白念珠菌mp65基因真核质粒的构建及免疫原性研究

目的构建以白念珠菌甘露糖蛋白65(MP65)编码基因mp65为目的基因真核重组表达质粒,并对其免疫原性进行分析。方法PCR法自白念珠菌标准菌株ATCC64550中获取mp65基因,分别插入真核表达载体pcDNA3.1中,将真核表达经质粒大抽提并定量后免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测抗体产生水平,流式检测细胞免疫。结果PCR法克隆出全长为1140bp的mp65基因,构建出pcDNA3.1-mp65真核表达质粒,pcDNA3.1-mp65免疫小鼠能诱导产生效价为1∶800的IgG抗体,同时诱导CD4+T和CD8+T细胞百分含量增高。结论白念珠菌真核表达质粒pcDNA3.1-mp65成功构建并能诱导小鼠的体液免疫和细胞免疫。

白念珠菌MP65和SAP2蛋白原核表达质粒的构建与表达

目的构建以白念珠菌基因MP65和SAP2为目的基因的原核表达质粒,IPTG诱导其表达融合蛋白,并对其免疫原性进行分析。方法PCR法自白念珠菌标准菌株获取MP65和SAP2基因,分别插入至原核表达载体pGEX-4T-2和pET32a中;将重组表达质粒转染感受态E.coliBL-21,经IPTG诱导表达、纯化后,SDS-PAGE和Western blot分析。结果PCR法克隆出全长为1 140 bp的MP65和1 197 bp的SAP2基因,构建的原核表达质粒pGEX-4T-2-MP65及pET32a-SAP2,可分别表达出66 KD左右的GST融合蛋白和His融合蛋白。结论成功获取了白念珠菌基因MP65和SAP2,所构建的原核表达质粒在BL-21中成功表达;两种蛋白均有免疫原性。

mp65和sap2真核表达质粒对小鼠系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用

目的研究白色念珠菌mp65和sap2基因真核表达质粒对小鼠系统性白色念珠菌感染的免疫保护作用。方法将pcDNA3.1-mp65和pcDNA3.1-sap2质粒分别或联合免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠外周血中抗MP65和抗Sap2蛋白特异性IgG抗体,流式细胞仪检测免疫小鼠脾脏中CD4+、CD8+T淋巴细胞百分含量的变化,并观察白色念珠菌攻击后免疫小鼠的存活率。结果免疫后小鼠血清中可检测出抗两种蛋白的特异性IgG抗体,两种质粒均能诱导脾脏中CD4+T淋巴细胞百分含量增高,并可提高白色念珠菌系统性感染小鼠的存活率。结论pcDNA3.1-mp65和pcDNA3.1-sap2质粒均能诱导小鼠的体液免疫和以CD4+T淋巴细胞为主的细胞免疫,且对白色念珠菌的系统性感染有一定的保护作用。

环肥燕瘦，清华同方四大美机

清华同方T＆F－A65MP3；清华同方PMC-V618MP4;清华同方PMC-V616MP4;清华同方PMC-V800MP4.

云南重楼正丁醇提取物对白念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的观察云南重楼正丁醇提取物（BEPP）对体外白念珠菌生物膜形成的影响。方法微量稀释法测定BEPP最低抑菌浓度（MIC）,XTT法测定生物膜抑制80%浓度（SMIC80）,平板法绘制时间-杀菌曲线,扫描电镜（SEM）观察生物膜形态结构,激光共聚焦显微镜（CLSM）观测生物膜厚度,实时荧光定量PCR（q RT-PCR）法检测生物膜形成相关基因HWP1、MP65、SUN41表达量的变化。结果 BEPP对白念珠菌的MIC为32～128μg/m L,对白念珠菌生物膜的SMIC80为128～512μg/m L,时间-杀菌曲线显示BEPP具有良好的杀菌作用,SEM观察到BEPP有效抑制白念珠菌生物膜形成,CLSM显示BEPP可以降低生物膜厚度,q RT-PCR检测显示在BEPP作用下,HWP1、MP65、SUN41基因表达量均显著下调。结论 BEPP可以有效抑制体外白念珠菌生物膜的形成。