结核分枝杆菌分泌蛋白MPT53基因的克隆、表达和纯化

目的构建结核杆菌分泌蛋白MPT53原核表达载体并进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌标准株H37Rv基因组DNA为模板扩增MPT53基因,产物经纯化回收后与载体pMD-T连接转化,酶切鉴定,克隆到pET32a原核表达载体,测序鉴定插入序列完全正确者转化大肠埃希菌BL21,诱导表达MPT53融合蛋白,亲和层析纯化后,进行SDS-PAGE电泳鉴定。结果成功构建PET32a-MPT53重组质粒,转化BL21后经IPGT诱导成功表达分子质量单位为36ku的MPT53蛋白,与理论值相符。结论成功表达结核分枝杆菌MPT53蛋白,为其应用打下了基础。

结核分枝杆菌mpt53蛋白的生物信息学分析

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌Rv2878c基因编码蛋白mpt53的结构和功能。方法从NCBI中获得Rv2878c基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析mpt53蛋白的相关生物学信息。结果Rv2878c基因全长为922 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白mpt53由172个氨基酸组成,等电点5.19,为含有信号肽的非跨膜蛋白;该蛋白含有21个磷酸化位点,1个保守域,18个(得分≥0.80)B细胞抗原表位和8个(得分≥15)T细胞抗原表位;二级结构预测mpt53中α-螺旋占32.56%,β-折叠占23.84%,β-转角占7.56%,无规则卷曲占36.05%。富集分析显示该蛋白与氧化还原反应有关。讨论生物学信息分析mpt53蛋白为分泌蛋白,可用于研发结核病血清学诊断试剂。蛋白的二级结构助于氧化折叠,是抗结核药物的潜在靶点;该蛋白含有有大量潜在的T、B细胞抗原表位,是结核病疫苗的候选蛋白。