抑制ABCC1/MRP1转运体下调IL-1β分泌的实验研究

目的:用体外巨噬细胞实验和全基因敲除小鼠,筛选IL-1β分泌相关的胞膜转运体。方法:分化THP-1细胞株得到人源性巨噬细胞,从人外周血获取巨噬细胞。获取同性别、同年龄的FVB野生型小鼠作为MRP1全基因敲除小鼠的对照,培养小鼠腹腔和骨髓巨噬细胞。使用ABCC1/MRP1、ABCG2/BCRP、ABCB1/P-gp、OATP1B1和MATE转运体抑制剂处理细胞,再使用脂多糖和腺苷三磷酸刺激细胞,采用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光法检测IL-1β分泌水平。结果:人和小鼠巨噬细胞抑制剂实验表明,抑制ABCC1/MRP1转运体后,IL-1β分泌显著降低,而抑制其他4类转运体无效果。在动物实验中,MRP1全基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞分泌IL-1β的水平显著低于对照组。结论:ABCC1/MRP1转运体是一种新发现的IL-1β分泌途径,有望成为解决细胞因子释放综合征等临床问题的新靶标。

TCP1表达对HL60和HL60/A 细胞增殖及细胞内药物蓄积的调控作用及其机制

目的:研究TCP1表达对HL60及HL60/A细胞增殖及细胞内药物蓄积的影响及其机制。方法:利用慢病毒转染技术构建敲低、过表达TCP1的HL60/A细胞和HL60细胞及其对照组细胞,Western blot评估敲低、过表达效率。采用CCK-8法检测细胞增殖能力;激光共聚焦显微镜及流式细胞术检测细胞内的药物蓄积;流式细胞术及Western blot检测膜转运蛋白(MRP1、P-gP)及p-AKT的表达水平。结果:在HL60/A细胞中敲低TCP1的表达能够抑制细胞增殖,增加细胞内药物蓄积,降低转运蛋白MRP1及P-gP的表达,在HL60细胞中过表达TCP1能够促进细胞的增殖,减少细胞内药物蓄积,提高转运蛋白MRPI及P-gP的表达。同时利用PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号能够拮抗TCP1过表达所致的细胞增殖活性增强、细胞内药物蓄积减少及MRP1、P-gP表达的升高。结论:TCP1能够促进细胞增殖,并通过激活PI3K/AKT信号促进转运蛋白MRP1、P-gP的表达,降低细胞内的药物蓄积。

慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管上皮MRP1 mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用。方法:采用烟熏复合木瓜蛋白酶雾化吸入法制备COPD大鼠模型,将造模后的大鼠随机分为治疗组和模型组,另以正常大鼠作为对照组。治疗组予以化痰降气方(生药5.8g/kg)i.g.治疗给药,2次/d,连续15d后,分别采用RT-PCR、Western blot技术检测各组大鼠肺支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平的表达。结果:化痰降气方治疗能明显改善COPD模型大鼠的肺功能;COPD模型组MRP1mRNA及蛋白水平较正常对照组显著降低(P<0.01);与COPD模型组比较,化痰降气方治疗组MRP1mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:化痰降气方能逆转COPD状态下MRP1mRNA及蛋白水平表达的降低,这可能是其治疗COPD作用机制之一。

胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义

目的探讨胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义。方法收集223例胃癌组织标本,采用组织芯片和免疫组化技术检测MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及三者之间的相关性。结果胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63阳性表达率分别为58.3%、53.8%和64.1%;MRP1/CD9、KAI1/CD82表达与患者的性别、年龄、分期均无关,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关,KAI1/CD82表达还与浸润深度有关,而MRP1/CD9表达则与之无关,未发现ME491/CD63表达与胃癌临床病理特征的相关性。MRP1/CD9与KAI1/CD82、ME491/CD63的阳性表达率有显著相关性(r=0.147、0.164,P<0.05),KAI1/CD82与ME491/CD63的阳性表达无相关性。结论 MRP1/CD9、KAI1/CD82的表达可能是判断胃癌生物学行为的重要指标。

应用组织芯片技术检测肺癌组织中MRP-1/CD9的表达

目的 MRP 1/CD9是穿膜四超家族成员之一,具有抑制细胞移动的功能,本研究旨在探讨其在肺癌组织中的表达情况及与病理分级、临床分期、转移与预后的关系。方法 应用组织芯片技术,采用免疫组化S P方法检测54例肺癌组织和10例同期正常肺组织中MRP 1/CD9的表达。统计学方法采用χ2检验,检验水准为a=0.05。结果 MRP 1/CD9在肺癌组织中阳性率为42.60%,与正常肺组织相比表达下调,统计学上具有显著性差异(P<0.05);其蛋白表达情况与患者的年龄、性别、肿瘤肉眼类型无关,而与肿瘤的组织学类型、临床分期、分化程度、淋巴结转移有关。其中非小细胞肺癌(NSCLC)组表达显著高于小细胞肺癌(SCLC)组;高中分化组高于低未分化组;早期(Ⅰ+Ⅱ)组高于中晚期(Ⅲ+Ⅳ)组;无淋巴结转移组高于有淋巴结转移组,均具有显著性意义(P<0.05)。结论 肺癌的进展可能与MRP 1/CD9的表达下调密切相关,尤其小细胞肺癌MRP 1/CD9的表达缺失更具有重要意义;MRP 1/CD9的表达降低促进了肿瘤的淋巴结转移,此指标有望成为判断肿瘤预后的新标志。

MRP-1/CD9和HSP60在膀胱癌中的表达

目的:探讨MRP-1/CD9和HSP60的表达与膀胱癌发生发展的关系。方法:应用免疫组织化学技术(SP法)检测CD9和HSP60在75例膀胱移行细胞癌标本,15例正常膀胱组织中的表达。结果:CD9和HSP60在正常膀胱组织均高表达,41.2%和42.7%的膀胱癌对CD9和HSP60显示了表达减低。不同临床分期和病理分级的膀胱癌中CD9的表达有差异(P<0.05),根据预后表浅性膀胱癌的复发浸润组和非浸润组中CD9和HSP60表达有差异(P<0.05)。结论:CD9和HSP60可能与膀胱癌的发生发展有关,它们可能作为判断膀胱癌预后的新指标。

应用组织芯片技术检测KAI1、MRP-1、FAK蛋白在肺癌组织中的表达

背景与目的:肿瘤的发生发展、浸润转移与多基因改变密切相关。目前Kang-ai-1(KAI1)、移动相关蛋白(motility-relatedprotein-1,MRP-1)和局部粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)3种基因在肺癌中的共同作用研究较少。本研究旨在探讨这3种基因的蛋白产物在肺癌发生发展中的作用及其在肿瘤诊断和预后判断中的价值。方法:应用免疫组化SP方法检测包含240个点的肺癌组织芯片中KAI1、MRP-1和FAK蛋白的表达。结果:KAI1在肺癌原发灶中阳性率为25.9%,MRP-1为42.6%,与正常肺组织(100%)相比均显著下调;FAK蛋白在肺癌组织中阳性率为44.4%,与正常肺组织相比显著增高;KAI1、FAK两种蛋白在肺癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大体类型及组织类型无关,而与肿瘤的分化程度、临床分期及是否伴有淋巴结转移密切相关,两种蛋白的表达呈显著负相关。MRP-1蛋白在肺癌组织中的表达与组织类型有关,小细胞肺癌与非小细胞肺癌相比差异显著,MRP-1与KAI1呈显著正相关,与FAK呈显著负相关。结论:KAI1、MRP-1和FAK的异常表达与肺癌的浸润转移有关,联合检测这3项指标对肺癌的发生发展有重要的预测作用。

肿瘤转移抑制因子CD9/MRP-1基因在小鼠围着床期子宫内膜的动态表达

目的:探讨肿瘤转移抑制基因(CD9)/运动相关蛋白(MRP-1)mRNA和蛋白在胚胎着床过程中的作用。方法:应用RT-PCR和免疫组化技术观察CD9/MRP-1mRNA和蛋白在早孕和假孕小鼠子宫中的表达规律。结果:早孕d1-4小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,且d4表达最多;其蛋白主要表达在d1-4的子宫内膜上皮细胞,且早孕d2-4CD9/MRP-1在子宫基质细胞散在阳性表达。假孕d1-8小鼠子宫组织均有CD9/MRP-1mRNA表达,假孕d5表达开始增加,至d6达到峰值。而CD9/MRP-1蛋白在假孕d1-8子宫内膜腺上皮均有表达,而子宫内膜腔上皮均无表达。假孕d2-5,子宫基质细胞出现散在阳性表达。结论:①CD9/MRP-1在早孕小鼠子宫中呈动态表达,提示它在胚胎精确侵袭子宫内膜的调节中发挥作用。②CD9/MRP-1在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的。

KAI1/CD_(82)和MRP-1/CD_9在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因编码蛋白KAI1/CD82和能动性相关蛋白-1(MRP-1/CD9)在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法观察52例膀胱癌石蜡标本中和KAI1/CD82和MRP-1/CD9的表达情况,结合临床资料进行分析。结果膀胱癌组织中KAI1/CD82和MRP-1/CD9的阳性表达率分别为50%和61.5%。KAI1/CD82和MRP-1/CD9阳性表达率在复发肿瘤中均随病理分级升高而下降(P<0.05),但与临床分期无关(P>0.05)。KAI1/CD82和MRP-1/CD9和的阳性表达率有显著相关性(r=0.316,P<0.05)。结论KAI1/CD82和MRP-1/CD9的表达可能是判断膀胱癌生物学行为的重要指标。

亚砷酸联合电离辐射作用于肝癌细胞株HepG2后对多药耐药基因MRP1和凋亡相关基因caspase 3表达的影响

目的:探究亚砷酸联合电离辐射作用于肝癌细胞株HepG2后对多药耐药基因MRP1和凋亡相关基因caspase 3表达的影响。方法:采用Hoechest染色法检测亚砷酸处理、照射处理及联合处理对细胞凋亡的影响。采用qRT-PCR及Western-blot检测不同处理后HepG2细胞中MRP1和caspase 3的表达水平。结果:亚砷酸联合电离辐射可显著诱导细胞凋亡,显著增强caspase 3的表达,显著降低MRP1的表达。结论:亚砷酸联合电离辐射可通过增加caspase 3的表达诱导HepG2细胞凋亡,并有可能通过下调多药耐药基因MRP1的表达来降低肝癌细胞的耐药性。

组织芯片技术检测MRP1/CD9在胃癌中的表达

目的:探讨运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)在胃癌组织中的表达与胃癌生物学行为之间的相关性。方法:采用组织芯片技术及免疫组化方法对223例胃癌组织的MRP1/CD9蛋白表达进行研究。结果:在胃癌组织中MRP1/CD9表达的阳性率为58.3%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度、胃癌分期无关,而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关。其中高-中分化组表达高于低分化组,差异有显著性(P<0.05);无淋巴结转移组表达高于淋巴结转移组,亦具有显著性(P<0.01)。二元Logistic回归前进法显示:淋巴结转移最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著的因素,其次是分化。结论:胃癌组织中MRP1/CD9表达改变与肿瘤的分化、淋巴结转移密切相关。

靶向人多药耐药基因mrp1特异性小分子干扰RNA有效序列筛选

目的:筛选靶向人多药耐药相关蛋白基因(mrp1)特异性小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列。方法:设计并体外转录合成靶向mrp1的4条siRNA(mrp1-si251,mrp1-si480,mrp1-si795,mrp1-si1016和空白对照si-阴性),转染转基因单因素肝癌多药耐药细胞Hep G2/mrp1。用RT-PCR检测mrp1 mRNA表达,流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白表达、细胞内柔红霉素(DNR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素(ADM)的敏感性。结果:4条siRNA均能不同程度逆转Hep G2/mrp1细胞由mrp1介导的多药耐药。转染72h后,mrp1-si795组和mrp1-si1016组的mrp1 mRNA表达水平分别分别下调了(86.36±2.26)%和(85.54±1.04)%,较mrp1-si251组和mrp1-si480组明显下降(P<0.05);细胞内柔红霉素蓄积由多到少依次为mrp1-si795组最多,mrp1-si1016组次之,mrp1-si480组较少,mrp1-si251组最少(P<0.05);mrp1-si795组对ADR耐药的相对逆转率(86.36%)最高,mrp1-si1016组(85.54%)次之,较mrp1-si251组(60.93%)和mrp1-si480组(70.29%)有明显差异(P<0.05);mrp1-si1016组和mrp1-si795组多药耐药相关蛋白表达明显下调。结论:实验设计的靶向mrp1 mRNA的siRNA序列能够不同程度逆转多药耐药相关蛋白介导的人肝癌耐药细胞HepG 2/mrp1的多药耐药性,mrp1-si1016和mrp1-si795效果最好,mrp1-si480较差,mrp1-si251最差。mrp1-si1016和mrp1-si795可以作为进一步实验的靶序列。

MRP1/CD9与肺癌的关系

肺癌发病率和死亡率增长较快,对人类健康和生命有很大威胁,早期发现早期治疗是诊治关键.MRP1/CD9是跨膜蛋白,属于TM4SF家族,与肿瘤恶性程度高低和转移有密切关系.检测肺癌组织中MRP1/CD9的表达水平有助于监测病情的进展、评估治疗效果、判定预后,为早期发现早期治疗提供指导意义.综述了MRP1/CD9的结构、功能、作用机制及与肺癌的关系的研究进展.

肺癌患者外周血中 MDR －1及 MRP 基因在化疗前后的表达及意义

目的：探讨肺癌患者化疗前后外周血淋巴细胞中多药耐药基因（ MDR－1）和多药耐药相关蛋白（ MRP）的表达及意义。方法分别于化疗开始前及化疗周期结束后第3周收集肺癌患者外周血标本。采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测39例肺癌患者外周血中MDR－1mRNA和MRP mR-NA的表达情况，并与20例健康体检者进行对比。结果病例组化疗前MDR－1 mRNA和MRP mRNA的阳性表达率与健康对照组相比差异没有统计学意义（P＞0．05）；各种病理类型的肺癌患者外周血MDR－1mRNA和MRP mRNA的阳性表达水平随着化疗次数的增多而增强，其中小细胞肺癌患者化疗后MDR－1 mRNA和MRP mRNA的表达水平均高于化疗前，差异具有统计学意义。结论化疗可诱导肺癌患者外周血淋巴细胞MDR－1mRNA和MRP mRNA的表达水平增强；应用外周血评估MDR－1mRNA和MRP mRNA的方法简单可靠，创伤性小，可能成为预估肺癌患者化疗疗效的有效指标。

MRP-1/CD9与高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性行为相关性的体外研究

目的:观察MRP-1/CD9对高转移人乳腺癌细胞系MDA-MB-231体外增殖和侵袭的抑制效应,并初步探讨其作用机制。方法:应用MRP-1/CD9特异性扩增引物,借助RT-PCR获得MRP-1/CD9全长cDNA片段,正向插入pcDNA3.1表达载体中,并将重组质粒导入MDA-MB-231细胞中,G418稳定筛选;应用CFSE-流式细胞仪检测,单层伤口愈合实验,软琼脂克隆形成实验等方法观察了MDA-MB-231细胞转染前后,细胞体外增殖及侵袭能力等指标的变化。Western blot检测AKT、p-AKT和SRC在转染前后的细胞中的表达变化。结果:成功构建全长MRP-1/CD9真核表达载体,将其转染入MDA-MB-231细胞后获得稳定表达MRP-1/CD9的MDA-MB-231克隆株(MDA-MB-231/CD9)。与空质粒转染后的MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/CD9细胞运动能力明显减弱,侵袭能力降低;p-AKT和SRC在MDA-MB-231/CD9细胞中表达明显降低。结论:MRP-1/CD9对细胞的运动和侵袭有抑制作用,这种作用与p-AKT和SRC的下调引起E-cadherin介导的粘附增强有关。

喉鳞癌中KAI1／CD82、MRP1/CD9的表达及意义

目的探讨喉鳞癌中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达及意义。方法采用实时荧光定量PCR法（RT—qPCR）及免疫组织化学技术检测100例喉鳞癌（ Laryngeal squamous cell carcinoma, ISCC）组织及随机抽取30例相应癌旁非癌组组织中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达情况，并分析二者与肿瘤临床病理参数的关系及对生存函数的影响。结果在mRNA及蛋白水平上KAI1／CD82和MRP1／CD9表达结果基本是一致的，KAI1／CD82和MRP1／CD9在30例配对的LSCC中，癌组织表达显著低于相应癌旁非癌组织，其表达差异有统计学意义（P〈0．05）；两者在TNM分期Ⅲ～Ⅳ、分化程度差、临床分期Ⅲ-Ⅳ、有淋巴结转移LSCC中的表达水平均低于在TNM分期Ⅰ-Ⅱ、分化程度良、临床分期Ⅰ-Ⅱ、无淋巴结转移LSCC患者（P〈0．05）。而在不同性别、不同年龄组、不同生长部位等LSCC患者的组织中其表达差异无统计学意义（P〉O．05）；LSCC中KAI1／CD82蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的48个月（X^2=6．98，P=0．008），LSCC中MRP1／CD9蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的49个月（X2=5．45，P=0．02）；在LSCC中KAI1／CD82和MRPI／CD9蛋白的表达呈正相关（X^2=31．41，P〈0．01）。结论KAI1／CD82和MRP1／CD9可能共同参与了LSCC的发生发展过程，对LSCC的浸润和转移及预后评估具有一定的临床参考价值。KAI1／CD82、MRP1／CD9可以作为判断喉鳞癌浸润转移及预后的标记物。

肿瘤转移抑制因子基因MRP-1/CD9对小鼠胚胎着床影响的研究

目的研究外源性MRP-1/CD9抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法1.将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度MRP-1/CD9抗体的培养液中,观察囊胚形成及囊胚脱透明带的情况。2.妊娠D4小鼠子宫角注射MRP-1/CD9抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量。结果1.体外培养时,MRP-1/CD9抗体显著抑制胚胎的囊胚形成率(1:400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。2.宫角注射MRP-1/CD9抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.33±0.15vs4.57±0.21)。结论MRP-1/CD9参入小鼠胚胎的发育及植入。

抗肿瘤细胞多药抗性基因MDR1和MRP1双靶位自剪切核酶的合成及其在体外活性研究

多药耐药基因MDR1和 (或 )MRP1过度表达是引起肿瘤细胞对化疗药物产生多重耐药性的重要原因 .在以往研究抗MDR1基因的核酶 (196MDR1 Rz)的基础上 ,合成了针对MRP1基因 2 10和 730编码子的核酶 (2 10MRP1 Rz ,730MRP1 Rz) ,同时利用RNA二级结构分析程序mfold 3 0设计合成了一种双靶位自剪切核酶体系 (Coat) .将 196MDR1 Rz和 2 10MRP1 Rz基因同时载入到该体系中 ,建立了抗MDR1 MRP1双靶位核酶 .在无细胞体系中对上述核酶进行的生物活性实验表明 ,2 10MRP1 Rz与 730MRP1 Rz相比能够更有效地切割底物 ;载入Coat的抗MDR1和MRP1核酶均能得以有效释放 ,同时切割各自的靶RNA序列 ,切割效率与单靶位核酶一致 ;

脑缺血再灌注大鼠脑内Mrp1的表达变化

目的观察脑缺血再灌注后多药耐药蛋白(Mrp1)在脑内的表达变化,探讨其与缺血再灌注的关系.方法 24只大鼠随机分为假手术组(n=6)和缺血再灌注后1、3、7d组(n=6).应用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,以抗Mrp1抗体进行免疫组化染色,检测缺血再灌注后脑组织中Mrp1的表达变化.结果 Mrp1在正常脑内的神经元及胶质细胞中均有表达.缺血再灌注后1d、3 d、7d组中,缺血再灌注区的皮质、海马及纹状体内可见Mrp1表达升高,阳性细胞数量增多,在3d组达高峰(P<0.05).结论大鼠脑缺血再灌注后细胞中Mrp1的表达增高,可能是细胞受损时的自我保护反应,但同时也可能与临床耐药性的发生有关.