角质形成细胞Wnt5a调控MMP9参与CRPS-Ⅰ型外周敏化机制研究

目的探究皮肤角质形成细胞Wnt5a通过靶向调控基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase⁃9,MMP9)的表达参与复杂区域疼痛综合征(complex regional pain syndrome,CRPS)⁃Ⅰ型外周敏化的机制,寻找该慢性疼痛的潜在治疗策略。方法本研究分为两部分,第一部分为体外实验。体外培养人永生化角质形成细胞HaCaT进行氧糖剥夺/复氧(oxygen⁃glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)处理,初步观察OGD/R早期(24 h内)线粒体损伤及膜电位变化,并探究给予不同浓度Wnt5a抑制剂Box5对MMP9的影响。第二部分为动物实验。将大鼠随机分为慢性缺血后疼痛(chronic postischemia pain,CPIP)组、Box5(20)组、Box5(40)组和对照组,每组8只,CPIP组、Box5(20)组、Box5(40)组先建立大鼠患肢缺血再灌注CPIP模型,模拟CRPS⁃Ⅰ型病理生理过程,Box5(20)组和Box5(40)组在此基础上分别足底注射20μmol/L和40μmol/L Box5溶液100μL,对照组和CPIP组则分别注射生理盐水100μL。通过疼痛行为学测定观察4组大鼠2周内不同时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛和热痛阈值变化情况。HE染色观察大鼠皮肤炎症浸润及角化情况,免疫荧光染色观察4组MMP9的表达情况,ELISA检测4组背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的IL⁃1β及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)水平。结果体外实验:HaCaT细胞进行OGD/R处理后,MMP9平均荧光强度显著增加(P<0.001);透射电镜下观察到OGD/R组出现线粒体明显萎缩,线粒体膜电位检测显示,与对照组相比,OGD/R组提示线粒体膜电位下降明显(P=0.027)。动物实验:与OGD/R组相比,仅Box5(40)组线粒体膜电位上升具有统计学差异(P=0.046)。行为学检测发现CPIP组大鼠术后各时间点(D1,D2,D4,D10,D14)机械痛阈值和热痛阈值均显著降低(P均<0.05)。HE染色提示CPIP组大鼠患足真皮层出现大量炎症细胞浸润,表皮出现过度角化,颗粒层及棘层厚度显著增加(P<0.001)。免疫荧光试验显示,CPIP组角质形成细胞MMP9荧光强度显著增加(P<0.001);与CPIP组相比,Box5(20)组(P=0.002)和Box5(40)组(P<0.001)MMP9荧光强度均显著下降。ELISA检测结果显示,CPIP组IL⁃1β(P=0.048)和TNF⁃α浓度(P=0.002)显著升高;与CPIP组相比,Box5(40)组IL⁃1β(P=0.047)和TNF⁃α浓度(P=0.047)显著下降。结论外周局部缺血再灌注损伤可导致角质形成细胞MMP9过度表达,引起CRPS⁃Ⅰ型外周敏化。靶向抑制Wnt5a/MMP9可逆转CPIP大鼠疼痛行为,为临床治疗慢性痛提供了参考依据。

UHRF1通过WNT/MMP9信号通路抑制结直肠癌细胞的侵袭和迁移

目的探索UHRF1基因与结直肠癌(CRC)患者临床病理特性的关系,慢病毒转染过表达和敲减UHRF1对CRC细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能的信号通路。方法免疫组织化学和RT-PCR法检测112例CRC癌组织与癌旁组织UHRF1的表达。构建慢病毒转染过表达和敲减UHRF1载体,分别转染SW480和HCT116细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染前后及IWP-2(WNT拮抗剂)和HLY78(WNT活化剂)干预前后的UHRF1、WNT信号通路关键分子和MMP9的表达。EDU检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果(1)TCGA数据库和临床数据中,癌组织中UHRF1 m RNA和蛋白表达均高于正常组织。UHRF1表达量与TNM分期、N和M分期密切相关。TCGA中UHRF1低表达患者有更长的5年OS和疾病相关存活时间(DSS),UHRF1预测1、3和5年OS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.634、0.652和0.771;在临床数据中3年OS也有相同生存获益,UHRF1高表达是CRC不良预后因素。(2)过表达UHRF1后,SW480中WNT3a、GSK3β和MMP9分子表达明显升高,p-β-catenin表达下降(P<0.05);敲减UHRF1后,HCT116细胞中WNT3a、GSK3β、MMP9表达下降,而p-β-catenin表达升高(P<0.05);分别用IWP-2和HLY78进行“拯救”实验,能够获得一致结果。(3)过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组;IWP-2处理后,细胞增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。敲减实验呈现与过表达实验相反的结果。结论UHRF1在CRC发生发展中可能具有重要作用,UHRF1高表达可能是CRC不良预后因素,UHRF1可能通过WNT/MMP9信号通路来影响CRC的增殖、迁移和侵袭。

桑色素通过抑制MMP9表达改善慢性阻塞性肺疾病

目的探讨桑色素通过调控基质金属蛋白酶9(MMP9)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)动物和细胞模型的影响。方法运用SwissTargetPrediction数据库预测桑色素的基因靶点;GeneCards、OMIM及DisGenet数据库对COPD的风险基因进行预测并且借助Venny在线网站对COPD相关基因靶点和桑色素基因靶点取交集;利用String数据库完成蛋白质互作用(PPI)分析并借助Cytoscape 3.8.2软件完成拓扑学分析;借助分子对接技术对药物成分-基因靶点的对接情况进行验证;构建COPD大鼠模型并且验证桑色素对COPD大鼠模型的治疗作用;构建COPD细胞模型并且干预细胞中MMP9的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测炎性因子浓度。结果SwissTargetPrediction数据库预测得到96个桑色素的基因靶点,GeneCards、OMIM、DisGenet数据库预测得到7122个COPD的基因靶点,取交集得到67个桑色素和COPD的共同作用基因靶点;拓扑学分析显示交集基因靶点中互作用较强的前5个基因靶点为SRC、MMP9、MMP2、PTGS2、FURIN;分子对接结果显示MMP9与桑色素结合活性最好;动物实验表明桑色素能够改善COPD大鼠呼吸功能参数、肺组织病理损伤并且抑制肺组织中MMP9的表达(P<0.05);细胞实验显示桑色素能够增加COPD细胞模型的细胞活力,抑制MMP9的表达(P<0.05)。此外,桑色素能够抑制COPD细胞模型的细胞凋亡率以及炎性因子表达,但该作用被MMP9过表达载体逆转(P<0.05)。结论桑色素能够通过抑制MMP9的表达COPD细胞模型细胞凋亡以及炎性因子表达,减少动物模型肺组织病理改变。

猪MMP9基因的多态性与产仔数性状的关联分析

通过比较序列测定法,在MMP9基因第10内含子发现C/T突变,建立了PCR-Sma I-RFLP分型技术,并在淮猪新品系Ⅱ猪种中进行多态性分型,分析其基因型频率和等位基因频率,检测该位点的多态性并与产仔数性状进行关联分析。结果表明,在淮猪新品系Ⅱ猪群中,所有胎次产仔数呈TC>CC>TT的趋势,TC型个体的所有胎次产仔数显著高于CC型个体0.776头(P<0.05)。因此,MMP9基因在淮猪新品系Ⅱ猪群中与产仔数性状显著相关,为提高猪产仔数性状提供一个有用的分子标记。

芒果苷通过MMP9调控巨噬细胞M2极化对胰腺癌的作用及其机制研究

目的:探讨芒果苷通过MMP9调控M2型巨噬细胞极化治疗胰腺癌的作用及机制。方法:在体内水平绘制肿瘤生长曲线,免疫组化染色评价芒果苷对胰腺癌的治疗效果;免疫荧光、ELISA检测芒果苷对胰腺癌中M2型巨噬细胞表达的影响;免疫荧光、ELISA、Western blot及qRT-PCR检测芒果苷对MMP9以及下游M2型巨噬细胞极化相关信号通路表达的影响。在体外水平利用MTT检测M2型极化巨噬细胞对胰腺癌的作用及芒果苷对胰腺癌的治疗效果;ELISA检测芒果苷对M2型极化巨噬细胞的影响;免疫荧光及Western blot检测芒果苷对MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达的影响。结果:小鼠胰腺癌模型中,芒果苷可抑制胰腺癌生长,且可抑制胰腺癌中M2极化巨噬细胞表达;同时芒果苷可抑制胰腺癌中MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达。在M2型极化巨噬细胞-胰腺癌细胞共培养模型中,芒果苷抑制胰腺癌细胞增殖,抑制巨噬细胞M2型极化,同时抑制MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达。结论:芒果苷可通过抑制MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路抑制巨噬细胞M2极化治疗胰腺癌。

基于NF-κB/MMP9信号轴研究姜黄素对卵巢癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨核因子-κB(NF-κB)/基质金属蛋白酶9(MMP9)信号轴在姜黄素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖中的作用,为姜黄素的利用提供依据。方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞,随机分为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组和对照组,乳酸脱氢酶(LDH)实验检测姜黄素对SKOV3细胞毒性,MTT法检测卵巢癌SKOV3细胞的增殖情况。根据LDH和MTT实验结果,对10μmol/L、20μmol/L姜黄素组和对照组进行进一步分析,RT-PCR和Western blot检测卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB、MMP9 mRNA和蛋白相对表达水平。结果随着剂量的增加,姜黄素对SKOV3细胞的毒性增强,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,随着剂量的增加,姜黄素可以显著降低卵巢癌SKOV3细胞的存活率,并具有剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。姜黄素可以显著降低SKOV3细胞中NF-κB和MMP9 mRNA相对表达水平,降低SKOV3细胞中p-NF-κB和MMP9蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能够有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,NF-κB/MMP9信号轴在此过程中起到重要的调节作用。

Lnc721靶向调控MMP9对牛骨骼肌卫星细胞增殖分化的影响

【背景】肌肉系统是维持动物体生存生长的重要基础,在哺乳动物肌肉中,将近一半的肌肉为骨骼肌,骨骼肌通过细胞繁育增殖到迁移融合,逐步形成了具有收缩能力的附着在骨骼上的成熟肌束。在机体内,骨骼肌不仅参与动物生长,也参与呼吸、代谢等生理活动。目前许多研究表明,lncRNA具有调控肌肉生长发育的作用,是影响骨骼肌功能、疾病的关键因子。但由于lncRNA作用机制复杂,方式多样,在物种间保守型很低,故不同种属动物lncRNA之间作用关系不大,且大多数研究存在于人和小鼠等生物体内,而对牛肌肉生长影响的研究内容极少。近年来,人们发现lncRNA会与某些靶基因相互作用,进而调控肌肉细胞的发生过程。【目的】在前期采集不同月龄不同组织部位的牛肌肉,进行高通量测序,获得高表达差异的lncRNA,在对其调控成肌过程进行机制研究的基础上,探究长链非编码RNA lnc721与其靶基因MMP9的互作关系,以及MMP9对牛骨骼肌细胞生长发育的影响,以期为牛骨骼肌发育调控机制的研究提供参考。【方法】前期试验发现干扰lnc721对牛骨骼肌卫星细胞增殖具有正调控作用,且对其分化具有负调控作用。为了进一步探究lnc721对牛肌肉发育的调控通路。分别在牛骨骼肌卫星细胞的分化期设置了3个干扰lnc721牛骨骼肌卫星细胞组,与3个对照组采用NGS技术进行转录组测序,以期获得lnc721差异靶基因,进一步研究lnc721对牛骨骼肌发育的调控通路。根据筛选结果以及qRT-PCR的验证结果,试验选取MMP9作为lnc721的靶基因,并通过CatRAPID网站对lnc721与MMP9结合能力进行预测。设计并合成lnc721及MMP9干扰序列,转染至牛骨骼肌卫星细胞中,通过qRT-PCR、Western blot技术在mRNA水平与蛋白质水平分析下调lnc721对MMP9表达情况的影响。并且通过下调MMP9,采用qRT-PCR、Western blot与EdU技术检测增殖标志因子Ki67、Pax7以及分化标志因子MyHC与MyOG的表达情况,以反映下调MMP9对牛骨骼肌卫星细胞生长发育的影响。【结果】CatRAPID结果显示,lnc721与MMP9结合倾向为0.75,共有9个结合位点,二者存在互作结合。干扰lnc721之后,采用qRT-PCR分析,结果表明在细胞增殖期下调lnc721可以极显著抑制MMP9表达(P<0.01),而在分化期则极显著促进MMP9的表达(P<0.01),证实了MMP9为lnc721调控牛骨骼肌卫星细胞互作的靶基因。进而下调MMP9,检测对增殖期细胞的影响,发现Ki67的mRNA水平表达极显著上调(P<0.01),Pax7蛋白表达量显著上调(P<0.05),EdU观察下调MMP9后的阳性细胞率也明显升高。同样检测下调MMP9之后对细胞分化期的影响,发现下调MMP9后镜下观察发现下调MMP9会抑制肌管形成,同时MyHC的mRNA和蛋白表达量极显著下降(P<0.01),MyoG蛋白表达量显著下调(P<0.05)。【结论】lnc721与MMP9相互结合。在细胞增殖期干扰lnc721极显著抑制MMP9表达,而在分化期促进MMP9的表达,且干扰MMP9可促进细胞增殖并抑制分化。证明lnc721靶向MMP9调控牛骨骼肌卫星细胞的发育。

Altered Expression of COMP,Collagen 1,and MMP9 in Pelvic Organ Prolapse

Female pelvic organ prolapse(POP)is a common disorder that affects the quality of life of women considerably.Studies in China have reported a 9.6%prevalence of symptomatic POP in adult women[1],with a higher prevalence among older women.

大肠癌中CCR7、L-selectin、CD44v6和MMP9表达及其与淋巴转移的关系

目的探讨CC趋化因子受体7(CCR7)、L-selectin、CD44v6和MMP9在大肠癌组织中的表达及其与大肠癌淋巴转移的关系。方法采用免疫组化PV 9000两步法检测104例大肠癌组织(大肠癌组)、55例癌旁正常组织(癌旁组)和34例转移灶组织(转移组)中CCR7和L-selectin、CD44v6和MMP9的表达。结果大肠癌组、转移组中CCR7、L-selectin、CD44v6和MMP9阳性率明显高于癌旁组(P<0.05),有淋巴结转移者明显高于无转移者(P<0.05);CCR7与L-selectin、MMP9表达呈正相关(P<0.05);CD44v6与L-selectin、MMP9表达相关;L-selectin与MMP9的表达呈正相关。结论 CCR7、L-selectin、CD44v6和MMP9在大肠癌中的表达与大肠癌的发生、淋巴转移有关,它们可能共同参与了大肠癌发生及淋巴结转移过程。

PCNA、P16、MMP9在人参皂甙Rg3抗肝癌淋巴道转移中的表达及意义

目的 :通过检测PCNA、P16及MMP 9在人参皂甙Rg3抗荷瘤小鼠淋巴道转移中的表达 ,探讨人参皂甙Rg3抗肿瘤作用的机制。方法 :建立小鼠肝癌淋巴道转移模型 ,应用免疫组织化学方法检测PCNA、P16及MMP 9在各实验组 (Rg3预防组、Rg3治疗组、Rg3+DDP合用组、DDP阳性对照组和生理盐水阴性对照组 )的原发瘤及相应转移瘤 (淋巴结 )中的表达水平。结果 :应用人参皂甙Rg3组较未用药组 ,PCNA及MMP 9在原发瘤的表达减少 ,P16的表达增加 ,差异显著 (P <0 0 0 1) ;而在转移瘤中的变化不明显。结论 :人参皂甙Rg3抗淋巴道转移作用的机制与上调P16表达及下调PCNA和MMP9表达有关。

MMP9、TIMP1及VEGF在子宫内膜异位症患者在位内膜的表达

研究基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase 9,MMP9)及其抑制剂 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP1)和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在子宫内膜异位症 (endometriosis,EM)患者的在位内膜中的表达。采用免疫组化SP法分别检测 4 5例EM(研究组 )在位内膜及 32例子宫肌瘤 (对照组 )的在位内膜中MMP9、TIMP1及VEGF的表达。MMP9、TIMP1、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组和对照组的表达分别为 0 336 ,0 2 76 ;0 2 5 3,0 2 6 7和 1 2 93,1 0 34;0 372 ,0 2 88。其中MMP9、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组中的表达显著高于对照组内膜 (P <0 0 1)。EM患者的在位内膜中MMP9、VEGF高表达可能是EM发生发展的重要原因。诊刮筛选出高MMP9、VEGF表达的在位内膜可望成为预测和诊断EM的方法之一。

通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠miRNA664及MMP9调控机制的研究

目的探讨通督调神针灸预处理对脑缺血再灌注大鼠神经行为功能和脑水含量的影响及mi RNA664、MMP9表达的调控作用机制。方法将130只Wistar大鼠随机分为A组(电针预处理组)30只、B组(艾灸预处理组)30只、C组(阿司匹林预处理组)30只、D组(模型组)30只和E组(空白对照组)10只。A组进行电针治疗;B组用清艾条悬灸;C组用阿司匹林10 mg/kg灌胃。治疗7 d后各组进行脑缺血再灌注模型制作,于再灌注后24 h,观察大鼠神经行为功能和脑水含量以及皮质区相关mi RNA、MMP9的表达。结果 A组、B组、C组和D组神经行为学评分与E组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组、B组神经行为学评分与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组神经行为学评分与B组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。A组、B组、C组和D组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与E组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。A组、B组和C组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与D组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。A组和B组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与C组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。A组脑水含量、mi RNA664相对表达量及MMP9相对表达量与B组比较,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论通督调神针灸预处理可有效降低脑缺血再灌注大鼠的神经行为学评分和脑水含量,并通过调控mi RNA664的表达降低MMP9相对表达量。通督调神针灸预处理脑保护机制之一可能通过调控mi RNA664的表达降低MMP9相对表达量,诱导脑缺血耐受,减轻脑水肿。

盐酸小檗碱通过P13K/AKT信号通路抑制MMP2和MMP9的表达影响膀胱癌T24细胞侵袭性

目的:探讨盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride)对膀胱癌T24细胞侵袭能力的影响及机制.方法:采用利用CCK8法检测膀胱癌T24细胞的生存率;transwell侵袭试验检测盐酸小檗碱对T24细胞侵袭能力的影响;Western-blotting分析盐酸小檗碱对P13K/AKT通路相关因子(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT),细胞基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)蛋白表达的改变.结果:CCK8显示盐酸小檗碱对T24细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性(P<0.05);与对照组比较,经盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞侵袭能力明显降低.P13K抑制剂LY294002可通过抑制P13K/AKT通路活化,抑制MMP2和MMP9的表达,相对应的盐酸小檗碱处理后膀胱癌T24细胞p-PI3K、pAKT、MMP2、MMP9蛋白表达下降(P<0.05).结论:盐酸小檗碱可有效抑制膀胱癌T24细胞侵袭能力,其机制可能是通过调控P13K/AKT通路抑制MMP2和MMP9的表达.

VEGF-C MMP9及TIMP-1在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF-C)、基质金属蛋白酶MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈癌组织中的表达,及与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接染色法(SP法),检测62例宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期患者癌组织中VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1的表达,并进行统计学分析。结果:VEGF-C、MMP9及其抑制物TIMP-1在宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱ期均为高表达。VEGF-C在宫颈癌Ⅰ、Ⅱ期和有淋巴转移者的表达率分别为73.8%、85%、100%。MMP9为66.7%、75%、93.3%。TIMP-1为64.3%、60%、66.7%,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在浸润间质≥1/2的表达高于<1/2(P<0.05)者;其表达与浸润深度及淋巴结转移相关。结论:VEGF-C与宫颈癌的侵袭和转移密切相关;MMP9及其抑制物TIMP-1与肿瘤的浸润及侵袭转移有关,VEGF-C、MMP9及TIMP-1在宫颈癌转移中发挥了重要作用。

二氧化碳气腹对人卵巢癌细胞株SKOV_3VEG F和MMP9表达的影响

目的探讨腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹对恶性卵巢肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法体外培养人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3细胞株,以CO2处理2 h,应用细胞爬片免疫组织化学法和半定量RT-PCR方法检测不同时相中血管内皮生长因子VEGF和MMP9表达水平。结果CO2处理后12 h SKOV3细胞VEGF和MMP9蛋白和mRNA表达显著增加,VEGF在CO2处理后24 h表达达到高峰,MMP9在48 h达到高峰。结论CO2可以增强卵巢癌细胞SKOV3的侵袭能力。

E-Cad、MMP9血清中的表达与胃癌痰湿证型关系的临床研究

目的立足于肿瘤转移的生物学特性与痰的病理特征相似基础上,探讨痰在肿瘤转移中发挥作用的可能物质基础。方法以酶联免疫吸附法检测胃癌痰湿证型患者30例治疗前后与非痰湿证型患者32例以及健康对照组10例血清中上皮钙黏附分子(E-Cad)、基质金属蛋白酶(MMP9)的表达;痰湿证组服用消痰散结方1个月,非痰湿证组不治疗。观察治疗前后血清中E-Cad、MMP9的表达变化,并与非痰湿组血清中E-Cad、MMP9的表达进行比较对照。结果两种黏附分子表达在痰湿证型与非痰湿证型中的表达均较健康组升高(P<0.05),痰湿组较非痰湿组升高(P<0.05);治疗组治疗后E-Cad的表达明显降低(P<0.05),MMP9的表达有降低趋势,但差异不显著。结论痰在肿瘤转移中发挥作用的途径可能是通过影响黏附分子的表达,两者存在相关性。

益气养阴活血方对肺纤维化大鼠TGF-β1、Smad3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的观察益气养阴活血方对肺纤维化大鼠的影响,探讨其改善肺纤维化的作用机制。方法采用博来霉素气管滴注制备肺纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、醋酸泼尼松组和益气养阴活血方高、中、低剂量组(中药高、中、低剂量组),每组8只,另取8只正常大鼠作为空白组,给药组予相应药物灌胃28 d,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃。末次给药后,行肺功能检测,HE和Masson染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织纤连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)表达,RT-PCR检测肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA表达,Western blot检测肺组织TGF-β1、Smad3、p-Smad3、MMP9和TIMP1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠吸气时间和呼气时间显著缩短,每分钟通气量和呼吸频率显著增加(P<0.01),肺组织结构损伤明显,肺泡塌陷、萎缩、间隔变宽,有大量胶原纤维沉积,肺组织FN和LN表达显著升高(P<0.01),TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p-Smad3、MMP9蛋白表达显著升高,TIMP1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,中药高剂量组大鼠吸气时间和呼气时间显著延长,每分钟通气量和呼吸频率显著减少(P<0.01),肺泡形态较完整、间隔变窄,炎性细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少,肺组织FN和LN表达显著降低(P<0.05,P<0.01),TGF-β1、Smad3、MMP9 mRNA和TGF-β1、p-Smad3、MMP9蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),TIMP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论益气养阴活血方可能通过调控TGF-β1、Smad3、p-Smad3表达,调节MMP-9/TIMP-1平衡,降解细胞外基质,延缓肺纤维化发展。

芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1 TMP1 MMP2及MMP9的影响

目的:探讨芍药苷对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠血清TGFβ1、TMP1、MMP2及MMP9的影响。方法:清洁级Sprague-Dawley大鼠60只,随机分成6组,A组(正常对照组)、B组(模型组)、C1组(芍药苷小剂量组)、C2组(芍药苷中剂量组)、C3组(芍药苷大剂量组)、D组(水飞蓟素对照组)。除正常对照组外,均经皮下注射400mL/L四氯化碳8周,后各治疗组给予不同剂量芍药苷干预8周,阳性对照组给予水飞蓟素干预8周,ELISA法检测大鼠血清TGFβ1、MMP2、MMP9及TMP1。结果:TGFβ1:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;TMP1:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;MMP2:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;MMP9:与B组比较,A组P<0.01,C1组、C2组、C3组、D组P<0.05;结论:芍药苷能够通过降低大鼠血清TGFβ1、TMP1、提高大鼠血清MMP2、MMP9而发挥抗肝纤维化作用,并且量效关系明显。

轴抑制因子通过β-catenin调控MMP7、MMP9影响淋巴瘤细胞的侵和袭转移

目的探讨轴抑制因子(AXIN)通过β-catenin调控MMP7、MMP9对淋巴瘤细胞侵袭迁移能力的影响。方法用RT-PCR和Western blot法观察多株淋巴瘤细胞株里AXIN、β-catenin、MMP7、MMP9的表达情况;选取AXIN相对低表达的淋巴瘤细胞分组瞬时转染p CMV5-HA-Axin和pc DNA5-His-β-catenin质粒,采用RT-PCR和Western blot法观察其细胞中β-catenin、MMP7、MMP9 m RNA及蛋白表达变化;构建稳定高表达AXIN的淋巴瘤细胞后,分组瞬时转染AXIN-sh RNA和β-catenin-sh RNA后观察β-catenin、MMP7、MMP9 m RNA及蛋白变化;采用Transwell侵袭实验观察空白处理对照组、稳定高表达AXIN组、干扰AXIN的稳定高表达AXIN组细胞侵袭和迁移能力变化。结果多株淋巴瘤细胞株中AXIN与β-catenin、MMP7、MMP9表达呈负相关;选用AXIN相对低表达的人恶性B淋巴瘤细胞株Raji,过表达AXIN后发现AXIN升高后,β-catenin、MMP7、MMP9的蛋白表达降低,MMP7、MMP9、β-catenin m RNA未变化;当过表达β-catenin后发现MMP7、MMP9 m RNA和蛋白表达升高;另外,稳定高表达AXIN的细胞中干扰AXIN,β-catenin、MMP7、MMP9蛋白表达升高,MMP7、MMP9、β-catenin m RNA未变化;稳定高表达AXIN的细胞中干扰β-catenin,MMP7、MMP9表达降低;证实AXIN通过β-catenin调控MMP7、MMP9影响淋巴瘤细胞的侵袭和迁移。结论在淋巴瘤细胞中升高AXIN可引起β-catenin表达下降,进而MMP7、MMP9表达下降,抑制淋巴瘤细胞的侵袭和迁移。

NIBP在结肠癌细胞中通过调控NF-κB信号通路促进MMP2、MMP9表达

目的:观察慢病毒介导的NIBP(NIK and IKKβbinding protein)基因转染结肠癌细胞株HT29后,细胞迁移能力以及细胞内p65、MMP2、MMP9 m RNA和蛋白表达的变化。方法:分为未经转染的HT29细胞(HT29组)、转染空载的HT29细胞(HT29-NC组)和转染NIBP的HT29细胞(HT29-NIBP稳转组)。采用Transwell试验检测细胞迁移能力;Q-PCR法检测NIBP、p65、MMP2、MMP9的m RNA表达;Western Blot法检测NIBP、p65、磷酸化p65(p-p65)的蛋白表达;ELISA法检测MMP2、MMP9的分泌。结果:高表达NIBP能增强结肠癌细胞株HT29的迁移能力,并主要通过增加p-p65从而促进MMP2、MMP9 m RNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:NIBP可能通过激活NF-κB信号通路促进结肠癌细胞分泌MMP-2、MMP-9,从而促进结肠癌细胞的侵袭转移。