卡氏肺孢子主要表面糖蛋白UCS基因siRNA表达载体的构建和鉴定

目的:构建并鉴定艾滋病主要机会性感染病原体-卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的短干扰性RNA(Short interfering RNA,siRNA)表达载体。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切与测序法进行鉴定。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致。结论:成功构建和鉴定PC MSG-UCS基因的siRNA表达载体。

siRNA治疗大鼠卡氏肺孢子菌肺炎的实验研究

目的:观察靶向卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)DNA上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)基因的siRNA对实验大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(Pneumocystis carinii pneumonia,PCP)的治疗效果。方法:地塞米松皮下注射大鼠8周建立PCP动物模型,分为4组:A组,pPC-UCS组;B组,磺胺组;C组,感染对照组;D组,pTZU6+1对照组。大鼠存活率、体重、肺组织病理学变化、肺印片PC包囊数、扫描电镜下PC表面结构变化、ELISA检测大鼠血清IL-8、TNF-α水平作为疗效指标。结果:①各组大鼠均存活,存活率比较无意义。②A组与B组大鼠体重分别增长(13.16±3.97)g与(14.21±3.90)g,明显高于C组(4.32±2.06)g与D组(5.38±1.19)g,P<0.05。③与C组和D组比较,A组和B组大鼠肺组织炎症明显减轻。④A组与B组每视野包囊均数分别为(3.61±0.40)个与(3.17±0.28)个,明显低于C组(8.34±0.55)个与D组(8.74±0.57)个,P<0.05。⑤扫描电镜下,C组与D组PC表面结构完整,有密集的微绒毛结构;A组与B组PC表面微绒毛脱落,表膜出现深大缺损。⑥大鼠血清IL-8水平:A组与B组分别为(232.50±36.27)pg/ml与(201.15±34.52)pg/ml,明显低于C组(596.85±61.72)pg/ml与D组(555.10±54.31)pg/ml,P<0.05;大鼠血清TNF-α水平:A组与B组分别为(145.20±80.72)pg/ml与(172.65±76.27)pg/ml,明显高于C组(31.58±8.47)pg/ml与D组(39.49±12.03)pg/ml,P<0.05。结论:靶向PC MSG-UCS基因的siRNA对大鼠PCP有治疗作用。