边缘无浆体MSP5蛋白基因的克隆及原核表达

参照已发表的边缘无浆体主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增获得了MSP5蛋白基因。将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析。结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5蛋白基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99.0%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5α宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku。Western-blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。

抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体的制备

为制备抗牛边缘无浆体膜表面蛋白(MSP5)单克隆抗体(MAb),以原核表达的重组MSP5蛋白(rMSP5)免疫BALB/c鼠,应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株(1D8和2F3)。间接ELISA检测腹水效价分别为5.49×105和7.83×104,亚类鉴定其重链为分别为IgG2b和lgG2a,轻链均为κ型;ELISA叠加试验表明这2株MAb识别的抗原位点相同或相近;Western blot结果显示2株MAb均能与rMSP5发生反应。特异性抗MSP5的MAb的获得,为牛边缘无浆体检测奠定了基础。

边缘无浆体MSP5重组抗原间接ELISA检测方法的建立

将边缘无浆体MSP5基因在大肠杆菌DH5α中表达,获得45 ku的融合蛋白。Western-blot检测证实该表达蛋白具有良好的生物学活性。以纯化的融合蛋白为抗原,建立了边缘无浆体MSP5的间接ELISA检测方法。该方法对边缘无浆体阴性、阳性血清(各100份)的阳性检出率和阴性符合率分别为100%和98%,与双芽巴贝虫、大巴贝虫、环形泰勒虫、瑟氏泰勒虫、衣原体、血吸虫和羊肝片吸虫的阳性血清无交叉反应,与羊无浆体阳性血清有交叉反应。结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性。

奶牛无浆体病PCR诊断及msp5基因序列分析

本研究应用PCR方法鉴定出1例无浆体病牛,将扩增的DNA片段进行克隆测序鉴定并进行同源性分析。结果发现目的基因与边缘无浆体(Anaplsma marginale)LZ株和HN株msp5基因的同源性是100%,进而证实黑龙江分离株与兰州株边缘无浆体msp5基因序列高度同源。

边缘无浆体MSP5基因片段的克隆与原核表达

目的克隆边缘无浆体MSP5基因,构建重组质粒,并进行表达与鉴定。方法根据GenBank公布的边缘无浆体MSP 5基因序列(AY714547)设计一对引物,无菌颈静脉采集边缘无浆体阳性的牛血,用PCR方法从4血的DNA模板中扩增MSP 5基因582bp的片断。将该片段克隆到原核表达载体pGEX-KG中,构建原核表达载体KG-MSP5,转化BL21,经IPTG的诱导表达蛋白。利用BugBuster GST Bind Purification Kit将其纯化,经Western blotting进行分析。结果重组质粒KG-MSP5,转化BL21,在IPTG的诱导下表达大小约46 kPa蛋白。western blotting分析表明其具有很好的免疫原性。结论本研究为边缘无浆体的血清学诊断试剂盒的研制奠定了基础。

边缘无浆体MSP5基因序列分析及其融合蛋白的纯化

参照已发表的主要表面蛋白5(MSP5)基因的核苷酸序列,设计了一对特异性引物,以边缘无浆体基因组DNA为模版,采用PCR技术扩增获得了MSP5基因;将其克隆到pGEM-T Easy载体,并进行测序分析,结果表明,克隆的MSP5基因与GenBank上登录的Florida株MSP5基因的序列同源性达98.6%,编码氨基酸的同源性为99%,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为633 bp。将该基因亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建了重组原核表达载体。将其转化到DH5α宿主菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为45 ku。Western blot分析表明,此表达产物能够被抗边缘无浆体阳性血清所识别。通过裂解、洗涤、变性、复性等方法对包涵体蛋白进行处理,获得的纯化产物浓度为1 mg/mL。

检测牛边缘无浆体抗体的竞争抑制ELISA方法的建立

为建立检测牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)抗体的方法,本研究以牛A.marginale膜表面重组MSP5蛋白作为包被抗原,抗MSP5单克隆抗体(MAb)作为竞争抗体,建立一种用于检测牛A.marginale抗体的重组MSP5蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经优化确定CI-ELISA的最佳反应条件为:抗原包被浓度为2μg/孔,封闭液为2%脱脂乳,MAb的稀释度为1∶400,酶标二抗的稀释度为1∶1000,阴性和阳性血清临界值分别为33%和40%;该方法具有良好的特异性和重复性;2348份临床血清样品的检测结果表明,217份为阳性,阳性率为9.2%,与IDEXX A.marginale抗体检测试剂盒的阳性符合率为95.3%,阴性符合率为100%。本实验建立的ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可用于流行病学调查研究。

疟原虫裂殖子表面蛋白4和表面蛋白5

恶性疟原虫裂殖子表面蛋白4(MSP4)和5(MSP5)及其在鼠疟原虫中的同源蛋白4/5(MSP4/5)为膜内在蛋白,其基因含2个外显子和1个内含子,编码分子量约36 kDa—40 kDa的蛋白。在蛋白的两端为疏水的信号肽区和GPI样区,近C端有一个EGF样结构区,含3对链内二硫键。恶性疟原虫不同株的MSP4之间可能存在散在的点突变,而MSP5则显示出极高的相似性。这些蛋白的免疫原性依赖于二硫键维系的空间构像。

应用非参数项目反应理论模型分析人格量表——以EPQ个性问卷N分量表为例

以一种新的量表分析方法——非参数项目反应理论模型(NIRT)分析艾森克人格问卷情绪稳定性分量表,并与参数项目反应理论模型(PIRT)进行比较。统计检验结果显示量表中24个项目与Mokken模型拟合,与2PLM有4个项目不拟合,Mokken模型可准确分析这4个项目。根据Mokken模型拟合程度删除项目后,平均项目信息量的增量明显高于根据2PLM拟合程度删除项目后的增量。分析过程展示了非参数项目反应理论模型用于分析人格量表的可行性、优势和适用性。

低功耗、便携式室内空气质量检测系统设计

本系统以MSP430F5529单片机为核心,采用MQ138甲醛检测传感器、MS2200-P1一氧化碳检测传感器等多种传感器检测室内空气中甲醛、一氧化碳等有害气体并检测甲醛浓度;利用AM2301温湿度传感器对现场温湿度进行实时监测,并通过段式液晶显示屏实时显示甲醛浓度读数,温度、湿度读数。整个系统体积小,重量轻,采用电池供电,携带方便。系统功耗低,价格低,适合家庭使用的空气质量检测系统,能快捷服务健康生活。

一种便携式人体皮肤表面油脂检测装置的研究与设计

针对现有皮肤油脂检测装置设备昂贵、测量速度慢和普遍推广难度大等问题,利用光电检测技术和超低功耗MSP430F5系列单片机设计一种便携式人体皮肤表面油脂检测装置。该装置由油脂采集探头和分析主机两部分组成,油脂采集探头选用双面细磨砂玻璃吸附人体皮肤表面油脂,利用红外光电检测技术进行油脂含量的电信号转换,最后分析主机根据经过实验验证的经验公式计算出所测皮肤表面的油脂含量,还可将测试结果无线传输给移动手机以供数据存储和分享,开发了对应功能的手机APP。实验结果表明,该装置的检测结果能正确反映人体皮肤表面的油脂含量,且测试速度快,移动便携,可用于化妆品功效评价和皮肤类型判断方面的大众推广,具有良好的市场前景。

从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5单克隆抗体识别的抗原表位

目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。

牛边缘无浆体膜表面蛋白5的原核表达及其免疫原性

目的原核表达牛边缘无浆体(Anaplasma marginale)膜表面蛋白5(Membrane surface protein 5,MSP5),并分析其免疫原性。方法 pQE-MSP5/BL21(DE3)阳性重组菌经IPTG诱导表达,表达产物经MagneHisTM蛋白纯化系统纯化后,进行SDS-PAGE分析。将纯化的MSP5蛋白免疫小鼠,以生理盐水免疫作为阴性对照,ELISA法检测血清抗体水平,淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群分类。结果表达的重组MSP5蛋白相对分子质量约为23 000;纯化蛋白的纯度为83.2%,浓度为1.087 mg/ml;纯化的MSP5蛋白可刺激小鼠产生特异性抗体;免疫组小鼠淋巴细胞增殖水平明显高于阴性对照组(P<0.05);免疫组小鼠CD3+、CD4+和CD4+/CD8+比例高于阴性对照组,CD8+比例低于阴性对照组。结论已成功表达并纯化了牛边缘无浆体MSP5,其免疫原性良好,为制备单克隆抗体及建立准确可靠的诊断方法奠定了基础。

MSP430F149单片机与AT24C512的接口与应用

本文介绍了TI公司生产的MSP430F149单片机与大容量串行EEPROM AT24C512之间的接口与应用程序,并详细介绍了AT24C512的特点和工作原理,经实验证明,由AT24C512构成的数据存储系统安全、可靠,有很高的应用价值．