MLTC上清对同种肿瘤细胞的杀伤作用

为探讨淋巴细胞与肿瘤细胞混合培养中淋巴细胞分泌的细胞毒因子，采用３ Ｈ Ｔｄ Ｒ 掺入试验，测定淋巴细胞和肿瘤细胞混合培养（ Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ）的上清液对艾氏腹水癌细胞（ Ｅ Ａ Ｃ）的细胞毒作用以及胸腺素对它的影响⒚结果表明：混合培养时间不同的 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 上清对不同瘤龄的 Ｅ Ａ Ｃ 均具有明显的杀伤作用（ Ｐ＜ ０．０１）；胸腺素能显著增强 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 上清对 Ｅ Ａ Ｃ 的细胞毒效应（ Ｐ＜ ０．０１）⒚说明在 Ｍ Ｌ Ｔ Ｃ 中，肿瘤细胞能刺激淋巴细胞转化。

氯化汞对小鼠睾丸间质瘤mLTC-1细胞增殖和孕酮合成的影响

目的:探讨氯化汞(HgCl2)对体外培养的小鼠睾丸间质瘤细胞mLTC-1活性及孕酮合成的影响。方法:分别以10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9和10-10mol/LHgCl2对mLTC-1细胞进行染毒,24h后噻唑蓝(MTT)法观察mLTC-1细胞活性;分别以10kU/L人绒毛膜促性腺激素(HCG)混以0、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L的HgCl2对mLTC-1细胞刺激2h,放射免疫法测定mLTC-1细胞孕酮的分泌量。结果:HgCl2在10-6～10-10mol/L剂量范围内对mLTC-1细胞活性无影响,10-5mol/LHgCl2刺激细胞增殖,10-4mol/LHgCl2抑制细胞增殖(F=5.268,P<0.001)。随HgCl2剂量由0增至10-6mol/L,mLTC-1细胞孕酮分泌量逐渐下降(F=4.76,P<0.001)。结论:HgCl2可以直接影响mLTC-1细胞活性及其孕酮的分泌。

低氧对原代睾丸间质细胞和细胞系TM3、MLTC-1中核呼吸因子1与睾酮合成的影响

目的:探究低氧条件下,小鼠原代睾丸间质细胞、小鼠睾丸间质细胞系TM3、小鼠睾丸间质瘤细胞系MLTC-1中核呼吸因子1(nuclear respiratory factor 1,NRF-1)表达和睾酮合成的变化。方法:低氧处理3种细胞12、24、48 h,采用Western Blot、实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)、细胞免疫荧光检测NRF-1蛋白水平和m RNA水平的变化;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养基中睾酮的含量。结果:(1)Western Blot、real-time PCR、免疫荧光实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组和MLTC-1细胞组中NRF-1蛋白水平和m RNA水平均显著下降,而TM3细胞中NRF-1 m RNA和蛋白水平显著上升;(2)ELISA实验证明,与常氧组比较,低氧处理后原代睾丸间质细胞组睾酮分泌水平明显下降,而TM3细胞组睾酮分泌水平显著上升。结论:低氧能诱发原代睾丸间质细胞、TM3细胞和MLTC-1细胞中NRF-1和睾酮水平发生明显变化,其中NRF-1变化与睾酮变化呈正相关。

L-精氨酸对热处理MLTC-1细胞氧化、凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响

试验旨在研究热处理对睾丸间质细胞的影响及L-精氨酸对热处理睾丸间质细胞抗氧化、抗凋亡及睾酮合成相关基因表达的影响。试验选用小鼠睾丸间质瘤细胞系(MLTC-1)细胞,将细胞分为4组,分别为对照组(C)、热处理组(HT)、5μg/mL L-精氨酸+热处理组(5H)和10μg/mL L-精氨酸+热处理组(10H),处理结束后收集培养上清液或细胞备用。结果显示:与C组相比,热处理显著降低MLTC-1细胞GSH-Px活力(P<0.01),当添加10μg/mL L-精氨酸后,GSH-Px活力得到恢复,并显著增加(P<0.01);热处理诱发细胞凋亡,添加L-精氨酸后,细胞凋亡数量明显降低;与HT组相比,添加5μg/mL L-精氨酸显著增加抗凋亡基因PI3K和Bcl-2的基因表达量(P<0.05);与HT组相比,5H组睾酮合成相关基因,StAR和Cyp17a1基因表达量极显著增加(P<0.01),SF-1的基因表达量也显著增加(P<0.05)。以上结果说明:L-精氨酸可缓解热处理诱导的MLTC-1细胞凋亡,增强MLTC-1细胞的抗氧化和抗凋亡能力,并可调控热处理MLTC-1细胞睾酮合成相关基因的表达。

基于层级图标签表示网络的多标签文本分类

多标签文本分类是一项基础而实用的任务,其目的是为文本分配多个可能的标签。近年来,人们提出了许多基于深度学习的标签关联模型,以结合标签的信息来学习文本的语义表示,取得了良好的分类性能。通过改进标签关联的建模和文本语义表示来推进这一研究方向。一方面,构建的层级图标签表示,除了学习每个标签的局部语义外,还进一步研究多个标签共享的全局语义;另一方面,为了捕捉标签和文本内容间的联系并加以利用,使用标签文本注意机制来引导文本特征的学习过程。在三个多标签基准数据集上的实验表明,该模型与其他方法相比具有更好的分类性能。

CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析

目的 了解慢性粒细胞白血病 (CML)细胞诱导T细胞的TCRVβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况 ,及其对CML细胞的杀伤活性。方法 采用混合淋巴细胞 肿瘤细胞培养 (MLTC)方法 ,利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖 ,用RT PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的 2 4个TCRVβ亚家族基因的互补决定区 (CDR3) ,了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点。并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性。结果 脐血T细胞表达 8～ 11个TCRVβ亚家族 ,经MLTC后 ,2～ 3个Vβ亚家族呈克隆性增殖 ,CML细胞诱导的自体T细胞的TCRVβ亚家族也类似。经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性。结论 CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCRVβ优势利用和克隆性增殖 ,诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用。

PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导CTL细胞杀伤活性分析

目的了解PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导体外诱导增殖的T细胞的特异性细胞毒作用.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,经丝裂霉素C处理的NB4细胞或PML-RARα多肽(LSSCITQGKAI-ETQSSSSEE)作为刺激原体外诱导脐血单个核细胞增殖.利用LDH方法检测诱导后T细胞的细胞毒性.结果PML-RARα多肽诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:49.65±6.7%(p<0.01)和73.13±8.42%(p<0.01),NB4细胞诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:53.33±8.82%(p<0.01)和74.46±9.57%(p<0.01),而无诱导组的第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:15.93±9.25%和38.19±10.54%,前两组T细胞对NB4细胞的杀伤作用均明显高于对照组.结论PML-RARα多肽和NB4细胞体外可诱导出特异性T细胞,他们对表达PML-RARα的NB4细胞具有选择性杀伤作用.

AML-M2a诱导TCR VβT细胞的克隆性增殖和细胞毒作用

目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞 的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况。结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人 T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79％和62.14±9.79％,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无 杀伤作用。TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖。结论:AML-M2a细胞可诱导健康人 T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主。

骨肉瘤患者外周血经体外诱导的rIL-2-CL和杀伤细胞的抗瘤活性

目的 研究骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外刺激后经rIL2诱导形成的细胞毒淋巴细胞和杀伤细胞的体外抗瘤活性。 方法 外周血淋巴细胞(PBL)在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞刺激5d再经rIL2诱导12d;单独rIL2激活培养PBL3～5d;分别获取rIL2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞和LAK细胞。 结果 rIL2对两种效应细胞诱导作用基本平行;rIL2CL第12d达到峰值,二周后仍保持相当强度;rIL2CL对人骨肉瘤细胞(OS细胞系)杀伤活性明显强于LAK细胞。 结论 rIL2CL主要是一种特异性较高、杀伤活性强烈CTL细胞群。

氯菊酯经IGF-I信号通路对类固醇激素合成的影响

目的首次探讨氯菊酯影响类固醇激素合成与IGF-I信号通路之间的关系。方法以小鼠睾丸间质瘤细胞株(MLTC-1)为染毒模型,讨论IGF-I信号通路在氯菊酯干扰孕酮合成中的作用。结果随着氯菊酯染毒剂量增加,IGF-ImRNA表达量明显降低;在人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下,氯菊酯显著抑制孕酮合成,且呈剂量-反应关系;培养液中加入IGF-I下游通路的抑制剂:LY294002(PI3kinase/Akt通路抑制剂),孕酮合成趋势与不加抑制剂一致;U0126(MEK1/2通路抑制剂),可明显抑制孕酮合成的下降趋势。结论氯菊酯干扰类固醇激素的合成可能涉及IGF-I信号通路。

B16与活化B细胞融合瘤细胞主动免疫诱导抗肿瘤作用的初步研究

通过５０％ＰＥＧ诱导细胞融合，ＨＡＴ选择培养得到Ｂ１６黑色素瘤与活化Ｂ淋巴细胞的融合细胞（Ｂ１６．Ｂ）。体外进行混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养，发现Ｂ１６．Ｂ能诱发小鼠脾脏淋巴细胞的增生反应，而Ｂ１６无此作用。体内实验表明：Ｂ１６．Ｂ３次免疫后，能获得对Ｂ１６攻击的抵抗，皮下形成肿瘤时间较Ｂ１６免疫组明显推迟，存活期也延长，但不能获得对无关瘤株的抵抗力。对荷瘤小鼠的治疗实验也显示，Ｂ１６．Ｂ腹腔注射能够明显抑制肿瘤生长，延长动物存活期。

CML相关抗原诱导正常T细胞增殖的TCR Vα基因选用和克隆性研究

目的:了解慢性粒细胞白血病(CML)相关抗原体外诱导T细胞的TCR Vα亚家族限制性表达和克隆性增殖情况。方法:采用混合淋巴细胞和肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用CML细胞、K562细胞和bcr3-abl2多肽体外诱导脐血或正常人的T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC后T细胞的29个TCR Vα亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各Vα亚家族的限制性表达情况和T细胞克隆性增殖特点。结果:经CML抗原刺激后增殖的T细胞仅表达部分Vα谱系基因(1-14个亚家族),两例脐血均出现有Vα3亚家族T细胞克隆性增殖趋势;正常人外周血出现寡克隆增殖的Vα5、Vα14亚家族T细胞。结论:CML相关抗原体外诱导脐血和正常人T细胞出现抗原相关的TCR Vα优势利用和克隆性增殖。

骨肉瘤患者外周血淋巴细胞体外相关瘤细胞致敏和rIL-2诱导的杀伤细胞

本实验对骨肉瘤患者外周血淋巴细胞(PBL)采用2种培养方法:(1)PBL在体外用患者肿瘤组织学相关传代骨肉瘤细胞(灭活处理)刺激5天再经rIL-2诱导12天;(2)单独rIL-2,激活培养PBL3～5天;分别获取rIL-2诱导体外刺激细胞毒淋巴细胞(rIL-2-CL)和LAK细胞。借助^(51)Cr释放试验对2种效应细胞形成及体外抗瘤能力进行比较性研究。结论:rIL-2-CL主要是一种特异性较高,杀伤活性强烈CTL细胞群,对抗LAK细胞的骨肉瘤细胞具有明显杀伤效应。

应用肺癌细胞系诱生肿瘤特异性T细胞的初步研究

目的探讨通过构建表达人白细胞抗原(HLA)HLA-A2的肺癌细胞系以诱生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。方法将编码HLA-A2基因的质粒pcDNA3.1D/V5转染人肺腺癌A549细胞,得到能够稳定表达HLA-A2的肺腺癌细胞系。将其用丝裂霉素(MMC)处理后,行混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(mixed lymphocyte tumor cell culture,MLTC)以诱导HLA-A2+的健康人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)产生肿瘤特异性CTL,并通过特异性杀伤实验、单克隆抗体阻断实验、淋巴细胞增殖实验进行检验。结果HLA-A0201基因在A549细胞中的瞬时与稳定表达率分别为0.32、0.91。成功获得稳定表达HLA-A2的A549细胞株。MLTC诱导最终产生4组T淋巴细胞,且符合肿瘤特异性CTL的形态学特征与大量增殖的特点,但CTL杀伤实验和单克隆抗体阻断实验结果示肿瘤细胞未被有效杀伤,可能与肿瘤特异性CTL的数量较少及活性较低有关。结论本研究通过构建表达HLA-A2的肺癌细胞系,对建立肿瘤特异性CTL模型作了初步探讨,为进一步完善肺癌特异性CTL细胞模型并为研究肿瘤免疫逃避、免疫耐受及反杀伤淋巴细胞等生物学行为打下基础。

绞股蓝浸出液的抑瘤作用

定期给荷瘤小鼠注射或灌服一定剂量浓度的绞股蓝浸出液后,小鼠体质增强,胸腺的萎缩速度减慢,每克体重的胸腺和脾脏重均显著高于对照组.胸腺与脾脏每克重细胞数增多.每克体重的瘤重明显降低,瘤细胞数减少,取荷瘤小鼠胸腺淋巴细胞与瘤细胞离体混合培养后,被致敏的淋巴细胞的“粘瘤”和“钻瘤”作用加强,癌细胞发生轻度皱缩,淋巴细胞钻入的癌细胞发生裂解,碎片逐渐增多,而淋巴细胞的形态和数量无变化.实验结果表明:纹股蓝浸出液具有增强荷瘤小鼠免疫力和抑制;肿瘤生长的作用。