MMP-9及TIMP-1mRNA在甲状腺肿瘤中的表达及临床意义

目的:研究MMP-9及TIMP-1mRNA在不同类型甲状腺肿瘤组织及不同临床病理特征甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达,探讨其在甲状腺癌浸润、转移中的作用。方法:采用石蜡切片、原位杂交法检测了20例甲状腺乳头状癌,20例甲状腺腺瘤,20例结节性甲状腺肿和20例癌旁正常甲状腺组织中MMP-9、TIMP-1mRNA的表达。结果:与癌旁正常甲状腺比较各类型肿瘤组织中MMP-9mRNA杂交信号均呈增强的趋势(P<0.01),与甲状腺癌比较,结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织中MMP-9mRNA杂交信号均呈减弱的趋势(P<0.05);同时,MMP-9mRNA在甲状腺癌中的表达与肿瘤的大小、临床分期、淋巴结转移、预后指数呈正性调节关系(MMP-9mRNA表达高者恶性度高、预后差,P<0.05或P<0.01)。TIMP-1mRNA在癌旁正常甲状腺组织、良性甲状腺结节及甲状腺癌中均有不同程度的表达,与癌旁正常甲状腺组织比较各类型肿瘤组织中TIMP-1mRNA表达均呈增加的趋势,但只有甲状腺癌组明显高于正常甲状腺组,差异有显著(P<0.05);与甲状腺癌比较,结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织中TIMP-1mRNA表达没有明显改变(P>0.05);同时TIMP-1mRNA在甲状腺癌中的表达与临床病理特征呈负性调节关系(TIMP-1mRNA表达低者恶性度高、预后差,P<0.05或P<0.01)。结论:MMP-9及TIMP-1mRNA的表达与甲状腺癌的浸润、转移密切相关,MMP-9及TIMP-1mRNA表达有望成为判断甲状腺乳头状癌浸润、转移和预后较可靠的指标。

益气养阴、活血化瘀方对病毒性心肌病小鼠心肌MMP-1 mRNA表达的影响

目的观察益气养阴、活血化瘀方对病毒性心肌病小鼠心肌基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)mRNA表达的影响。方法采用反复腹腔注射柯萨奇B3m病毒的方式复制动物模型;270只Balb/c小鼠随机分为5组,空白组30只,模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组各60只;HE和VG染色观察小鼠心肌形态学变化;RT-PCR法检测心肌组织MMP-1 mRNA的表达水平。结果益气养阴、活血化瘀方能明显改善病毒性心肌病小鼠心肌病理形态及超微结构的变化,下调心肌组织MMP-1 mRNA的表达水平,以中药高剂量组效果最显著,MMP-1为0.35±0.11。结论益气养阴、活血化瘀方能通过下调MMP-1 mRNA的表达,抑制细胞外基质降解及心肌重构,这可能是其防治病毒性心肌病的作用机制之一。

心痛方对急性心肌梗死大鼠MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的通过观察心痛方对大鼠急性心肌梗死(AMI)后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达及对心肌形态学的影响,探讨心痛方治疗AMI的疗效机制。方法 80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心痛方组、双抗组(阿司匹林+氯吡格雷),冠脉结扎法制备AMI模型,灌胃给药7 d后处死大鼠,运用RT-PCR法测定心肌组织MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA表达,心肌细胞HE染色观察形态学改变。结果心痛方能使AMI大鼠心肌内MMP-9 mRNA表达减少(P<0.01);TIMP-1mRNA表达升高(P<0.01);MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值降低(P<0.01);心肌损伤程度及心梗面积与MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值呈正直线相关。结论心痛方对AMI缺血心肌具有保护作用,其作用机制可能与增加TIMP-1 mRNA表达,降低MMP-9 mRNA表达,从而调节MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA的平衡有关。

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血SD大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响随机平行对照研究

[目的]观测蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达影响。[方法]使用随机平行对照方法,45只SD大鼠常规饲料喂养3d,称重后随机数字表法分为5组,假手术组、模型组、蛭龙活血通瘀低、中、高剂量组(简称"ZL低、中、高剂量组"),9只/组。按指标检测时间分为12h、48h、72h三个亚组,3只/组。自体尾部血注入法复制脑出血大鼠模型。灌胃干预:蛭龙活血通瘀胶囊按人体用量(3.6g/d)5倍、10倍、20倍定为低、中、高剂量。RT-PCR法检测AQP-4、MMP-9、TIMP-1 mRNA表达。[结果]AQP-4 mRNA:假手术组有微量表达,12h、48h及72h表达无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组呈进行性升高,72h最为显著;ZL各剂量组表达均低于模型组(P<0.01);各时间点低、中剂量组均高于ZL高剂量组(P<0.01)。MP-9 mRNA:假手术组有少量表达,术后12h、48h及72h表达无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组术后48h上升明显并达到高峰,72h略有下降,ZL各剂量组均低于模型组(P<0.01);ZL低、中剂量组在各时点均明显高于高剂量组(P<0.01)。TIMP-1 mRNA:假手术组仅有微量表达,术后12h、48h及72h无明显差异(P>0.05);模型组及ZL低、中、高剂量组各时点均明显高于假手术组(P<0.01);模型组48h上升明显并达到高峰,72h略有下降;ZL各剂量组各时点均高于模型组(P<0.01);ZL低、中剂量组各时点均明显高于高剂量组(P<0.01)。[结论]蛭龙活血通瘀胶囊可明显降低脑出血大鼠脑组织AQP-4、MMP-9 mRNA,升高TIMP-1 mRNA,呈量效关系,ZL高剂量组作用最为明显。

葛根素联用氯沙坦对肾性高血压大鼠心肌MMP-1/TIMP-1比值的影响

目的观察葛根素联用氯沙坦对肾性高血压大鼠心肌MMP-1/TIMP-1 mRNA及蛋白表达比值的影响。方法 SD大鼠65只,雄性,随机抽取8只为假手术组,其余采用两肾一夹法造成肾性高血压大鼠模型。造模成功的大鼠随机分成葛根素高、中、低剂量组,氯沙坦组,联用组以及模型组(n=8)。连续给药8周后计算左心室质量指数(LVWI),Masson染色观察胶原纤维改变,并计算心肌胶原容积分数;测心肌羟脯氨酸(HYP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平,RT-PCR及Western blot测心肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA及蛋白表达。结果与模型组相比,各用药组心肌胶原容积分数、HYP水平降低(P<0.01或P<0.05),联用组效果最好(P<0.05);葛根素高、中剂量组和联用组心肌AngⅡ水平显著降低(P<0.01或P<0.05),联用组效果最好(P<0.05);除葛根素低剂量组外其他用药LVWI显著降低(P<0.01或P<0.05),MMP-1与TIMP-1 mRNA及蛋白表达的比值显著降低(P<0.05),联用组效果最好(P<0.05)。结论葛根素联用氯沙坦能显著下调心肌局部MMP-1/TIMP-1 mRNA及蛋白比值,改善肾性高血压大鼠心肌纤维化。

基质金属蛋白酶-1 mRNA、A-2巨球蛋白mRNA在创伤性关节炎病人软骨中的表达及与病情严重程度的相关性

目的探究基质金属蛋白酶-1(MMP-1)mRNA、A-2巨球蛋白(A2M)mRNA在创伤性关节炎(PTOA)病人软骨中的表达及与病情严重程度的相关性。方法前瞻性选取开封市中心医院2018年1月至2019年6月收治的PTOA病人76例作为PTOA组,另选取同期该院类风湿性关节炎(RA)病人72例作为RA组,比较两组、不同病情分级病人软骨中MMP-1 mRNA、A2M mRNA表达量,受试者工作特征曲线(ROC曲线)及曲线下面积(AUC)分析两者对PTOA、RA鉴别诊断价值,采用logistic回归分析探究MMP-1 mRNA、A2M mRNA与病情严重程度的关系,Pearson分析MMP-1 mRNA、A2M mRNA表达量与膝关节评分法(KSS)、美国特种外科医院(HSS)评分相关性。结果PTOA组软骨中MMP-1 mRNA为(0.52±0.13),A2M mRNA为(1.06±0.35),分别低于RA组的(0.67±0.16)、(1.53±0.51)(P<0.05);鉴别诊断PTOA、RA的AUC:MMP-1 mRNA+A2M mRNA>A2M mRNA>MMP-1 mRNA;MMP-1 mRNA随病情分级增加呈逐渐升高趋势,A2M mRNA表达量、KSS、HSS评分呈下降趋势(P<0.05);MMP-1 mRNA、A2M mRNA与PTOA病情程度显著相关(P<0.05);MMP-1 mRNA与KSS、HSS评分呈负相关,A2M mRNA表达量与KSS、HSS评分呈正相关(P<0.05)。结论软骨中MMP-1 mRNA、A2M mRNA在PTOA中较RA呈低表达;且前者与病情呈正相关,与关节功能呈负相关,后者则完全相反。调控MMP-1 mRNA、A2M mRNA表达可能为PTOA的治疗提供了一个潜在思路。

化瘀解毒汤抗肾间质纤维化的实验研究

目的 :探讨化瘀解毒汤抑制肾间质纤维化的可能作用机制。方法 :采用单侧输尿管梗阻 (UUO)法诱导肾间质纤维化动物模型 ,以免疫组化和原位杂交方法分别检测大鼠肾间质组织ECM成分 (Ⅰ、Ⅲ型胶原 )、TGFβ1mRNA及MMP1mRNA表达 ,并做相关肾组织学检查。结果 :模型组和各治疗组大鼠肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原面积比及TGFβ1mRNA的平均吸光度值显著增加 (P <0 .0 5 ) ,MMP1mRNA平均吸光度值显著降低 (P<0 .0 5 ) ;各治疗组大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原面积比及TGFβ1mRNA平均吸光度值较模型组减少 (P <0 .0 5 ) ,MM P1mRNA平均吸光度值较模型组增加 (P <0 .0 5 ) ;治疗组中以中药预防组鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原面积比及TG Fβ1mRNA平均吸光度值最低、MMP1mRNA平均吸光度值最高 (P <0 .0 5 )。经治疗后肾脏组织病理检查有明显改善。结论 :化瘀解毒汤通过下调TGFβ1mRNA表达、上调MMP1mRNA表达 ,以抑制肾间质ECM的增生和积聚 ,防止肾间质的纤维化。

平喘宁对哮喘大鼠肺组织Raf mRNA、ERK1 mRNA表达的影响

目的:观察平喘宁对哮喘大鼠Raf mRNA、ERK1 mRNA表达及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)含量的影响,探讨其治疗哮喘的相关作用机制。方法:雄性Wistar大鼠70只,随机分为正常组、模型组、地塞米松组、桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组,每组10只。以卵蛋白致敏及寒冷刺激复制大鼠哮喘模型,造模21d后,正常组、模型组每天给予蒸馏水灌服,其它各组给予相应药物灌服,4周后解剖大鼠并取出肺组织。用SP免疫组化法观察TIMP-1、MMP-9含量,用RT-PCR法观察Raf mRNA、ERK1mRNA在平喘宁治疗哮喘前后的变化。结果:与正常组比较,模型组肺组织MMP-9、TIMP-1、Raf mRNA、ERK1mRNA显著性上调(P<0.01);与模型组比较,各治疗组以上指标均有不同程度的下调(P<0.05,P<0.01);平喘宁中、高剂量组和地塞米松组比较,无显著性差异。结论:平喘宁可通过下调MMP-9和TIMP-1的表达,并调节MMP-9/TIMP-1之间的平衡,显著降低哮喘大鼠肺组织ERK信号通路Raf mRNA、ERK1 mRNA的表达而治疗哮喘。

祛瘀化痰、散结消癥中药复方对细胞外基质降解调控系统及TGF-β_1 mRNA的影响

目的:研究祛瘀化痰、散结消癥中药复方对肾小球硬化中细胞外基质(ECM)降解调控系统及转化生长因子(TGF)-β1 mRNA的影响。方法:采用脂多糖刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,复制细胞增殖模型,用给药动物血清干预后,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)的表达,计算MMP-9与TIMP-1比值,荧光定量PCR法检测细胞TGF-β1 mRNA表达。结果:各祛瘀化痰、散结消癥中药复方均能不同程度地抑制TIMP-1、上调MMP-9的表达,提高MMP-9与TIMP-1的比值,并下调细胞中TGF-β1 mRNA表达,其中以川芎+鳖甲+海藻组作用最明显。结论:祛瘀化痰、散结消癥中药复方能增强ECM降解,下调肾小球系膜细胞中TGF-β1 mRNA表达。

镰形棘豆总黄酮对TGF-β_1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化因子的影响

目的:研究镰形棘豆总黄酮防治肾间质纤维化作用及其机制。方法:大鼠按300 mg.kg-1ig镰形棘豆总黄酮,连续给药3 d后制备含药血清,空白组大鼠ig同体积生理盐水制备空白血清。将人肾小管上皮细胞(HK-2)用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,分为4组:空白对照组、单纯转化生长因子-β1(TGF-β110μg.L-1)诱导组、空白血清对照组(TGF-β110μg.L-1+10%空白血清)、干预组(TGF-β110μg.L-1+10%镰形棘豆总黄酮含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,CTGF,PAI-1 mRNA的表达显著上升,而MMP-9 mRNA的表达减弱,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05),经镰形棘豆总黄酮药物血清干预后,CTGF、PAI-1 mRNA的表达逐步下降,而MMP-9 mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化细胞因子CTGF,PAI-1和MMP-9的mRNA表达有关。