6基因连接,获得融合基因mpb70-esat-6,连接至T-Vector pMD19中,获得克隆质粒pMD-70-esat-6。经Bam HⅠ、... 为增强单个蛋白的抗原性,利用(Gly4Ser)3柔性连接肽将牛结核杆菌MPB70和ESAT-6融合。采用重叠延伸PCR技术将牛结核杆菌mpb70与esat-6基因连接,获得融合基因mpb70-esat-6,连接至T-Vector pMD19中,获得克隆质粒pMD-70-esat-6。经Bam HⅠ、EcoRⅠ酶切、纯化,并与p ET28a(+)载体连接,构建了pET-70-esat-6重组表达质粒。SDS-PAGE发现,在27.2 ku处表达了融合蛋白MPB70-ESAT-6,Western blotting证实,MPB70-ESAT-6与牛结核阳性血清反应性良好。MPB70-ESAT-6融合蛋白的研究为牛结核病诊断抗原及相关疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 牛结核杆菌 mpb70基因 esat-6基因 融合蛋白 原核表达
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两种hIL-6/GM-CSF融合蛋白基因的构建、表达及活性比较
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作者 孙强明 孙茂盛 +4 位作者 易山 曹增 别俊 戴长柏 徐维明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期104-108,共5页
目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因... 目的 :构建及表达具有hIL 6和hGM CSF双重生物学活性的hIL 6 /GM CSF融合蛋白分子。方法 :应用PCR技术对hIL 6和hGM CSF的基因分别加以改造 ,同时在两者之间加上连接肽序列 (G G S G S) 3 ,克隆PCR产物 ,并构建成克隆有两种融合蛋白基因的pBV2 2 0表达质粒 ,两种融合蛋白分别是 :IL 6 (1~ 184 ) GM CSF(9~ 12 7) (简称IG1)和IL 6 (2 4~ 184 ) GM CSF(9~ 12 7) (简称IG2 )。将表达质粒分别导入E .coliBL 2 1中诱导表达。通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化目的蛋白。使用hIL 6依赖细胞株B9和hGM CSF依赖细胞株TF1,通过MTT比色法测定融合蛋白的生物学活性。结果 :对两种融合蛋白基因的测序结果表明 ,其序列与理论设计完全一致。表达质粒在E .coliBL 2 1中均得到高效表达 ,表达的融合蛋白均占总蛋白含量的 2 5 %以上 ,表达产物以包涵体的形式存在 ,通过QSepharoseHP离子交换柱和SephacrylS 2 0 0分子筛柱二步柱纯化及复性后 ,获得两种目的蛋白 ,其纯度均达到 95 %以上。活性测定结果表明 ,两种融合蛋白均具有较高的hIL 6和hGM CSF的双重生物学活性。结论 :获得了具有较高纯度和双重生物学活性的hIL 6 /GM 展开更多
关键词 白细胞介素-6 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 融合蛋白 克隆 基因表达
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壳聚糖纳米颗粒包裹猪白细胞介素2和融合白细胞介素4/6基因对猪圆环病毒2型疫苗免疫的强化 被引量:3
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作者 陈祎 宋婷玉 +7 位作者 李金海 肖永乐 曾光志 万小平 杨璐一 方鹏飞 王泽洲 高荣 《四川动物》 北大核心 2018年第2期156-163,共8页
目的探讨猪Sus scrofa domesticus白细胞介素2(IL-2)和融合白细胞介素4/6(IL-4/6)基因的共表达对仔猪免疫应答的影响,为进一步研制新型免疫调节剂来加强仔猪抵御断奶后多系统衰竭综合征奠定基础。方法将猪IL-2和IL-4/6融合基因的共表达... 目的探讨猪Sus scrofa domesticus白细胞介素2(IL-2)和融合白细胞介素4/6(IL-4/6)基因的共表达对仔猪免疫应答的影响,为进一步研制新型免疫调节剂来加强仔猪抵御断奶后多系统衰竭综合征奠定基础。方法将猪IL-2和IL-4/6融合基因的共表达重组质粒,用壳聚糖材料包裹制成纳米颗粒,记作VRIL-4/6-2-CS。将仔猪分为2组,分别肌肉注射VRIL-4/6-2-CS(实验组)和生理盐水(对照组),2组均同时接种猪圆环病毒2型(PCV-2)疫苗,在接种后的第0、7、14、28天采集血样并分析免疫变化。结果实验组仔猪血清中的IgG2a抗体数量和血液中CD4^+、CD8+~T淋巴细胞数量均显著高于对照组(P<0.05);同时,实验组仔猪的IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、TLRs(TLR-2,7)、STATs(STAT-1,2,3)基因表达水平也显著高于对照组(P<0.05)。尽管2组之间PCV-2特异性抗体的含量差异无统计学意义,但是实验组仔猪的生长速率显著高于对照组(P<0.05)。结论 VRIL-4/6-2-CS能促进仔猪对PCV-2疫苗的免疫应答,是一种安全有效的免疫佐剂。 展开更多
关键词 仔猪 基因共表达 白细胞介素2 融合白细胞介素4/6 免疫 PCV-2疫苗
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人白血病抑制因子和白细胞介素6融合基因的构建与表达
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作者 孙丽亚 丁清明 +2 位作者 葛忠良 曹华 张群伟 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期150-154,共5页
为了获得对白血病细胞有更强的抑制和诱导分化作用,本实验应用计算机优化设计,采用PCR扩增和分子克隆技术,分别扩增编码IL-6成熟蛋白的部分cDNA片段和编码LIF成熟蛋白的cDNA片段与人工设计的四肽接头连接到克隆载体,并将IL-6基因插入到... 为了获得对白血病细胞有更强的抑制和诱导分化作用,本实验应用计算机优化设计,采用PCR扩增和分子克隆技术,分别扩增编码IL-6成熟蛋白的部分cDNA片段和编码LIF成熟蛋白的cDNA片段与人工设计的四肽接头连接到克隆载体,并将IL-6基因插入到LIF基因的N端,亚克隆到原核表达载体pBV220酶切位点之间,融合成编码单一的基因。采用30℃扩增菌体,42℃诱导,实现了在E.coli中表达预期的36kD蛋白谱带。表达量约占菌体总蛋白量的21%。经初步活性测定,重组融合因子对HL-60白血病细胞克隆生长的抑制明显地强于LIF和IL-6单独使用时的作用。 展开更多
关键词 白血病抑制因子 白细胞介素6 融合基因 基因构建 基因表达
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结核分枝杆菌重组双歧杆菌-ESAT-6-MPT64疫苗的构建及鉴定 被引量:1
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作者 曾莉蓉 李文桂 《湖北民族学院学报(医学版)》 2010年第4期14-16,共3页
目的构建并鉴定结核分枝杆菌重组双歧杆菌((Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6-MPT64疫苗。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增ESAT-6和MPT64单基因序列,然后采用基因拼接(gene SOEing)法构建融合基因ESAT-6-MP... 目的构建并鉴定结核分枝杆菌重组双歧杆菌((Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6-MPT64疫苗。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增ESAT-6和MPT64单基因序列,然后采用基因拼接(gene SOEing)法构建融合基因ESAT-6-MPT64,定向克隆至穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-ESAT-6-MPT64;再电转化入Bb,构建结核分枝杆菌重组双歧杆菌-ESAT-6-MPT64疫苗。结果 PCR成功扩增出1020bp的ESAT-6-MPT64融合基因;双酶切证实ESAT-6-MPT64融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6-MPT64疫苗构建成功。结论成功构建了结核分枝杆菌rBb-ESAT-6-MPT64疫苗,为进一步研究其免疫保护效果奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 融合基因ESAT-6-MPT64 rBb-ESAT-6-MPT64疫苗
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重组人肿瘤坏死因子α和白细胞介素6融合基因的构建和表达
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作者 吴松泉 刘丽 +3 位作者 兴安 邱长春 梁植权 顾方舟 《微生物学免疫学进展》 2000年第1期24-26,共3页
本文利用PCR技术和基因定位突变技术 ,将编码人肿瘤坏死因子α(hTNFα)和白细胞介素 6 (hIL 6 )成熟肽的基因通过中间接头连接成编码单一蛋白的基因 ,构建了融合蛋白表达载体 pBIT ,并在大肠杆菌中得到了表达。SDS PAGE的电泳胶薄层扫... 本文利用PCR技术和基因定位突变技术 ,将编码人肿瘤坏死因子α(hTNFα)和白细胞介素 6 (hIL 6 )成熟肽的基因通过中间接头连接成编码单一蛋白的基因 ,构建了融合蛋白表达载体 pBIT ,并在大肠杆菌中得到了表达。SDS PAGE的电泳胶薄层扫描显示 ,融合蛋白的表达量是菌体总蛋白量的 2 0 % ,其分子量约为 37kD。活性检测证实 ,融合蛋白既有TNF活性 ,又有IL 6活性。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素6 融合基因
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合成基因IL-6在大肠杆菌中表达及融合蛋白鉴定分析
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作者 唐维政 孙鸿高 +2 位作者 陈少文 汪凡 朱中元 《贵州医药》 CAS 2020年第5期682-684,共3页
目的合成IL-6的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得纯化的融合蛋白IL-6。方法采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,合成基因IL-6,并将其插入载体pCzn1,获得的重组质粒pCzn1-IL-6,化学法将其转化入大肠杆菌... 目的合成IL-6的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得纯化的融合蛋白IL-6。方法采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,合成基因IL-6,并将其插入载体pCzn1,获得的重组质粒pCzn1-IL-6,化学法将其转化入大肠杆菌TOP10进行克隆。将克隆得到的阳性克隆子转化入大肠杆菌Arctic Express后用IPTG诱导剂诱导融合蛋白的表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达效果。结果经测序和双酶切验证,正确构建了重组质粒pCzn1-IL-6,重组质粒成功转入表达菌株,IL-6原核蛋白在表达菌株中以包涵体和可溶性形式稳定表达,通过Ni柱亲和纯化获得纯化的目标蛋白。结论 IL-6原核蛋白在大肠杆菌中成功表达,为进一步的应用研究打下基础。 展开更多
关键词 IL-6 合成基因 原核表达 融合蛋白
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小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体的构建及表达 被引量:5
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作者 马信 林爱玲 +2 位作者 封德顺 王洪刚 田纪春 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期10-13,共4页
目的:构建小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体并进行表达,以期得到大量的His标签融合蛋白。方法:根据GenBank中的TaCKX1序列以及pET-24a载体中的多克隆位点设计引物,以含有TaCKX1编码基因的批pMD-QRCKX1重组质粒为模板,经PCR... 目的:构建小麦细胞分裂素氧化酶基因TaCKX1原核表达载体并进行表达,以期得到大量的His标签融合蛋白。方法:根据GenBank中的TaCKX1序列以及pET-24a载体中的多克隆位点设计引物,以含有TaCKX1编码基因的批pMD-QRCKX1重组质粒为模板,经PCR扩增得到TaCKX1基因的DNA片段。将所得的片段与pET-24a载体连接,转化DH5α大肠杆菌,筛选阳性克隆,其测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pET-TaCKX1已构建成功。提取pET-TaCKX1质粒转化到BL21(DE3)plysS表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。结果:在大肠杆菌中获得TaCKX1基因融合表达,主要以包涵体形式存在;融合蛋白的分子量为58.9kD;IPTG终浓度为0.5、1.0、1.5、2.0mmol/L时,诱导融合蛋白产量相差不大。选用0.5mmol/L诱导15h获得大量的融合蛋白。经用原核表达蛋白纯化试剂盒纯化,得到了单一的融合蛋白。结论:小麦TaCKX1基因在大肠杆菌中获得了高效表达,为今后TaCKX1蛋白多克隆抗体的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 TaCKX1基因 原核表达 His融合蛋白
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唾液腺乳腺样分泌癌的研究进展 被引量:8
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作者 孙晶晶 李江 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期677-684,共8页
唾液腺乳腺样分泌癌(MASC)是一种近年来才被描述的唾液腺肿瘤新类型,因其存在与乳腺分泌性癌类似的特异性的E-二十六变异基因6-神经营养酪氨酸受体激酶3融合基因而得名。MASC在病理形态上非完全特异,与诸多唾液腺肿瘤有重叠,所以在病理... 唾液腺乳腺样分泌癌(MASC)是一种近年来才被描述的唾液腺肿瘤新类型,因其存在与乳腺分泌性癌类似的特异性的E-二十六变异基因6-神经营养酪氨酸受体激酶3融合基因而得名。MASC在病理形态上非完全特异,与诸多唾液腺肿瘤有重叠,所以在病理诊断中经常将其诊断为腺泡细胞癌或黏液表皮样癌等。本文就MASC的临床表现、病理特点、分子生物学特征、鉴别诊断、预后和治疗等研究进展作一综述。 展开更多
关键词 乳腺样分泌癌 唾液腺乳腺样分泌癌 E-二十六变异基因6.神经营养酪氨酸受体激酶3融合基因 腺泡细胞癌 乳腺球蛋白
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计时电量法用于检测急性早幼粒细胞白血病PML/RARα融合基因的研究 被引量:4
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作者 汪红梅 翁少煌 +2 位作者 林丽清 林新华 陈元仲 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期872-876,共5页
以氯化六氨合钌([Ru(NH3)6]3+)为杂交指示剂,通过Au-S键的共价结合,将DNA探针固定在电极表面与互补靶序列杂交,构建了计时电量法(CC)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)中PML/RARα融合基因的电化学DNA传感器,并通过对比杂交前后电量的变化... 以氯化六氨合钌([Ru(NH3)6]3+)为杂交指示剂,通过Au-S键的共价结合,将DNA探针固定在电极表面与互补靶序列杂交,构建了计时电量法(CC)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)中PML/RARα融合基因的电化学DNA传感器,并通过对比杂交前后电量的变化检测互补序列及浓度。由于杂交前后与DNA链静电结合的[Ru(NH3)6]3+量不同而形成电量差值(ΔQ),随着靶序列浓度的增加,[Ru(NH3)6]3+引起的电量差值增大。在最佳实验条件下,此传感器显示了良好的特异性,能区分完全互补和错配序列,并可对融合基因进行定量。互补靶DNA序列在1.0×10-12~1.0×10-8 mol.L-1浓度范围内,ΔQ与DNA浓度的对数值呈良好的线性关系,检出限为4.0×10-13 mol.L-1。实验结果表明,以[Ru(NH3)6]3+为电化学指示剂的DNA传感器,能很好地对含PML/RARα融合基因的靶序列进行定性定量检测。 展开更多
关键词 DNA电化学杂交传感器 计时电量法 六氨合钌 PML/RARΑ融合基因
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纳米金放大计时库仑法的PML/RARα融合基因检测
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作者 王丽满 林丽清 +2 位作者 翁少煌 林新华 陈元仲 《电化学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期286-290,共5页
应用恒电位在金基底表面电化学沉积纳米金,通过Au—S键将巯基修饰DNA探针固定在纳米金表面,与互补靶序列杂交,构建计时库仑电化学DNA传感器,并检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因.采用扫描电子显微术(SEM)与电化学交流阻... 应用恒电位在金基底表面电化学沉积纳米金,通过Au—S键将巯基修饰DNA探针固定在纳米金表面,与互补靶序列杂交,构建计时库仑电化学DNA传感器,并检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML/RARα融合基因.采用扫描电子显微术(SEM)与电化学交流阻抗技术(EIS)观察纳米金和表征DNA传感器的构筑过程.以氯化六氨合钌([Ru(NH3)6]Cl3,RuHex)作电化学杂交指示剂,由计时库仑法检测人工合成APL的PML/RARα融合基因.结果表明,纳米金能放大RuHex检测信号,杂交前后电量差值(ΔQ)与靶标链DNA浓度的对数(lgC)值在1.0×10-13~1.0×10-9mol.L-1范围内呈线性关系,检出下限3.7×10-14mol.L-1(S/N=3).该法操作简便、特异性好,有望用于实际样品的检测. 展开更多
关键词 纳米金 计时库仑法 [Ru(NH3)6]Cl3 PML/RARΑ融合基因
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