细胞色素P450氧化酶MSP1基因对有机溶剂的易感性与新生儿出生体重的影响

目的 观察在有机溶剂暴露情况下母亲和新生儿细胞色素 P45 0氧化酶 MSP1基因易感性对新生儿出生体重的影响。方法 采用流行病学现况调查方法 ,使用统一调查表 ,由经过培训的调查员在北京燕山某医院对 1997～ 1998年入院分娩的 792个母婴对进行调查。结果 采用自由效应模型 ,将母亲文化程度、年龄、被动吸烟、倒班、生育史、孕前身高、体重、新生儿性别、孕周混杂因素放入回归模型进行调整 ,发现 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型其新生儿出生体重(- 6 4.6± 2 9)显著低于其它各组基因型。进一步分析发现 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型在有机溶剂暴露情况下 ,可以使新生儿出生体重显著降低 (- 10 7.9± 34 .2 )。可见 AG(母亲 ) - AG(新生儿 )基因型可能是有机溶剂暴露的易感基因。结论 在这组人群中新生儿出生体重受遗传因素的影响 ,同时 ,母亲、婴儿

水稻msp1-4突变体的鉴定及其UDT1和GAMYB基因的表达分析

通过对粳稻‘9522’辐射诱变,得到一隐性雄性不育突变体msp1-4(MULTIPLESPOROCYTE),用遗传定位方法将该基因座位定位在分子标记WY-4和WY-8之间,相距0.8cM,物理距离247kb。测序分析证明这247kb区间中的MSP1基因的编码区在第758bp到767bp之间发生了10个碱基的缺失。形态学观察结果表明该突变体和已经报告过的msp1突变体的表型基本一致。为分析水稻其它与花药发育相关的基因在msp1-4中的表达变化,用半定量RT-PCR技术检测到影响绒毡层和花粉发育的重要基因UDT1和GAMYB的表达在突变体中比在野生型水稻中低,说明这2个基因可能位于MSP1基因的下游。

四川人群中CYP1A1基因Ile-Val和Msp1位点多态性与肺癌易感性的研究

目的 探讨细胞色素P45 0 (CYP1A1)基因异亮氨酸 (Ile) 缬氨酸 (Val)位点和Msp1位点多态性和肺癌易感性的相关关系。方法 以病例对照的研究方法 ,采用PCR RFLP和ASA PCR技术检测 82例原发性肺癌和 91例对照的CYP1A1基因Ile Val位点和Msp1位点多态性。 结果 Ile Val三种多态基因型在肺癌组和对照组分布差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,Ile/Val、Val/Val基因型在肺癌组的分布频率明显高于对照组 ;logistic回归分析结果显示Ile/Val、Val/Val基因型患肺癌的危险分别是Ile/Ile基因型的 1.969倍和3 .15 0倍 ;当按吸烟分层后 (将Ile/Val、Val/Val基因型合并分析 ) ,吸烟组中Ile/Val、Val/Val合并基因型患肺癌的危险是Ile/Ile基因型的 3 .0 5 9倍 ,而在不吸烟组其OR为 1.687;Msp1位点多态性在肺癌组和对照组差异无统计学意义。结论 CYP1A1第 7外显子的Ile/Val、Val/Val基因型与肺癌的易感性有关 ,可望作为肺癌易感人群筛选的重要指标 ;

间日疟原虫MSP1 C端编码基因的克隆及序列分析

目的 克隆间日疟原虫MSP1C端编码基因,并进行序列测定和分析。方法 根据间日疟原虫MSP1C端编码基因设计1对引物,采用PCR技术从深圳间日疟患者血样(编号为PvSZ1)的核酸提取物中扩增出MSP1C端编码基因,回收纯化后,与T载体连接构建重组子pMD/MSP1,并转化大肠杆菌JM109。阳性克隆以限制性酶切分析与PCR法鉴定后,双脱氧链末端终止法双向测定序列并分析。结果 从间日疟血样提取的DNA中扩增出1119bp的基因片段,所构建的pMD/MSP1阳性克隆重组子经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致。所测定的间日疟原虫PvSZ1C端基因序列与国外Sal-1株比较,碱基数相同,未发现碱基缺失,相同的核苷酸占96.7％,序列中第542位碱基变化为同义突变(GTC→GTT,均编码缬氨酸),第375～542区间的碱基变化数占整个序列变化碱基总数的92.9％(34/37)。所推测的氨基酸序列与Sal-1株比较,同源性为92.5％。结论 成功克隆了间日疟原虫PvSZ1株MSP1C端编码基因,该基因在不同间日疟原虫地理株间相对保守,所克隆基因序列的第375～542核苷酸区域为高频变化区。

恶性疟原虫MSP1-19毕氏酵母真核表达克隆的构建

目的构建恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量1.9万片段(MSP1-19)毕氏酵母真核表达克隆。方法利用PCR技术扩增出MSP1-19,插入pPIC9载体中,鉴定正确的MSP1-19基因,插入毕氏酵母分泌型表达载体pPIC9k中,DNA测序鉴定序列的正确性,转化酵母细胞。结果筛选出的阳性克隆为MSP1-19表达克隆。结论用分子生物学方法重组构建的MSP1-19毕氏酵母真核表达克隆,为高效表达MSP1-19及其活性鉴定奠定了基础。

间日疟原虫MSP1-19基因的克隆与表达

目的:构建间日疟原虫MSP1-19(Plasmodium vivax merozoite surface protein-1-19,Pv MSP1-19)基因克隆及表达的载体。方法:将MSP1-19基因克隆入原核表达载体pET28a中,构建重组表达载体。以重组载体转化大肠埃希菌BL21,在IPTG诱导下表达重组Pv MSP1-19蛋白。采用亲合层析纯化重组蛋白,应用SDS-PAG电泳和Western blot对表达产物进行鉴定和分析。结果:成功构建了质粒pET28a/Pv MSP1-19,并在大肠埃希菌中诱导可溶性表达的目的蛋白。表达的蛋白能与间日疟患者血清发生特异性结合反应。结论:成功地原核表达出Pv MSP1-19目的蛋白,为间日疟的疫苗研制提供了实验基础。

克隆有恶性疟原虫MSP1基因片断的pQE质粒在减毒鼠伤寒杆菌X4064株中的表达

为探讨克隆有恶性疟原虫ＭＳＰ１基因片断的重组ｐＱＥＭ１质粒在减毒鼠伤寒杆菌中的表达。使用转化和转导的方法构建减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１）和减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）的表达。实验结果成功地构建了减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１），Ｘ４０６４（ｐＲＥＰ４／ｐＱＥＭ１）的诱导型表达量高于Ｘ４０６４（ｐＱＥＭ１）的组成型表达量。

野生型和Msp1突变体水稻减数分裂期转录水平上的基因表达分析(英文)

【目的】深入探索水稻减数分裂期间配子体发育的分子机理,大规模发掘与水稻配子体发育相关的基因,以便更有把握地利用基因工程手段改造水稻配子体发育的进程。【方法】利用22KAilentcDNA芯片,在全基因组水平上对野生型水稻和Msp1突变体在减数分裂期间表达基因的表达情况进行研究和分析。【结果】有208个基因在野生型和Msp1突变体中的表达差异极显著(P≤0.01,lgRatio≥0.2);对这些基因的核酸序列进行分析、GO(GeneOntology)注释以及功能预测后,将其划归为18个大类,分别涉及到GTP、DNABinding、细胞壁、激酶活性、叶绿体、减数分裂、胚珠、染色体、花粉囊、内膜、细胞分裂、泛素、转运、代谢、蛋白解、Ca2+结合、RNA结合、以及未知功能等;统计分析表明,有99个基因与染色体有关,占总数的47.60%;39个基因与内膜系统有关,占总数的18.75%;有1个基因与减数分裂紧密相关,3个基因与Ca2+结合过程有关;另外有3个基因在Msp1突变体中的表达极显著高于野生型,表明这3个基因很可能参与了绒粘层的发育调控。基因芯片和RT-PCR检测结果表明,水稻基因AK070642特异于绒粘层,说明其参与了绒粘层的发育调控。【结论】研究通过基因芯片技术,将野生型水稻与其Msp1突变体在减数分裂期间表达基因的表达情况进行大规模对比后发现,有208个基因分别从细胞代谢、绒毡层的发育、离子转运、核酸代谢、激酶活性等方面调控水稻的减数分裂过程,为深入理解水稻减数分裂和配子体发育的分子机理提供了实验支撑。

恶性疟原虫Fcc-1/HN株MSP1_(19)基因的体外扩增及鉴定

本文根据恶性疟原虫ＭＳＰ１１９已知序列，自行设计一对用于特异扩增ＭＳＰ１Ｃ端１９肽基因的引物Ｐ１、Ｐ２，在Ｐ１引物中引入ＳａｌⅠ酶切位点及ＡＴＧ起始密码子，在Ｐ２引物中引入ＸｂａⅠ酶切位点及终止密码子，经ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ大小片段，与预期大小相符。采用“压碎与浸泡法”纯化回收ＰＣＲ产物，ＰＣＲ产物经套式ＰＣＲ及酶切鉴定证实与预期大小相符，说明所获确为ＭＳＰ１１９基因。为进一步将该基因与ＰｆＣＭＲ基因进行重组表达复合抗原和免疫接种奠定基础。

马可尼S3系列和OMS1664系列传输设备MSP1+1保护测试分析

通过测试马可尼S3系列和OMS1664系列传输设备在正确配置和错误配置时MSP1+1保护的倒换过程,分析同步数字体系(synchronous digital hierarchy SDH)传输设备在MSP1+1保护倒换中的倒换机制及倒换过程中的业务传输流向,找出了因一次实施光缆业务转移过程中造成A变电站至B变电站光传输中断的真正原因,从而为广东电网电力通信设备的评测工作积累经验。

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16-17区基因和MSP2基因的分子克隆与鉴定

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供理论依据。方法 :根据 MAD2 0株裂殖子表面蛋白 1( MSP1)和 FC2 7株裂殖子表面蛋白 2 ( MSP2 )基因编码区高度保守碱基设计并合成两对引物 ,应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕分离株 CMH/ YN和云南省盈江县农场 CYJ/ YN分离株基因组 DNA MSP1第 13- 17区基因和MSP2基因进行扩增 ,并将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切后 ,分子定向克隆 M13mp18和 M13mp19载体 ,转染大肠杆菌 ( E.coli) TG1,从含 X- gal和 IPTG的 LB平板上 ,将随机筛选得到的单个无色噬菌斑经 E.coli JM10 3扩增 ,用碱裂解法抽提重组子复制型DNA ( RFDNA)后 ,再分别经 Eco RI和 Kpn I,Bam HI和 Hind III双酶切鉴定。结果 :证实重组子为编码脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株 MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分子克隆 M13载体。结论 :首次报道确证脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/ YN和 CYJ/ YN分离株MSP1第 16- 17区基因和 MSP2基因分别与 MAD2 0株 MSP1和 FC2 7株 MSP2相应基因完全一致。这些发现对研究预防人脑型疟疫苗和建立一种新型脑型疟恶性疟原虫检测方法具有重要意义。

稻瘟病菌MSP1的表达、纯化及生物信息学分析

【目的】稻瘟病菌MSP1是由MGG-05344基因编码的一种与稻瘟病菌的植物毒性相关的蛋白,本研究进一步探索MSP1的晶体结构、功能以及与该蛋白相关的研究。【方法】对NCBI数据库提供的MSP1氨基酸序列进行生物信息学分析,构建原核表达载体pETSUMO_1b-MSP1,并对该重组蛋白进行诱导表达和纯化处理。【结果】MSP1分子量约为14.2 KD,等电点为4.6,为不稳定性疏水蛋白;含有信号肽,无跨膜结构域,为非典型分泌蛋白;含有11个磷酸活性位点,含有Cerato-platanin保守结构域,属于Cerato-platanin家族成员。该蛋白可被0.3 mmol/L IPTG诱导表达,镍离子亲和层析的最适洗脱条件为20 mmol/L Tris-HCl,500 mmol/L NaCl,80 mmol/L、100 mmol/L咪唑;阴离子交换层析表明该蛋白具有耐低盐性;分子筛层析具有单峰且对称性良好,最大峰在17.1 mL出峰,分子量约20 KD,表明MSP1以单体形式存在。【结论】本研究最终纯化得到大量高纯蛋白,以期为进一步探索该蛋白的晶体结构、功能、互作蛋白以及与稻瘟病菌毒性相关的后续研究奠定理论与实践基础。

恶性疟原虫FCC1/NH株裂殖子表面蛋白MSP1第2～5区基因的PCR扩增及克隆

构建恶性疟原虫FCC1／HN株MSP1基因2～5编码区真核表达质粒pcDNA3／MSP1，为FCC1／HN株MSP1的体外表达及其基因工程疫苗的研制奠定基础。方法采用PCR技术对恶性疟原虫海南分离株（FCC1／HN）基因组DNAMSP1第2～5区基因片段进行扩增．扩增产物经纯化后用Xhol和Aaal双酶切然后定向克隆入pcDNA3质粒，转化大肠杆菌TG1．再用相同内切酶酶切和PCR扩增对重组子进行鉴定。结果筛选出编码FCC1／HN株MSP1第2～5区基因片段的真核表达质粒pcDNA3／MSP1。结论编码FCC1／HN株MSPI第2～5区基因片段的真核表达质粒pcDNA3／MSP1的构建，为恶性疟原虫FCC1／HN株MSP1的体外表达及其基因工程疫苗的研制奠定基础。

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白MSP1第16—17区基因的分子克隆及序列分析

目的 :为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供进一步科学依据。方法 :应用多聚酶链反应 ( PCR)技术对中国 5例脑型疟患者恶性疟原虫云南省勐腊县勐罕 CMH/YN分离株和云南省盈江县农场 CYJ/YN分离株基因组 DNA裂殖子表面蛋白 1( MSP1)第 13— 17区基因进行扩增 ,将扩增产物分别经 Eco RI和 Kpn I双酶切后 ,回收的 MSP1第 16— 17区基因分子定向克隆M13mp18和 M13mp19载体 ,按 Sanger双脱氧链终止法进行 DNA序列测定 ,并与 MAD2 0、K1和Wellcome株原型基因进行同源性分析比较。结果 :发现脑型疟患者恶性疟原虫 CMH/YN和 CYJ/YN分离株 MSP1第 16— 17区基因之间的序列完全相同 ,全长为 918bp,编码 30 6个氨基酸 ,含 12个半胱氨酸组成的 2个表皮生长因子 ( EGF)单体结构域 ;除了在核苷酸第 4 869位缺失 1个碱基和散在分布 5个碱基点突变之外 ,与 MAD2 0、K1和 Wellcome株相应基因之间的核苷酸同源性分别为 98.6%、2 3.3%和 2 2 .8%。结论 :本研究在世界上首次报道脑型疟患者恶性疟原虫分离株MSP1第 16— 17区 DNA序列测定分析结果 ,确证该基因与 MAD2 0株高度同源性 ,并发现在1691— 170 1位氨基酸存在 TCTEEDSGSSR表位。

一种与恶性疟原虫MSP1复合体相关、由MSP6基因编码的36kDa蛋白

恶性疟原虫MSP-1,-2,-4,-5均以GPI锚定于裂殖子表面,而可溶性MSP-3部分地附着于裂殖子表面,MSP-1为200 kDa前体蛋白质,需经两次蛋白水解才产生以非共价形式多肽复合体结合于裂殖子表面,MSP1复合体还包括与MSP-1无关的由其它不同基因表达的22 kDa和36 kDa两条肽。

边缘无浆体MSP1α与MSP1β基因的克隆表达及其对牛红细胞的黏附特性

目的原核表达边缘无浆体(Anaplasma marginale,A.marginale)MSP1α和MSP1β蛋白,并检测其对牛红细胞的黏附作用。方法通过PCR法扩增MSP1α和MSP1β基因,插入表达载体pGEX-6p-1中,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达的重组MSP1α和MSP1β蛋白经透析法纯化后,分别免疫新西兰白兔和商品蛋鸡,制备免疫兔血清及抗MSP1α和MSP1βIgY抗体,Western blot法分析其免疫原性,间接免疫荧光法(immunofluorescence assay,IFA)检测其在大肠埃希菌外膜上的表达,血凝试验(hemagglutination test,HA)和血凝抑制试验(hemagglutination inhibition test,HI)检测其对牛红细胞的黏附作用。结果重组表达质粒pGEX-6p-1-MSP1α和pGEX-6p-1-MSP1β经PCR、双酶切及测序证实构建正确;表达的重组MSP1α和MSP1β蛋白相对分子质量分别约为58 000和107 000,主要以包涵体形式存在,表达量分别占菌体总蛋白的31%和14%;纯化的重组MSP1α和MSP1β蛋白纯度分别可达93%和91%,可与免疫兔血清发生反应;抗MSP1α和MSP1βIgY抗体可分别与表达MSP1α和MSP1β蛋白的重组菌发生反应;重组MSP1α和MSP1β蛋白对牛红细胞具有明显的黏附作用,吸附率可达56.4%和52.7%。结论MSP1α和MSP1β基因可在大肠埃希菌外膜上大量表达,并对牛红细胞具有明显的吸附作用,为进一步揭示牛边缘无浆体病的作用机理奠定了基础。

边缘无浆体膜表面蛋白1a(MSP1a)的克隆与原核表达

为了给牛边缘无浆体的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据,试验以牛边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术对其膜表面蛋白1a(MSP1a)基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),利用免疫印迹分析鉴定MSP1a基因表达产物的免疫活性。结果表明:MSP1a基因PCR扩增产物与GenBank上的PR1株MSP1a基因的序列同源性达98.3%,编码氨基酸的同源性为98.7%;将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a中,构建了重组原核表达载体;将其转化到DH5α大肠杆菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为49 ku;经SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,MSP1a基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性。

一个水稻MSP1突变体的鉴定和分析

水稻(Oryza sativa)MSP1基因编码一个LRR-RK蛋白,调控花药壁和花粉细胞的分化和发育。本研究从钴-60辐射的水稻突变体库中鉴定出一个新的msp1突变体1972m,其花药明显变小、变白,花药中不含花粉粒。这一新的MSP1等位突变中,一个LRR单元的一个丝氨酸转变为脯氨酸。结构分析表明这一氨基酸残基突变可能影响了MSP1位于细胞外的LRR结构域的稳定性,使之失去结合信号分子的能力,从而阻断了花药壁细胞发育信号的转导。

云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1基因分型及测序

目的：确定云南省恶性疟原虫裂殖子表面蛋白１（ Ｍ Ｓ Ｐ １）基因分型和探讨 Ｍ Ｓ Ｐ １ 基因多态性的遗传及地理特征。方法：采用巢式 Ｐ Ｃ Ｒ法和引物标记周期反应测定法，对云南疫区恶性疟原虫群体 Ｍ Ｓ Ｐ１ 基因分型，并对代表株进行基因序列分析。结果：３０ 例云南恶性疟患者，检出３８ 个基因型虫株，其中 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型是优势虫株， Ｋ１ 次之， Ｒ Ｏ３３ 最少，并存在不同基因株混合感染现象。扩增片段序列分析表明，云南疫区的 Ｍ Ａ Ｄ２０ 型、 Ｋ１ 型和 Ｒ Ｏ３３型均分别与国际上典型的 Ｍ Ｓ Ｐ１、 Ｍ Ａ Ｄ ２０、 Ｋ１ 和 Ｒ Ｏ ３３ 等位基因代表株具有高度的同源性。结论：以 Ｍ Ｓ Ｐ１ 为基因标记物的基因分型法，有助于掌握流行区疟原虫种群的基因特点、分布及流行特征。

以恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1的17区片段基因为基础的复合核酸疫苗诱导小鼠体液免疫反应的研究

目的: 检测以恶性疟原虫裂殖子表面蛋白1 的17 区片段基因为基础的复合核酸疫苗VR1012/TPA/HG-MSP1-17(分泌性)和VR1012/HG-MSP1-17(非分泌性)诱导小鼠的体液免疫反应。方法: 分别用分泌性与非分泌性核酸疫苗肌注免疫小鼠。用间接ELISA法测定小鼠血清的特异性抗体。结果: 每只小鼠经3 次100 μg/100μl非分泌性核酸疫苗免疫后, BALB/c小鼠和C57BL/6 小鼠均产生明显的抗HG和抗真菌表达的MSP1 17 区蛋白(YMSP119 )抗体。但总体抗体水平不高。BALB/c小鼠经3 次200 μg/100 μl非分泌性核酸疫苗免疫后, 产生较高的抗HG抗体, 但抗MSP1-17 的抗体无明显变化。经3 次200 μg/100 μl分泌性核酸疫苗免疫后, 只产生较低的抗HG抗体。结论: