miR-194-3p靶向调控MMP-11抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究miR-194-3p对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:实验设置空白对照组(control)、miR-194-3p-mimics组(转染miR-194-3p-mimics)、miR-194-3p-inhibitor组(转染miR-194-3p-inhibitor)、siRNA-MMP-11组(转染siRNA-MMP-11)、ovRNA-MMP-11组(转染ovRNA-MMP-11)、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组(转染miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11),均以脂质体法转染至人成骨肉瘤细胞Saos-2;MTT法检测细胞增殖率;Transwell实验检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;蛋白印迹实验(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶11(MMP-11)蛋白表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-194-3p的表达水平。结果:MTT法检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组会降低细胞增殖,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P<0.05)。细胞划痕实验检测结果显示:miR-194-3p-mimics组、siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组细胞愈合率明显低于ovRNA-MMP-11组(P <0.05)。细胞侵袭实验检测结果显示:siRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组降低细胞侵袭能力,并与空白对照组和ovRNA-MMP-11组相比有统计学差异(P <0.05)。qRT-PCR检测结果显示:miR-194-3p-mimics组中miR-194-3p的表达水平与空白对照组、miR-194-3p-inhibitor组、siRNA-MMP-11组、ovRNA-MMP-11组、miR-194-3p-mimics+ovRNA-MMP-11组相比均有统计学差异(P <0.05)。结论:miR-194-3p在人成骨肉瘤细胞中高表达,并可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控MMP-11所参与的上皮间充质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)信号通道有关,miR-194-3p将来可能为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。

EIF3h、MMP-10和MMP-11在结肠腺癌中的表达及意义

目的检测结肠腺癌中真核翻译起始因子3h(eukaryotic translation initiation factor 3 h,EIF3h)、基质金属蛋白酶-10(matrix metallopeptidase 10,MMP-10)和MMP-11的表达,分析其相关性.方法选择110例经病理医师确诊的结肠腺癌作为观察组,选择43例结肠黏膜高级别上皮内瘤变组织作为对照组1,选择43例结肠黏膜低级别上皮内瘤变组织作为对照组2,选择43例非肿瘤性结肠黏膜组织作为对照组3.应用免疫组化法检测四组中EIF3h和MMP-10、MMP-11蛋白的表达.结果四组中EIF3h、MMP-10和MMP-11的表达差别有统计学意义,观察组中三种蛋白的表达与淋巴结转移相关,EIF3H的表达与肿瘤最大径、分化程度、增殖指数及TNM分期相关,MMP-10、MMP-11与脉管累犯相关.三者均与性别、年龄和炎细胞浸润程度无关.观察组中MMP-10和MMP-11呈正相关.结论结肠腺癌中三者高表达是促进肿瘤形成和进展的重要因素之一,MMP-10和MMP-11之间可能具有协同正向作用.EIF3h可能与预后有关.

隆突性皮肤纤维肉瘤和纤维组织细胞瘤中MMP-11的表达及意义

目的研究MMP-11在隆突性皮肤纤维肉瘤和纤维组织细胞瘤中的表达特点及诊断价值。方法对30例隆突性皮肤纤维肉瘤、30例纤维组织细胞瘤组织采用免疫组化SP法检测MMP-11和CD34的蛋白表达以及Western Blot检测MMP-11的蛋白表达。结果免疫组织化学MMP-11在纤维组织细胞瘤中的阳性表达率为93.3%(28/30),在隆突性皮肤纤维肉瘤中阳性表达率为3.4%(1/30),二者之间的表达差异有统计学意义(P<0.05);CD34在隆突性皮肤纤维肉瘤中的阳性表达率为90.0%(27/30),在纤维组织细胞瘤中阳性表达率为6.7%(2/30),二者之间的表达差异有统计学意义(P<0.05)。Western Blot检测显示,MMP-11在纤维组织细胞瘤中的表达水平是隆突性皮肤纤维肉瘤的6.18倍,二者之间的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论MMP-11有望作为鉴别诊断隆突性皮肤纤维肉瘤和纤维组织细胞瘤的新型标记物。

Hydroxamate类抑制剂与MMP—3的结合自由能的计算

用自由能微扰方法(FEP)计算了两种hydroxamate类的抑制剂和MMP-3的相对结合自由能.在计算中,对于催化区的锌离子与其共价结合的配体(包括抑制剂和组氨酸)采用了键合的模型,抑制剂和周围配体的部分电荷的计算采用两步静电势收敛方法.自由能计算采用了慢增长(Slow growth)和固定窗口增长(Fixed width window growth)两种方法,并且在每次计算中都采用了双向采样(Double-wide sampling)的策略.两种方法计算得到的相对结合自由能都能和实验值很好的符合.同时从动力学模拟的得到的分子轨迹得到了抑制剂和受体之间相互作用模式,抑制剂的P1部分可以和受体的S1′口袋形成很强的范德华和疏水相互作用,P1上的苯环可以和Tyr223上的苯环形成较好的π键堆积相互作用.