趋化因子新变异体MPIF-1β重组蛋白的纯化和活性分析

目的 为深入研究趋化因子新变异体MPIF 1β的结构与功能 ,利用pKPL3a MPIF 1β表达质粒进行原核表达、纯化工艺研究及活性检测。方法 MPIF 1β重组蛋白以包涵体形式存在 ,占总菌体蛋白的 15 % ,工程菌经超声破碎 ,包涵体洗涤 ,变性、复性、肝素SepharoseCL 6B亲和层析 ,CMSepharoseFastFlow和SephacrylS 2 0 0层析分离获得目的蛋白。结果 还原SDS PAGE分析相对分子质量 15 0 0 0u ,纯度 99.0 % ,纯化倍数 6 .6倍 ,总回收率 9.0 7%。体外生物学活性检测证明MPIF 1β重组蛋白对小鼠骨髓集落形成具有抑制作用 ,对U937细胞具有趋化活性 ,且呈一定的剂量依赖关系。结论 建立了简便可行的MPIF 1β重组蛋白纯化路线 ,初步证明了MPIF

CCL23/骨髓抑制因子1(MPIF-1)对于U937细胞的增殖、凋亡和分化的影响

CCL23/MPIF-1是人类趋化因子CC家族的一员,在血细胞中仅在单核细胞源的树突状细胞中持续表达,在体内和体外实验中对人、鼠的髓系祖细胞的增殖和分化均有明显的抑制作用。最近的研究发现,CCL23在儿童急性髓系白血病骨髓和外周血样本均有高表达。为了了解CCL23的高表达在白血病进展、治疗和预后中的意义,选用白血病细胞系U937细胞作为研究对象,加入人类重组CCL23培养72小时,用CCK-8试剂盒测细胞增殖,FITC-AnnexinV/PI法检测细胞凋亡率,并观察不同处理条件下细胞分化情况及CCL23受体CCR1的表达水平。结果发现:单独的CCL23对于U937细胞的增殖、凋亡和分化无明显作用(P>0.05);但在U937受PMA诱导分化的过程中,CCL23有明显的促分化作用,同时发现此过程中CCR1表达显著升高(P<0.05)。结论:CCL23对U937细胞无明显抑制作用,但可能与PMA产生协同诱导分化作用,而且该作用的出现可能与CCL23受体CCR1表达升高有关。

人重组MPIF-1(25-99)蛋白的纯化

目的 :探索截短型髓样造血细胞抑制因子 1 (MPIF 1 )蛋白纯化的技术路线。方法 :构建MPIF 1(2 5 99) pMTY4原核表达载体 ,转化大肠杆菌后 ,用摇瓶培养 ,收获诱导菌 ,经破碎菌体—洗涤包涵体—溶解包涵体—复性初步纯化后 ,再经二步柱层析纯化。结果 :获得了MPIF 1 (2 5 99)的高效表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 30 %。经纯化后 ,MPIF 1 (2 5 99)蛋白的纯度达 80 %以上。结论 :获得纯化的MPIF— 1(2 5— 99)

CCL23在成人急性髓系白血病中的表达研究

目的探讨成人急性髓系白血病(AML)患者中CCL23表达与疾病的关系。方法收集67例成人骨髓标本(AML患者62例,正常人5例)和40例外周血血清标本(AML患者22例,正常人18例),分别采用实时定量PCR方法和ELISA法分析骨髓细胞中CCL23mRNA和外周血血清中CCL23蛋白的表达。结果成人AML患者骨髓CCL23mRNA和血清CCL23蛋白表达水平均显著高于正常人(均P<0.05),且CCL23mRNA表达与疾病进程变化有显著关联。结论成人AML中CCL23呈显著高表达,可作为AML患者临床特征性的观察指标之一。

截短型髓性造血细胞抑制因子在大肠杆菌中的高效表达

目的 :构建截短型的髓性造血细胞抑制因子 (myeloid progenitor inhibitory factor 1 ,MPIF-1 )表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效表达。方法 :利用 PCR方法从 p Kp L3 a-MPIF-1的表达载体上扩增 MPIF-1(2 5 -99)基因片段 ,重组到 p MTY4载体 ,并在大肠杆菌 pop2 1 3 6中高效表达。所得包涵体经过变性、透析复性后 ,用阴离子交换层析柱纯化。结果 :获得了 MPIF-1 (2 5 -99)的高效表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 0 %。结论 :在大肠杆菌高效表达 MPIF-1 (2 5 -99)融合蛋白。