抑制ABCC1/MRP1转运体下调IL-1β分泌的实验研究

目的:用体外巨噬细胞实验和全基因敲除小鼠,筛选IL-1β分泌相关的胞膜转运体。方法:分化THP-1细胞株得到人源性巨噬细胞,从人外周血获取巨噬细胞。获取同性别、同年龄的FVB野生型小鼠作为MRP1全基因敲除小鼠的对照,培养小鼠腹腔和骨髓巨噬细胞。使用ABCC1/MRP1、ABCG2/BCRP、ABCB1/P-gp、OATP1B1和MATE转运体抑制剂处理细胞,再使用脂多糖和腺苷三磷酸刺激细胞,采用ELISA、Western blot和细胞免疫荧光法检测IL-1β分泌水平。结果:人和小鼠巨噬细胞抑制剂实验表明,抑制ABCC1/MRP1转运体后,IL-1β分泌显著降低,而抑制其他4类转运体无效果。在动物实验中,MRP1全基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞分泌IL-1β的水平显著低于对照组。结论:ABCC1/MRP1转运体是一种新发现的IL-1β分泌途径,有望成为解决细胞因子释放综合征等临床问题的新靶标。

慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管上皮MRP1 mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平变化及化痰降气方逆转的作用。方法:采用烟熏复合木瓜蛋白酶雾化吸入法制备COPD大鼠模型,将造模后的大鼠随机分为治疗组和模型组,另以正常大鼠作为对照组。治疗组予以化痰降气方(生药5.8g/kg)i.g.治疗给药,2次/d,连续15d后,分别采用RT-PCR、Western blot技术检测各组大鼠肺支气管上皮MRP1mRNA及蛋白水平的表达。结果:化痰降气方治疗能明显改善COPD模型大鼠的肺功能;COPD模型组MRP1mRNA及蛋白水平较正常对照组显著降低(P<0.01);与COPD模型组比较,化痰降气方治疗组MRP1mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01)。结论:化痰降气方能逆转COPD状态下MRP1mRNA及蛋白水平表达的降低,这可能是其治疗COPD作用机制之一。

粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药KB-MRP1细胞株多药耐药性的逆转作用

背景与目的:粉防己碱(tetrandrine,Tet)是从中草药粉防己的根块中提取的双苄基异喹啉生物碱,具有逆转P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)介导的肿瘤多药耐药(multidrugresistance,MDR)作用。本研究探讨粉防己碱对人口腔上皮癌多药耐药细胞株KB-MRP1耐药的逆转作用及其可能的机制。方法:采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对KB-3-1细胞和KB-MRP1细胞的增殖抑制效应;MTT法检测顺铂(cisplatin,DDP)、长春新碱(vincristine,VCR)、阿霉素(adriamycin,ADM)、依托泊苷(etoposide,VP-16)对KB-3-1、KB-MRP1细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱时的变化;采用流式细胞仪检测细胞内ADM蓄积程度以及细胞凋亡。结果:1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对KB-3-1和KB-MRP1细胞无明显细胞毒性作用。KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16和DDP的耐药倍数分别为21.23、38.39、12.47和1.31。加入1μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对VCR、ADM、VP-16的耐药逆转倍数分别为4.96、5.85和4.27倍。加入1.5μg/ml粉防己碱后,KB-MRP1对上述化疗药物的敏感程度提高更明显。1.5μg/ml浓度的粉防己碱可明显提高ADM在KB-MRP1细胞内的蓄积,增强VCR诱导的KB-MRP1细胞凋亡。结论:粉防己碱可以逆转KB-MRP1细胞的多药耐药,逆转效果与药物浓度有关,逆转机制可能与增加细胞内化疗药物蓄积和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关。

胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义

目的探讨胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达及意义。方法收集223例胃癌组织标本,采用组织芯片和免疫组化技术检测MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及三者之间的相关性。结果胃癌组织中MRP1/CD9、KAI1/CD82和ME491/CD63阳性表达率分别为58.3%、53.8%和64.1%;MRP1/CD9、KAI1/CD82表达与患者的性别、年龄、分期均无关,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移有关,KAI1/CD82表达还与浸润深度有关,而MRP1/CD9表达则与之无关,未发现ME491/CD63表达与胃癌临床病理特征的相关性。MRP1/CD9与KAI1/CD82、ME491/CD63的阳性表达率有显著相关性(r=0.147、0.164,P<0.05),KAI1/CD82与ME491/CD63的阳性表达无相关性。结论 MRP1/CD9、KAI1/CD82的表达可能是判断胃癌生物学行为的重要指标。

亚砷酸联合电离辐射作用于肝癌细胞株HepG2后对多药耐药基因MRP1和凋亡相关基因caspase 3表达的影响

目的:探究亚砷酸联合电离辐射作用于肝癌细胞株HepG2后对多药耐药基因MRP1和凋亡相关基因caspase 3表达的影响。方法:采用Hoechest染色法检测亚砷酸处理、照射处理及联合处理对细胞凋亡的影响。采用qRT-PCR及Western-blot检测不同处理后HepG2细胞中MRP1和caspase 3的表达水平。结果:亚砷酸联合电离辐射可显著诱导细胞凋亡,显著增强caspase 3的表达,显著降低MRP1的表达。结论:亚砷酸联合电离辐射可通过增加caspase 3的表达诱导HepG2细胞凋亡,并有可能通过下调多药耐药基因MRP1的表达来降低肝癌细胞的耐药性。

靶向人多药耐药基因mrp1特异性小分子干扰RNA有效序列筛选

目的:筛选靶向人多药耐药相关蛋白基因(mrp1)特异性小分子干扰RNA(siRNA)的有效序列。方法:设计并体外转录合成靶向mrp1的4条siRNA(mrp1-si251,mrp1-si480,mrp1-si795,mrp1-si1016和空白对照si-阴性),转染转基因单因素肝癌多药耐药细胞Hep G2/mrp1。用RT-PCR检测mrp1 mRNA表达,流式细胞仪检测多药耐药相关蛋白表达、细胞内柔红霉素(DNR)蓄积,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素(ADM)的敏感性。结果:4条siRNA均能不同程度逆转Hep G2/mrp1细胞由mrp1介导的多药耐药。转染72h后,mrp1-si795组和mrp1-si1016组的mrp1 mRNA表达水平分别分别下调了(86.36±2.26)%和(85.54±1.04)%,较mrp1-si251组和mrp1-si480组明显下降(P<0.05);细胞内柔红霉素蓄积由多到少依次为mrp1-si795组最多,mrp1-si1016组次之,mrp1-si480组较少,mrp1-si251组最少(P<0.05);mrp1-si795组对ADR耐药的相对逆转率(86.36%)最高,mrp1-si1016组(85.54%)次之,较mrp1-si251组(60.93%)和mrp1-si480组(70.29%)有明显差异(P<0.05);mrp1-si1016组和mrp1-si795组多药耐药相关蛋白表达明显下调。结论:实验设计的靶向mrp1 mRNA的siRNA序列能够不同程度逆转多药耐药相关蛋白介导的人肝癌耐药细胞HepG 2/mrp1的多药耐药性,mrp1-si1016和mrp1-si795效果最好,mrp1-si480较差,mrp1-si251最差。mrp1-si1016和mrp1-si795可以作为进一步实验的靶序列。

组织芯片技术检测MRP1/CD9在胃癌中的表达

目的:探讨运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)在胃癌组织中的表达与胃癌生物学行为之间的相关性。方法:采用组织芯片技术及免疫组化方法对223例胃癌组织的MRP1/CD9蛋白表达进行研究。结果:在胃癌组织中MRP1/CD9表达的阳性率为58.3%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度、胃癌分期无关,而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移密切相关。其中高-中分化组表达高于低分化组,差异有显著性(P<0.05);无淋巴结转移组表达高于淋巴结转移组,亦具有显著性(P<0.01)。二元Logistic回归前进法显示:淋巴结转移最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著的因素,其次是分化。结论:胃癌组织中MRP1/CD9表达改变与肿瘤的分化、淋巴结转移密切相关。

MRP1/CD9与肺癌的关系

肺癌发病率和死亡率增长较快,对人类健康和生命有很大威胁,早期发现早期治疗是诊治关键.MRP1/CD9是跨膜蛋白,属于TM4SF家族,与肿瘤恶性程度高低和转移有密切关系.检测肺癌组织中MRP1/CD9的表达水平有助于监测病情的进展、评估治疗效果、判定预后,为早期发现早期治疗提供指导意义.综述了MRP1/CD9的结构、功能、作用机制及与肺癌的关系的研究进展.

喉鳞癌中KAI1／CD82、MRP1/CD9的表达及意义

目的探讨喉鳞癌中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达及意义。方法采用实时荧光定量PCR法（RT—qPCR）及免疫组织化学技术检测100例喉鳞癌（ Laryngeal squamous cell carcinoma, ISCC）组织及随机抽取30例相应癌旁非癌组组织中KAI1／CD82和MRP1／CD9的表达情况，并分析二者与肿瘤临床病理参数的关系及对生存函数的影响。结果在mRNA及蛋白水平上KAI1／CD82和MRP1／CD9表达结果基本是一致的，KAI1／CD82和MRP1／CD9在30例配对的LSCC中，癌组织表达显著低于相应癌旁非癌组织，其表达差异有统计学意义（P〈0．05）；两者在TNM分期Ⅲ～Ⅳ、分化程度差、临床分期Ⅲ-Ⅳ、有淋巴结转移LSCC中的表达水平均低于在TNM分期Ⅰ-Ⅱ、分化程度良、临床分期Ⅰ-Ⅱ、无淋巴结转移LSCC患者（P〈0．05）。而在不同性别、不同年龄组、不同生长部位等LSCC患者的组织中其表达差异无统计学意义（P〉O．05）；LSCC中KAI1／CD82蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的48个月（X^2=6．98，P=0．008），LSCC中MRP1／CD9蛋白阳性表达者中位生存期为78个月，高于阴性表达者的49个月（X2=5．45，P=0．02）；在LSCC中KAI1／CD82和MRPI／CD9蛋白的表达呈正相关（X^2=31．41，P〈0．01）。结论KAI1／CD82和MRP1／CD9可能共同参与了LSCC的发生发展过程，对LSCC的浸润和转移及预后评估具有一定的临床参考价值。KAI1／CD82、MRP1／CD9可以作为判断喉鳞癌浸润转移及预后的标记物。

食管癌组织MRP1/CD9的表达及临床意义

[目的]探讨食管癌组织中MRP1/CD9表达的临床意义。[方法]应用免疫组化SABC法,检测54例食管癌组织中MRP1/CD9的表达。[结果]无淋巴结转移的食管癌组织和有淋巴结转移的食管癌组织MRP1/CD9阳性表达率分别为68.4%(26/38)、31.3%(5/16)。食管癌组织MRP1/CD9的表达与淋巴结转移、肿瘤的分级、术后存活时间显著相关(P<0.05)。[结论]MRP1/CD9可作为食管癌的预后指标。

抗肿瘤细胞多药抗性基因MDR1和MRP1双靶位自剪切核酶的合成及其在体外活性研究

多药耐药基因MDR1和 (或 )MRP1过度表达是引起肿瘤细胞对化疗药物产生多重耐药性的重要原因 .在以往研究抗MDR1基因的核酶 (196MDR1 Rz)的基础上 ,合成了针对MRP1基因 2 10和 730编码子的核酶 (2 10MRP1 Rz ,730MRP1 Rz) ,同时利用RNA二级结构分析程序mfold 3 0设计合成了一种双靶位自剪切核酶体系 (Coat) .将 196MDR1 Rz和 2 10MRP1 Rz基因同时载入到该体系中 ,建立了抗MDR1 MRP1双靶位核酶 .在无细胞体系中对上述核酶进行的生物活性实验表明 ,2 10MRP1 Rz与 730MRP1 Rz相比能够更有效地切割底物 ;载入Coat的抗MDR1和MRP1核酶均能得以有效释放 ,同时切割各自的靶RNA序列 ,切割效率与单靶位核酶一致 ;

脑缺血再灌注大鼠脑内Mrp1的表达变化

目的观察脑缺血再灌注后多药耐药蛋白(Mrp1)在脑内的表达变化,探讨其与缺血再灌注的关系.方法 24只大鼠随机分为假手术组(n=6)和缺血再灌注后1、3、7d组(n=6).应用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,以抗Mrp1抗体进行免疫组化染色,检测缺血再灌注后脑组织中Mrp1的表达变化.结果 Mrp1在正常脑内的神经元及胶质细胞中均有表达.缺血再灌注后1d、3 d、7d组中,缺血再灌注区的皮质、海马及纹状体内可见Mrp1表达升高,阳性细胞数量增多,在3d组达高峰(P<0.05).结论大鼠脑缺血再灌注后细胞中Mrp1的表达增高,可能是细胞受损时的自我保护反应,但同时也可能与临床耐药性的发生有关.

醋柴胡对HEK293细胞中MRP1蛋白摄取活性、蛋白表达及mRNA水平的影响

目的:研究醋柴胡水提液对人胚肾细胞HEK293中MRP1影响的作用机制。方法:MTT法观察醋柴胡水提液对HEK293细胞增殖的影响;蛋白摄取活性实验以秋水仙碱作底物,采用高效液相色谱(HPLC)法检测胞内底物含量;采用Western blot法检测蛋白表达水平;荧光定量RT-PCR法检测mRNA水平。结果:与对照组相比,醋柴胡水提液(10mg·mL-1)作用48 h后,细胞对秋水仙碱的摄取率降低了21%,差异有统计学意义(P<0.01);相应的MRP1 mRNA水平降低了40%,差异有统计学意义(P<0.05);而蛋白表达则无变化。结论:醋柴胡能增加胞内MRP1转运底物秋水仙碱的外排,但可能并非通过改变MRP1 mRNA和蛋白表达水平而实现。

急性白血病病人GST-π、MRP1表达及其相关性的临床研究

目的:检测急性白血病(acute leukem ia,AL)病人谷胱甘肽硫转移酶-π(glutath ione-S-transferase-π,GST-π)、多药耐药相关蛋白1(mu lti-drug resistance relevant prote in 1,MRP1)的表达,探讨二者与AL多药耐药(mu lti-drug resistance,MDR)的关系及临床意义,明确二者在AL中的表达有无相关性以及两者表达与AL病人临床特征的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法检测80例AL病人及30例正常人外周血单个核细胞GST-π、MRP1表达。运用SPSS10.0统计软件,采用χ2检验、四格表精确概率法、t检验、直线相关分析方法统计结果。结果:GST-π、MRP1在难治组的阳性率均高于初治组和完全缓解组;在初治组的阳性率均高于对照组。GST-π、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。GST-π、MRP1表达阳性组完全缓解率低于阴性组。GST-π、MRP1的表达与AL难治组病人年龄、性别、骨髓幼稚细胞比例及外周血白细胞计数无关,且两者在急性淋巴细胞白血病(acute lymphob lastic leukem ia,ALL)组、急性非淋巴细胞白血病(acute non lymphob lasticleukem ia,ANLL)组表达无差别。结论:GST-π和MRP1的高表达与AL临床耐药有关;GST-π和MRP1在难治组中的表达密切相关;GST-π和MRP1表达阳性的AL病人的完全缓解率明显降低,两者可能是影响AL疗效的重要指标;GST-π和MRP1在难治组表达阳性率与年龄、性别、外周血白细胞计数、骨髓幼稚细胞比例可能无关,且在ALL组与ANLL组中差别无统计学意义。

MRP1基因表达与耐药性癫痫的相关性研究

目的研究MRP1基因表达与耐药性癫痫的相关性。方法选取90例符合诊断标准的癫痫患者,其中药物敏感患者50例,癫痫耐药患者40例。采用实时荧光定量PCR方法检测癫痫患者外周血中MRP1基因mRNA的表达水平。结果耐药性癫痫组MRP1基因mRNA表达量(9.52±1.38)高于药物敏感组(1),差异有统计学意义(P<0.05)。结论癫痫患者外周血中MRP1的表达水平,可作为诊断耐药性癫痫的参考指标。

大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1的克隆及其原核表达载体的构建

目的:从大鼠磨牙胚组织中克隆大鼠磨牙牙根发育相关基因mrp1,构建原核融合表达载体,利用大肠杆菌表达其C端肽。方法:从生后 3dSD大鼠仔鼠磨牙胚中提取总mRNA,通过RT-PCR扩增出mrp1C端肽段基因并克隆进中间载体,然后将插入基因克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1,以大肠杆菌DH5α为宿主菌,在 28℃下进行IPTG诱导。结果:克隆载体序列酶切鉴定、序列测定完全正确;含重组质粒的工程菌经诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,Mr为 36×103,与预期C端肽Mr大小一致,约占菌体总蛋白的 19%。结论:成功地鉴定了mrp1C端肽段基因,通过基因克隆构建了其原核表达载体pGEX-4T-mrp1,并在大肠杆菌中得到了高效表达。

补中益气汤灌胃大鼠血清对TGF-β1介导A549细胞MRP1表达影响随机平行对照研究

[目的]观测补中益气汤灌胃大鼠血清对TGF-β1介导A549细胞MRP1表达影响。[方法]血清药理学法,制备灌胃大鼠血清:使用随机平行对照方法,将20只SPF级SD大鼠,按随机数字表法分为2组,10只/组,补中益气汤组以2m L生药量5.67g/kg灌胃,空白血清组等量生理盐水,1次/d,连续3d,末次灌胃1h后,腹主动脉取血,提取上清。血清干预:取人肺腺癌A549细胞,接种于培养瓶中,37℃,5%CO2培养箱中培养;细胞密度达70%,饥饿12h,空白组(A组)加空白血清;TGF-β1组(B组)加空白血清及TGF-β1;补中益气汤+TGF-β1组(C组)加补中益气汤血清及TGF-β1,培养48h。观测MRP1蛋白表达(免疫细胞化学法和Western blot法)、MRP1基因表达(Realtime PCR法)。[结果]MRP1主要在细胞膜表达,各组细胞中均可见棕黄色阳性产物表达,TGF-β1组(B组)和补中益气汤+TGF-β1组(C组)棕黄色颗粒阳性表达量均高于空白组(P<0.05);补中益气汤+TGF-β1组(C组)低于TGF-β1组(B组)(P<0.05);Western blot结果与组化结果一致。Realtime PCR结果为TGF-β1组(B组)和补中益气汤+TGF-β1组(C组)基因表达水平均高于空白组(P<0.05);补中益气汤+TGF-β1组(C组)低于TGF-β1组(B组)(P<0.05)。[结论]补中益气汤血清干预TGF-β1诱导A549细胞EMT过程,细胞中MRP1在蛋白和基因水平均降低。

鼠源抗人乳腺癌MRP1/ABCC1噬菌体Fab抗体库的构建

鼠源抗人乳腺癌多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1/ABCC1)噬菌体Fab抗体库的构建首先是利用乳腺癌组织匀浆液作为免疫原免疫BALB/c小鼠,成功免疫后提取小鼠脾组织的总RNA逆转录为cDNA。然后设计小鼠IgG各亚型的特异性Fab引物,PCR扩增Fd和L基因并依次连接到噬菌体载体pComb3中。重组体pComb3-Fab转化至E.coli XL1-Blue菌中,最后经辅助噬菌体VCSM13超感染,成功构建噬菌体Fab抗体库。以化学合成的MRP1/ABCC1膜表位10肽为抗原进行3轮淘选、富集,对淘选后获得的各级噬菌体抗体库进行ELISA检测和鉴定。成功获得的抗MRP1/ABCC1-10肽三级噬菌体Fab抗体库将为抗人乳腺癌MRP1/ABCC1 Fab抗体的制备提供保障。

应用组织芯片技术检测结直肠癌中MRP1/CD9的表达

目的:探讨结直肠癌组织中运动相关蛋白-1(MRP1/CD9)的表达及其与肿瘤转移的关系。方法:应用组织芯片和免疫组织化学技术检测244例结直肠癌组织中MRP1/CD9的蛋白表达。结果:MRP1/CD9在结直肠癌组织中阳性率为77.9%,其表达与患者的性别、年龄、浸润深度无关,而与肿瘤的分化程度、Dukes分期、淋巴结转移有关;其中高-中分化组表达高于低分化组;Dukes A+B期表达高于C+D组;无淋巴结转移组表达高于有淋巴转移组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic回归前进法显示:分化程度最先进入方程,是影响MRP1/CD9表达最显著因素。MRP1/CD9表达在单因素时和Dukes分期负相关,但在多因素时被掩盖。结论:MRP1/CD9在结直肠癌组织中的表达缺失与肿瘤的转移密切相关,有望成为判断结直肠癌预后的新标志。