Mov10稳定表达肝癌细胞株的建立及其生物学研究

目的构建稳定表达Mov10蛋白的HepG2细胞株,探讨Mov10在肝癌细胞增殖和侵袭等生物学行为中的作用。方法将含Mov10基因的真核表达载体pCMV-Mov10-GFP质粒,采用脂质体介导法转染至人肝癌细胞系HepG2,经过G418抗性筛选阳性克隆。采用qPCR、Western blot技术检测Mov10的表达,免疫荧光技术观察稳定株Mov10的细胞分布。通过MTS、平板克隆形成试验、体外侵袭能力检测观察稳定细胞株的增殖情况、克隆形成能力和侵袭能力。结果成功构建了表达Mov10蛋白的稳定细胞株HepG2-Mov10。内源性及外源性Mov10蛋白主要分布于细胞质。稳定细胞株HepG2-Mov10较对照组细胞增殖速度快(P<0.05),体外侵袭能力强(P<0.05)。稳定细胞株HepG2-Mov10、HepG2-GFP和细胞株HepG2的克隆形成能力分别为(56.7±17.3)%、(38.3±12.1)%、(31.3±8.1)%,HepG2-Mov10细胞与后两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定表达Mov10的细胞株HepG2-Mov10,发现Mov10能促进肝癌细胞增殖并提高克隆形成能力和侵袭能力。

Mov10蛋白生物学功能研究进展

Mov10蛋白属于RNA解旋酶超家族-1,是RNA-诱导沉默复合体的组成成分之一。Mov10蛋白在介导miRNA/siRNA基因沉默中有积极的作用,其确切机制尚不清楚。研究证实,Mov10蛋白具有广泛和有效的抗逆转录病毒活性,能在多阶段抑制HIV-1复制,包括病毒产生、Gag蛋白水解程序、逆转录过程;同时也可降低其他逆转录病毒如猿类免疫缺陷病毒、鼠白血病病毒和马传染性贫血病毒的感染性。新近研究发现Mov10在肿瘤中表达升高,推测其与hTERT和端粒相关,参与肿瘤的形成和肿瘤细胞的分化。

猪MOV10基因克隆表达及其对PRRSV增殖的影响

为了研究猪MOV10基因功能及其在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染过程中的作用,试验成功克隆出猪MOV10基因并进行序列比对,在细胞水平上过表达猪MOV10基因并检测其在细胞中的表达和定位,通过双荧光报告系统检测试剂盒和实时荧光定量PCR检测猪MOV10基因诱导Ⅰ型干扰素的表达,以及Western-blot和空斑试验检测MOV10基因对PRRSV增殖的影响。结果表明:猪MOV10基因氨基酸序列与人MOV10基因的同源性为92.1%,猪MOV10基因能在细胞中表达,且为胞浆定位蛋白;PK-15细胞过表达猪MOV10基因可诱导IFN-β的表达,Marc-145细胞过表达猪MOV10基因可显著抑制PRRSV的增殖。说明猪的免疫系统与人的相似度较高,有可能成为研究人类免疫更好的动物模型,MOV10基因可抑制PRRSV的增殖,也为PRRSV防治药物的开发提供了新药物靶标。

宿主因子Mov10蛋白的研究进展

Mov10蛋白是RNA解旋酶超家族-1成员，也是RNA诱导沉默复合体（RISC）的组份。近来研究证实，Mov10蛋白在RNA干扰路径中有积极的作用并且能在多阶段抑制HIV．1复制，包括病毒产生、Gag蛋白水解程序、逆转录过程。Mov10蛋白也可降低其它逆转录病毒如猿类免疫缺陷病毒、鼠白血病病毒和马传染性贫血病毒的感染性。因此，Mov10蛋白具有广泛和有效的抗逆转录病毒活性。

宿主限制性因子MOV10对HBV复制的影响

目的研究宿主限制性因子莫罗尼白血病病毒10蛋白(Moloney leukemia virus 10,MOV10)对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的调控作用。方法首先在肝癌细胞Huh7中转染HBV复制质粒,探讨HBV复制和MOV10表达的相关性;接着在Huh7中通过siRNA干扰或过表达MOV10,提取病毒核心颗粒的DNA,通过荧光定量PCR分析病毒复制水平的变化;进一步构建MOV10保守结构域Ⅱ的酶活突变体(D645A、E646Q和G648A),检测突变后对MOV10抗病毒作用的影响;在人肾上皮细胞293细胞中共转染HBV复制质粒和MOV10表达质粒,通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)研究MOV10与HBVRNA的结合。结果肝癌细胞Huh7转染HBV复制质粒后,MOV10蛋白水平增高;肝癌细胞Huh7中干扰内源性MOV10后,HBV复制水平升高1.5倍,而Huh7细胞中过表达MOV10,显著抑制了HBV的复制;MOV10结构域Ⅱ突变体同样显著抑制HBV的复制;MOV10可以与HBV3.5kbRNA结合。结论在肝癌细胞中,宿主限制性因子MOV10的表达与HBV复制相关,其抑制HBV复制的作用不依赖于其解旋酶活性,可能与HBV3.5kbRNA结合有关。

RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及细胞中的表达及意义

目的探讨RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中的表达变化。方法应用real-time PCR和Western blot检测MOV10的表达变化。结果 RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织中,在Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中高表达。结论 RNA结合蛋白MOV10可能参与调控阿尔茨海默病的病理过程。

Ce对10Cr5MoV钢α-Fe晶粒尺寸及奥氏体长大行为的影响

采用背散射电子衍射技术对不含稀土和含稀土Ce的两种试验钢的α-Fe晶粒尺寸进行测量分析。结果表明,稀土Ce的加入使得α-Fe晶粒细化,形成的弥散细小的稀土夹杂成为异质形核核心,提高了回火过程再结晶形核率;固溶稀土的拖曳与钉扎作用延迟了再结晶的开始和结束时间,增加了再结晶转变的驱动力,降低了再结晶发生温度。采用不同的奥氏体化工艺对两种试验钢进行奥氏体化处理,研究Ce对奥氏体长大行为的影响。发现在880~1180℃加热、保温30~90 min奥氏体化条件下,试验钢的奥氏体长大指数n及晶粒长大速率常数K减小,奥氏体长大激活能Q与晶粒长大扩散频率因子M0增大,Ce的加入对奥氏体长大行为有抑制作用。

10CrNi3MoV钢典型甲板分段焊接变形预测研究

预测10CrNi3MoV钢船体结构的焊接变形,对于船体结构工艺设计和精准制造具有重要的意义。采用固有应变法,并利用有限元软件分析,对10CrNi3MoV钢典型甲板结构的焊接变形进行了预测,开展不同焊接方案下焊接变形量的仿真,分析了典型甲板分段焊接结构变形趋势,为实现船体工艺技术的上升或突破积累了技术经验。

模拟海洋环境中两种结构钢焊接接头腐蚀特性

采用周浸实验模拟海水周期浸润环境,中性盐雾实验模拟海洋大气环境,加以恒载荷拉伸应力条件研究了10CrNi3MoV和12MnSiNiCrMo两种结构钢焊接接头的腐蚀特性,并测试分析了其焊接接头各处的动电位极化曲线.通过金相分析研究了两种钢焊缝区、热影响区与母材的显微组织差别.结果表明:两种钢的焊缝区较母材更易发生腐蚀,应力腐蚀断裂位置均位于焊缝区,且焊缝区腐蚀电流密度最大,母材最小;10CrNi3MoV钢焊接接头的耐蚀性能要好于12MnSiNiCrMo钢,在较低和较高应力水平下10CrNi3MoV钢焊接接头的耐应力腐蚀性能也优于12MnSiNiCrMo钢,同时12MnSiNiCrMo钢各区腐蚀电流密度都远大于10CrNi3MoV钢.焊接后不同区域金相组织的差别是造成上述现象的原因,母材区适量的针状铁素体能够保持其强韧性和耐蚀性,焊缝区过量的铁素体则导致其耐蚀性和耐应力腐蚀性能降低.

10CrNi3MoV钢焊接热影响区组织和晶粒度研究

采用焊接热模拟技术研究了590MPa级船用高强度结构钢焊接热影响区组织和晶粒度的变化规律.研究结果表明:10CrNi3MoV钢热影响区粗晶区(CGHAZ)经峰值温度在临界相变点Ac1'和Ac3'温度范围二次热循环后,具有粗大组织或粗大晶粒遗传现象.焊接线能量(t8/5时间)对粗大晶粒遗传没有影响,但对粗大组织遗传具有显著影响.当t8/5较小时,能够产生粗大组织遗传.当t8/5较大时,仅仅产生粗大晶粒遗传.并且,随着t8/5值增加,产生粗大组织遗传的温度区间减小.

环境条件对10CrNi3MoV钢抗裂性的影响

通过对 5 90MPa级船用高强度结构钢 (10CrNi3MoV钢 )和配套焊条的抗裂性试验以及焊条熔敷金属扩散氢逸出特性测定 ,研究了环境条件 (温度和湿度 )对焊条熔敷金属扩散氢含量、扩散氢逸出特性以及抗裂性的影响。研究结果表明 ,在不同环境条件下 ,焊条熔敷金属扩散氢含量和扩散氢逸出特性的不同是造成抗裂性具有不同表现的主要原因。后期阶段慢速逸出扩散氢量HDs是影响多道焊抗裂性的关键因素 ,并对其产生的原因进行了分析。

10CrNi3MoV钢焊接接头弯曲试验弯心直径的探讨

采用不同弯心直径,测定了屈服强度为590 MPa级10CrNi3MoV钢焊接接头弯曲试验后不同部位的伸长率,并结合该级别钢弯曲试验的其它相关规定,说明了现行的10CrNi3MoV钢焊接接头弯曲试验中弯心直径的规定比较苛刻,亟待修订。

10CrNi3MoV钢的机器人MAG焊焊接接头微观组织与疲劳性能

对20mm厚10CrNi3MoV钢用机器人进行多层单道熔化极活性气体(Metal Active Gas,MAG)保护焊焊接,采用光学显微镜(Optical Microsope,OM)观察焊接接头组织分布,采用硬度计和疲劳试验机分析焊接接头的硬度和疲劳性能.结果表明:焊接接头热影响区(Heat Affected Zone,HAZ)宽度小,其硬度比母材硬度高,HAZ没有造成焊接接头强度软化.二次热循环作用使得焊缝粗晶区晶粒显著细化,焊缝区维氏硬度(HV)谷值约为170,母材硬度约为250.焊接接头应力在屈服点80%时低周疲劳试验循环10 000次没有断裂,而在屈服点90%时循环3 254次后断裂,并且断裂发生在焊趾处.

800MPa级低合金高强度钢的循环软硬化特性

在不同应变级别控制下，研究了800MPa级低合金高强度钢10CrNiSMoV轴向加载低周循环软硬化特性，研究结果表明：应变加载级别不同，材料表现出不同的循环软硬化特性，当应变幅在0．4％～1．0％范围变化时，材料表现出循环软化的特性，且应变幅越大，循环软化速率越高；当应变幅在0．30％-0．40％范围变化时，材料表现出先硬化，再趋于循环饱和，再轻微循环软化直至断裂的特性。采用透射电镜观察了不同应变级别下试样断口的位错形态，用位错理论解释了产生上述现象的原因。

船用冷凝器B30/10CrNi3 Mo V封头的热成形工艺研究

研究了B3 0 /1 0CrNi3MoV复合钢板制造船用冷凝器封头的热冲压成型工艺 ,提出了切实可行的工艺措施 ,完成了B3 0 /1 0CrNi3MoV复合钢板标准椭圆封头的加工制造 ,测试了封头的各项性能 ,结果表明 ,获得的各项性能符合设计要求。

10CrNi5MoV钢厚板窄间隙熔化极气保焊研究

以10CrNi5MoV钢为研究对象,进行了窄间隙熔化极气保焊对接试验,并对焊接接头的力学性能、金相组织和显微硬度进行了分析。结果表明,焊接接头具有良好的综合力学性能,焊缝组织以贝氏体为主,并有少量的针状铁素体和粒状贝氏体,过热区组织主要是贝氏体,最高硬度出现在焊接热影响区。

10CrNi3MoV 30C对称双球扁钢淬透性试验研究

通过球扁钢淬透性的测定以及对中频淬火态横截面硬度分布、金相组织与晶粒度的观察评定 ,研究了 10CrNi3MoV 30C双球扁钢的淬透性。结果表明 ,10CrNi3MoV 30C球扁钢的淬透性良好 ,用端淬试验来研究 10CrNi3MoV 30C球扁钢的中频淬火是可行的。

10CrNi3MoV(L)低合金高强钢自动埋弧焊焊接性能研究

采用等强匹配的 1 0MnNi2MoTi合金焊丝和 70 5 ch熔炼焊剂 ,通过改变焊接线能量及道间温度对不同碳含量连铸 1 0CrNi3MoV低合金高强钢板焊接性进行了研究。结果表明 ,连铸 1 0CrNi3MoV钢板具有较好的接头力学性能和焊接工艺适应性 ,但在较大线能量条件下 (～ 4 0kJ cm) ,接头韧性降低。为保证连铸1 0CrNi3MoV钢接头韧性水平 ,在限制自动埋弧焊线能量的同时 ,还应提高钢板韧性 。

高强度10CrNi5MoV钢热处理开裂分析

10CrNi5MoV钢板试样在调质处理过程中产生裂纹。通过组织观察和能谱分析确定了产生裂纹的主要原因,给出了改进措施,为生产提供了必要的技术支持和理论指导。

合金结构钢10CrNi3MoV探伤不合原因分析

对14 mm和28 mm 10CrNi3MoV钢板非夹杂元素超标导致的探伤不合格的原因进行了分析,通过采用扫描电镜和光学显微镜对探伤不合处的显微组织和微区成分进行分析。结果表明,试验钢10CrNi3MoV探伤不合的原因是内部存在裂纹。裂纹产生的原因是钢板存在较大的偏析和组织应力,裂纹发生在贝氏体或贝氏体与珠光体交界区域。裂纹发生处溶质原子Ni、Cr、Mn发生明显聚集。Ni、Mn元素的偏析,导致形成贝氏体、珠光体和铁素体偏析条带,造成组织内应力。溶质原子在距钢板表面约1/4处聚集由电磁搅拌和动态轻压下引起,为了消除此类现象,应降低电磁搅拌的功率,选择适当的过热度。