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题名牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化
被引量:6
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作者
鲁俊鹏
罗满林
宋延华
邹潍力
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机构
华南农业大学 兽医学院
广东温氏食品集团有限公司
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出处
《中国兽医科学》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第5期366-370,共5页
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基金
广东省"十五"重大科技攻关计划项目(2003A20403)
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文摘
从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA,扩增了MPT83基因,并克隆入pMD 18-T Simple Vector,将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)宿主菌,IPTG诱导表达,用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序,构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen- Bank中的序列一致;构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切鉴定构建正确;经SDS-PAGE分析,在约42 ku处出现新的蛋白条带,4 h后表达量即达到高峰;Western- blotting分析表明,融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。
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关键词
牛分支杆菌
mpt83基因
克隆
原核表达
蛋白纯化
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Keywords
Mycobacterium bovis
mpt83 gene
cloning
prokaryotic expression
protein purification
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分类号
S852.618
[农业科学—基础兽医学]
Q786
[生物学—分子生物学]
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