miR-149-5p通过MSH5/Wnt信号通路调控胶质瘤细胞恶性生物学行为

目的探索miR-149-5p调控MSH5/Wnt信号通路影响胶质瘤细胞恶性生物学行为的具体作用机制。方法RT-qPCR检测miR-149-5p在胶质瘤组织和细胞系A172、U251、HS683、H4中的表达。CCK-8检测细胞活力,EDU染色检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p和MSH5的靶向关系。Western blot检测MSH5、GAPDH、GSK3β、β-catenin、AXIN2的蛋白表达。结果miR-149-5p在胶质瘤组织(P<0.0001)和细胞系中表达降低(P<0.0001),过表达miR-149-5p可显著抑制A172细胞的增殖(P<0.01)、迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01)、细胞周期(P<0.01),并诱导凋亡(P<0.01),敲降miR-149-5p则具有相反的作用。双荧光素酶报告基因实验证明miR-14-5p靶向MSH5。敲降miR-149-5p可逆转敲降MSH5对A172细胞恶性生物学行为的作用。过表达MSH5通过抑制GSK3β、激活β-catenin/AXIN2通路,促进A172细胞的增殖、迁移和侵袭和细胞周期,并抑制细胞凋亡。结论miR-149-5p通过靶向上调MSH5,抑制AXIN2表达激活β-catenin/AXIN2通路,从而抑制间质瘤细胞的恶性生物学行为。

山羊MSH4和MSH5基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达

以低繁藏山羊和高繁金堂黑山羊为研究对象,分别提取处于发情期的5只藏山羊和5只金堂黑山羊的卵巢、子宫、输卵管、垂体的总RNA,并通过RT-PCR技术对MSH4、MSH5基因c DNA进行克隆、序列分析,以Real-time PCR技术对其进行组织表达研究。结果表明,藏山羊和金堂黑山羊MSH4基因编码区均长2 499 bp,编码832个氨基酸,两品种基因编码区有5处碱基不同,并导致3处氨基酸的差异;MSH5基因编码区均长2 496 bp,编码831个氨基酸,两品种基因编码区有9处碱基不同,并导致5处氨基酸的差异。藏山羊MSH4基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、绵羊、牛、马、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.8%、99.8%、99.4%、98.1%、94.4%、85.1%、84.7%和93.5%;藏山羊MSH5基因编码区核苷酸序列与金堂黑山羊、山羊、牛、家犬、小鼠、褐家鼠、人的同源性分别为:99.6%、99.6%、97.3%、88.0%、85.8%、85.3%和90.2%。MSH4和MSH5基因m RNA在两个山羊品种的卵巢、子宫、输卵管、垂体中均有表达,但两品种间无显著性差异(P>0.05)。说明MSH4和MSH5基因在动物进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性有待进一步研究。

MSH5抑制对恶性胶质瘤细胞表型的影响

目的研究MSH5抑制对恶性胶质瘤细胞表型的影响,寻找治疗恶性胶质瘤的新的治疗靶点。方法通过TCGA数据库中查阅MSH5与恶性胶质瘤患者的临床分期和预后的关系;向U251、SHG-44和SNB-19细胞中转染干扰MSH5慢病毒,通过PCR检测MSH5 mRNA的表达,验证干扰效率;通过CCK-8和流式细胞技术检测胶质瘤细胞的增殖和周期;采用平板克隆、划痕实验和Transwell进一步检测敲降MSH5对细胞侵袭和转移能力的影响;最后,通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞的凋亡情况。结果随着MSH5表达的升高,胶质瘤患者的预后和生存率是明显下降的;转染MSH5干扰慢病毒后,MSH5 mRNA的表达水平明显下降(P<0.05);敲降MSH5,U251、SHG-44和SNB-19胶质瘤细胞的存活率明显受到抑制(P<0.05);敲降MSH5,U251、SHG-44和SNB-19的细胞周期明显抑制了胶质瘤细胞的S期(P<0.05);敲降MSH5基因明显抑制了胶质瘤细胞的数目(P<0.05);敲降MSH5后,U251、SHG-44和SNB-19胶质瘤的愈合率明显下降(P<0.05);敲降MSH5胶质瘤细胞转移的数目明显减少(P<0.05);敲降MSH5能明显增加胶质瘤细胞的凋亡率(P<0.05)。结论MSH5与恶性胶质瘤患者的临床分期和预后具有相关性;敲降MSH5抑制恶性胶质瘤细胞的增殖和侵袭迁移能力,促进肿瘤细胞凋亡。

MSH5基因C85T多态性与卵巢早衰的相关性分析

目的:探讨错配修复蛋白基因MSH5基因C85T多态性与卵巢早衰(premature ovary failure,POF)发病的关系。方法:应用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RELF)技术,对65例卵巢早衰患者(POF患者组)和66例健康对照者(对照组)MSH5基因C85T多态性进行分析,并随机抽取50%样本测序进行验证。结果:(1)正常对照组MSH5基因C85T多态性CC、CT、TT基因型频率分别为77.3%、19.7%、3.0%,POF患者组分别为80.0%、18.5%、1.5%;两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组等位基因C、T频率分别为87.1%、12.9%,POF患者组分别为89.2%、10.8%,两组比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。(2)DNA测序结果与PCR-RELF结果完全一致。结论:MSH5基因C85T多态性与POF发病无关。

错配修复基因MSH5多态性与非小细胞肺癌的易感性研究

目的探讨错配修复基因MSH5C85T多态性与非小细胞肺癌（non-small—eelllungcarcinoma，NSCLC）易感性的相关性。方法采用PCR一限制片段长度多态性分析技术（PCR—RHP），对中国人群107例NSCLC患者和120名健康体检者进行候选基因MSH5C85T多态性分析，后期随机抽取50％标本进行测序验证。结果NSCLC组MSH5基因C85T多态性CC、CT、1vr基因型频率分别为59．8％、35．5％、4．7％，对照组分别为78．3％、20．0％、1．7％，NSCLC组CT、TT基因型频率高于对照组（x2=9．170，P=0．002；OR=1．855，95％CI=1．229～2．798）；NSCLC组C／T等位基因频率分别为77．6％、22．4％，对照组分别为88．3％、11．7％，NSCLC组T等位基因频率高于对照组（x2=9．405，P=0．002；OR=1．923，95％C1=1．253～2．950）；后期随机抽取的50％标本测序结果与RFLP完全相符。结论在中国人群中，MsH5C85T多态性与NSCLC易感性呈显著相关。