基因干预MST2的施万细胞稳转株建立及其在线粒体膜电位检测的应用

目的构建稳定敲低及过表达哺乳动物Ste20样激酶2(mammalian ste20-like kinase 2, MST2)的大鼠施万细胞株,并初步探讨MST2对线粒体膜电位的调控作用。方法 大鼠施万细胞株(RSC96)分为正常对照组(对照组)、氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation, OGD)模型组、MST2敲低对照组、MST2敲低组、MST2过表达对照组、MST2过表达组。逆转录PCR法扩增大鼠Mst2基因全长序列,构建过表达Mst2基因的慢病毒表达载体重组质粒并鉴定。使用第二代慢病毒包装系统获取Mst2基因敲低及过表达的慢病毒毒液,并分别感染RSC96细胞株,建立基因干预MST2的稳转株。实时荧光定量PCR结合western blot检测基因干预效率,光镜结合S100荧光染色观察稳转株形态学变化。使用OGD模型处理细胞,以线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential, MMP)。结果 经测序分析,成功构建Mst2慢病毒表达载体重组质粒。施万细胞稳转株具有施万细胞的形态特征,并且表达施万细胞特异性标志物S100。在慢病毒感染的施万细胞,MST2表达在mRNA及蛋白水平上均较对照组有稳定且显著的差异,敲低效率超过90%,过表达约为对照组的40倍。稳转株在OGD模型中,对于MST2蛋白的基因干预仍然维持稳定。OGD可显著增加MST2蛋白表达,并降低施万细胞MMP,提示线粒体功能受损;而敲低MST2则显著改善MMP。结论 本研究成功构建了稳定敲低及过表达MST2的大鼠施万细胞株,并且在OGD模型中,敲低MST2可改善线粒体膜电位,提示其对线粒体具有保护作用。

SO_(2)对2型糖尿病大鼠心肌纤维化的影响及与MST1/LATS1的关系

目的 探讨外源性气体信号分子二氧化硫(SO_(2))在2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌纤维化中的作用,并观察其对促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠被随机分为对照组、糖尿病组、糖尿病+SO_(2)组、SO_(2)组,其中糖尿病组和糖尿病+SO_(2)组使用链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射复制糖尿病大鼠模型,当血糖≥16.7 mmol/L时表示糖尿病模型复制成功,随后以高糖高脂饲料进行喂养。对照组和SO_(2)组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠溶液,之后糖尿病+SO_(2)组和SO_(2)组以外源性SO_(2)供体腹腔内注射持续4周。对大鼠心肌组织进行Masson染色,观察心肌胶原纤维形成情况;透射电镜观察心肌超微结构;TUNEL染色观察心肌组织细胞凋亡情况;Western blotting检测心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ、MST1、LATS1、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9蛋白表达。结果 糖尿病组Masson染色阳性面积较对照组大(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组小(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白相对表达量较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病组心肌组织细胞凋亡率较对照组高(P <0.05),糖尿病+SO_(2)组较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。糖尿病+SO_(2)组心肌组织CleavedCaspase-3、Cleaved-Caspase-9、MST1和LATS1蛋白相对表达量较糖尿病组低(P <0.05),对照组与SO_(2)组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SO_(2)调节了2型糖尿病大鼠心肌组织中促凋亡蛋白及MST1/LATS1通路蛋白的表达,并与心肌纤维化的改善呈相关性。

Utilization of Logistical Regression to the Modified Sine-Gordon Model in the MST Experiment

In this paper, a logistical regression statistical analysis (LR) is presented for a set of variables used in experimental measurements in reversed field pinch (RFP) machines, commonly known as “slinky mode” (SM), observed to travel around the torus in Madison Symmetric Torus (MST). The LR analysis is used to utilize the modified Sine-Gordon dynamic equation model to predict with high confidence whether the slinky mode will lock or not lock when compared to the experimentally measured motion of the slinky mode. It is observed that under certain conditions, the slinky mode “locks” at or near the intersection of poloidal and/or toroidal gaps in MST. However, locked mode cease to travel around the torus;while unlocked mode keeps traveling without a change in the energy, making it hard to determine an exact set of conditions to predict locking/unlocking behaviour. The significant key model parameters determined by LR analysis are shown to improve the Sine-Gordon model’s ability to determine the locking/unlocking of magnetohydrodyamic (MHD) modes. The LR analysis of measured variables provides high confidence in anticipating locking versus unlocking of slinky mode proven by relational comparisons between simulations and the experimentally measured motion of the slinky mode in MST.

创意引领社区复兴 布尔诺KUMST创意中心

údolní19号是布尔诺市的地标性建筑,由建筑师Vinzenz Baier于1929年设计建造,当时设有行政办公室和电影院,后来被用作食堂,之后又改为美术学院的教学地。建筑面积4000 m^(2),分2栋楼,共4层。改造后的建筑被称为KUMST创意中心,它将作为一个面向创意产业的新型多功能社区设施。该建筑由南摩拉维亚地区创新中心、布尔诺市政府及理工大学资助,通过催化项目和相关支持活动,为该地区的产业发展提供支持。

基于MST-改进PSO的电-气-热综合能源系统负荷恢复策略

以往故障恢复的研究大多集中在配电网方面且恢复目标仅为单一的负荷恢复量,未考虑资源成本以及能源消耗的环境保护成本等。对此,提出一种多侧协调优化的多目标负荷恢复策略,该方法不仅实现了网络的重构、较高等级负荷的优先恢复,还实现了系统运行成本最优。在系统发生故障后,分两阶段进行恢复:首先,使用最小生成树(minimum spanning tree,MST)对系统结构进行改造,实现系统网络的重构,形成可恢复负荷的最终区域;然后,综合考虑源侧资源购买成本、用户侧切负荷补偿成本以及碳排放环保成本等,构建优化目标函数,使用改进粒子群(particle swarm optimization,PSO)算法对其进行求解,得到最终恢复方案。通过33节点配电网、14节点气网和6节点热网测试系统仿真,验证了该负荷恢复策略的有效性。

基于Mst1通路探讨通络熄风汤治疗糖尿病心肌损伤的机制研究

目的 明确通络熄风汤改善糖尿病心肌损伤大鼠的治疗效果及机制。方法 本实验将大鼠分为正常组、模型组以及治疗组,利用STZ注射法将大鼠统一构建为糖尿病模型。治疗组予以中药配方颗粒通络熄风汤悬浮液灌胃治疗。采用Western blotting方法检测心肌细胞中P62、Mst1、Sirt3蛋白的含量,运用HE染色观察大鼠心肌组织结构变化,以评价通络熄风汤对糖尿病心肌损伤改善效果及机制。结果 与模型组相比,治疗组显著改善糖尿病大鼠的体重及血糖指标,差异有统计学意义(P<0.01)。同时与模型组相比,通络熄风汤治疗后大鼠心肌细胞的排列情况与坏死状态均有明显改善。与模型组相比,治疗组大鼠心肌组织中的Mst1、P62蛋白含量明显减少,Sirt3蛋白含量明显提高,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 通络熄风汤可以对心肌组织细胞自噬水平进行调整,并保护心脏功能,上述机制通过Mst1通路发挥作用。

携带人MST4或人dnMST4转基因的肺癌细胞株构建

目的:利用慢病毒感染分别建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞株。方法:分别以pcDNA3.1-MST4、pcDNA3.1-MST4 T178A质粒为模板,PCR分别扩增MST4、MST4 T178A序列(均为1.251 kb),片段两侧分别添加EcoR I/BamH I和Xba I/BamH I酶切位点,分别In-Fusion克隆至pCDH-RFP和pHEZG中,次日挑选单克隆菌落,提取质粒并进行测序和酶切鉴定;所构建的载体分别命名为pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4。按标准程序进行慢病毒包装,并确认是否成功生产慢病毒;用携带MST4和RFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,用携带dnMST4和GFP基因的慢病毒分别感染人肺癌细胞A549和HCC827,以建立稳定过表达MST4和dnMST4的人肺癌细胞系。应用qRT-PCR和Westernblot检测所建立肺癌细胞系中MST4和dnMST4在RNA层面和蛋白层面的表达水平。结果:测序和酶切鉴定的结果均证实成功构建了pCDH-MST4-RFP和pHEZG-dnMST4,按标准程序生产的携带MST4和RFP基因以及携带dnMST4和GFP基因的慢病毒均能成功感染人肺癌细胞。结论:成功构建稳定过表达MST4或dnMST4的人肺癌细胞株,为进一步研究MST4在肺癌恶性进程中的生物学功能及机制打下了良好基础。

Hippo/MST1对老龄围术期小鼠认知功能的影响及机制

目的探讨MST1激活对老龄围术期神经认知障碍(PND)小鼠学习记忆功能的影响及可能机制。方法将48只老年雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(Sham组)和手术组(PND组),每组24只,胫骨骨折髓内钉固定术制备PND模型,术前6 d连续对小鼠行水迷宫定位航行训练,术后1、5、7、14 d行空间探索实验检测小鼠逃避潜伏期、目标象限停留时间百分比、穿台次数,评估小鼠的记忆能力。水迷宫实验结束后立即将动物处死,Western blot检测脑海马组织P-MST1、MST1的表达。另将40只小鼠随机分为4组(n=10):Sham组、PND组、PND+Vehicle组、PND+XMU-MP-1组。麻醉前半小时和术后每天于相同时间点腹腔注射XMU-MP-12 mg·kg^(-1),连续7 d,PDN+Vehicle组于相同时间点腹腔注射等量溶剂。术后第7天对各组小鼠行水迷宫空间探索实验后立即处死取材,Western blot法检测小鼠海马组织P-MST1、MST1表达,ELISA法检测小鼠海马组织匀浆液TNF-α、IL-1β水平。结果造模结果(水迷宫空间探索实验)显示,与Sham组相比,PND组小鼠在术后1、5、7 d的潜伏期延长,目标象限停留时间百分比缩短,穿台次数减少(P均<0.01);术后14 d基本恢复正常水平(P>0.05),老龄小鼠的游泳速度无变化。Western blot结果显示,与Sham组比较,术后1、5、7、14 d老年PND小鼠海马区P-MST1表达均升高(P均<0.01),术后第7天P-MST1达峰值,术后第14天P-MST1表达较第7天下降。与Sham组比较,MST1总蛋白的表达无变化(P>0.05)。使用XMU-MP-1阻止P-MST1蛋白表达后,水迷宫空间探索结果显示,与PND组比较,PND+XMU-MP-1组小鼠逃避潜伏期缩短,目标象限停留时间百分比延长,穿台次数增加(P均<0.05)。Western blot检测结果显示,与PND组比较,PND+XMU-MP-1组P-MST1的蛋白表达降低(P<0.05)。ELISA实验结果显示,与Sham组相比,PND组小鼠术后第7天海马组织匀浆液中TNF-α、IL-1β水平升高(P均<0.05)。与PND组相比,PND+XMU-MP-1组老龄PND小鼠海马组织TNF-α、IL-1β的表达水平降低(P均<0.05)。结论抑制老年PND小鼠海马中MST1异常活化,可改善其认知障碍,其机制可能与下调海马区炎性因子表达有关。Hippo/MST1激活可能是PND发病的重要机制之一。

基于K-Means + MST算法的疫情期间生活物资科学管理预测——以长春市朝阳区物资发放点为例

在疫情发生的封闭管理期间,针对不同的人群需要不同的管理方法,考虑到人口的规模及地理位置的差异,需要统筹各方因素建立一个行之有效的管理模式,主要考虑的典型问题有:生活物资的发放问题;物资运送路线问题。生活物资发放问题主要考虑物资投放点数量及位置的合理性,物资发放时人员交流接触尽可能少,减少病毒交流扩散的可能性,物资运送路线问题主要考虑没有一种特定合理的运输路线。本文使用高斯插值法对没有统一发放物资时期的感染人数进行拟合,并通过拟合好的函数对后面的感染人数进行预测,针对疫情期间运输路线不合理,没有合理的运输路线问题,通过K-means算法求出合理的物资投放点坐标并利用求出的坐标与MST算法相结合,得出较为合理的配送路线图,可作为以后发生灾害的参考路线以实现经济效益的最大化。

Mst-1多途径调控自噬蛋白Beclin1在心肌缺血再灌注损伤中作用及机制的研究进展

自噬是导致心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI)的主要发病机制之一。自噬蛋白Beclin1在自噬发生过程中具有重要作用。哺乳动物不育系20样激酶1(Mammalian sterile 20 like kinase 1,Mst-1)是调控自噬相关基因表达的关键分子。本文综述Mst-1通过多个途径调控自噬蛋白Beclin1在MIRI中的作用及机制,进一步探索治疗MIRI的靶点。

基于Caspase-3/MST1通路研究山仙颗粒对H22肝癌细胞凋亡的调控作用

目的:建立雄性昆明小鼠H22肝癌移植瘤动物模型,观察山仙颗粒对H22肝癌移植瘤的抑制作用及对Caspase-3、MST1表达的影响,以探讨山仙颗粒对H22移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法:建立雄性昆明小鼠H22肝癌移植瘤动物模型,随机分为5组,即空白组、模型组、山仙颗粒大、中、小剂量组。早晚灌胃给药各一次,连续30天。颈椎脱臼法处死小鼠,剥离瘤组织、称重,计算抑瘤率。SABC免疫组织化学法检测移植瘤组织中Caspase-3及MST1的表达。结果:山仙颗粒大、中、小剂量组对H22肝癌的抑瘤率分别为41. 246%、26. 801%、19. 835%,抑瘤率与用药剂量呈正相关(P <0. 01);山仙颗粒大、中、小剂量组分别与模型组比较Caspase-3、MST1的表达均增强,其表达强度与药物剂量呈正相关(P <0. 01)。结论:山仙颗粒具有抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长的作用,其机制可能与其通过调控Caspase-3/MST1通路而诱导肿瘤细胞凋亡相关。

Mst1对结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响

MST1是死亡受体信号通路Hippo通路的核心成员,其基因表达异常多见于结直肠癌、肝癌、胃癌等肿瘤。为了探讨MST1表达对人结直肠癌SW480细胞增殖与凋亡的影响及其发生机制,采用PolyJet TM介导pEGFP-N1-Mst1及LipofectamineTM2000介导Mst1特异性-siRNA转染至SW480细胞,分别建立高低表达Mst1的细胞模型。对不同分组的细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达进行检测。结果显示,Mst1高表达组细胞增殖抑制、凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著增高,反之,Mst1低表达组细胞增殖加快,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白的表达显著降低。结果提示,Mst1的靶向调控能较好地控制结直肠癌细胞的增殖与凋亡,可作为人结直肠癌防治的新研究靶点。

基于MST算法的离散数据解缠方法研究

在对不规则网格中残差计算的性质进行分析的基础上,提出了用于离散数据的相位解缠的MST-FloodFill方法,该方法利用Delaunay三角网连接离散数据,在每个三角形中计算残差值,通过最小跨越树（MST）算法建立正负残差平衡的最小生成树,利用FloodFill算法绕过枝切线进行积分得到离散数据的解缠相位,从而实现离散数据的相位解缠。利用模拟数据和真实数据进行的实验以及将所得结果与真实结果进行的比对显示,利用这种离散数据解缠方法得出的结果完全正确,而且有较高的解缠效率,从而验证了该方法对于离散数据解缠的正确性和有效性。

基于esp基因和JCV标记的MST方法在五大流域典型水源地中的应用

非点源污染目前已经成为影响水体环境的重要污染。微生物源示踪技术(microbial source tracking,MST)是解决非点源污染的一项新技术,它可以确定污染的宿主来源。肠球菌esp基因和多瘤病毒JCV可以作为检测水体中人源粪便污染的分子标记,其灵敏度和特异性都很高。为分析五大流域水源地是否受到人源粪便的污染,对辽河、海河、淮河、长江和黄河五大流域典型水源地水样进行采集和检测,选取人源粪便特异病原微生物肠球菌的esp基因和多瘤病毒JCV建立了相应的MST分子检测方法。结果表明,五大流域的典型水源地采样点均有可能受到了人源粪便的污染,可为当地相关部门提供技术支持和数据参考。

MST种子活力剂对小麦种子活力及幼苗生长的影响

对百农矮抗58、郑麦366、郑麦7698进行11种剂量的MST种子活力剂拌种处理，分别稀释0（CK）、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50倍，研究不同稀释倍数下MST种子活力剂对小麦种子活力及幼苗生长的影响。结果表明：稀释5~50倍的MST种子活力剂均能提高小麦种子发芽指数、活力指数；拌种后幼苗干重、根系鲜重、根系干重、苗高、根系长度显著增加；以稀释30~35倍的MST种子活力剂拌种提高种子活力效果最显著。研究结果为提高小麦种子活力播前拌种处理技术提供了理论参考和技术支撑。

CD-MST初始阶段模块组建方法比较

具有认知诊断功能的计算机化多阶段测验(CD-MST)是CDA和MST相结合的一种测验方式。由于CD-MST自适应频次较少,初始阶段模块组建会影响整个测验的判准率。借鉴CD-CAT初始项目选取方法,根据CDA和MST自身特点,提出了7种CD-MST初始阶段模块组建方法,分别是随机法、选题策略法、R*矩阵法、CTTID法、CDI法、CTTIDR*法和CDIR*法。采用模拟研究对不同项目质量下7种方法的判准率进行了比较。研究结果表明,当初始阶段结束时,包含R*矩阵的方法判准率显著高于其他方法,尤其是CTTIDR*法;整个测验结束时,CTTIDR*法较其他方法仍然有优势,CDIR*法和R*矩阵法结果较为接近。选题策略法在初始阶段结束时判准率较低,甚至低于随机法,整个测验结束时,判准率同CDIR*法和R*矩阵法持平。4种项目质量对判准率影响较大,HD-HV题库下判准率最高,HD-LV次之,LD-HV较差,LD-LV最差。

MST1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响

目的:探讨MST1(mammalian sterile 20-like kinase 1)基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的影响。方法:构建含有标签蛋白FLAG的MST1质粒pCMV-FLAG-MST1;将构建好的pCMV-FLAG-MST1质粒在脂质体lipofectamine 2000的介导下转染MCF-7细胞,通过Western印迹法分析MST1在MCF-7中的表达情况;分别在转染后12、24、36和48h通过MTT法观察MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入5-溴-2’脱氧尿嘧啶(bromodeoxy uridine,BrdU),通过其掺入比率显示MST1对细胞增殖的影响;转染后36h加入顺铂,作用14h后通过AnnexinⅤ检测其对细胞凋亡的影响。结果:成功构建pCMV-FLAG-MST1质粒;MTT及BrdU检测显示,转染pCMV-FLAG-MST1质粒后MCF-7细胞增殖明显受到抑制;Annexin Ⅴ检测结果提示,高表达MST1后,细胞的凋亡率相对增高。结论:在乳腺癌细胞MCF-7中高表达MST1,不仅可以抑制细胞增殖,还可以促进细胞凋亡。

蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用

目的探讨hSav1(human salvador1)和Mst1(Mammalian STE20-like 1)存在的相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制奠定基础。方法以Mst1cDNA全长构建诱饵蛋白载体pGBKT7-Mst1,并对其自身转录活性进行鉴定,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝文库,挑选单克隆,从而初步筛选出与Mst1相互作用的蛋白。然后构建初步筛选出的蛋白hSav1的载体pCMV-HA-hSav1,与蛋白Mst1的载体pcDNA/4TO-Flag-Mst1共转染HEK293T细胞,利用相应抗体做二者的免疫共沉淀,以验证蛋白hSav1和Mst1之间的相互作用。其次构建pEGFP-hSav1质粒转染HEK293T,利用免疫荧光观察二者在细胞内的定位。结果以Mst1为诱饵蛋白在人胎肝文库筛选到包括hSav1在内的与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,hSav1蛋白可以在FLAG抗体的免疫沉淀物中检测出来,同样在hSav1抗体的免疫沉淀物中也能检测到蛋白Mst1。免疫荧光的结果显示二者荧光在细胞内存在共定位,二者的荧光可充分融合。结论蛋白hSav1与Mst1在哺乳细胞内存在某种相互作用,为进一步研究Mst1的功能及相关机制提供了线索。

基于MST703的TFT-LCD驱动方案研究与设计

针对小尺寸TFT-LCD的驱动电路复杂、功耗大、成本高等问题,提出一种基于单片式视频IC、双重稳压以及π型滤波的新型驱动方案。主芯片采用嵌入式视频驱动芯片MST703,设计了其硬件电路及驱动程序,进而设计融合DC/DC变换器和线性稳压芯片的两级调压电路,有效降低了电压转换损耗、提高了稳压精度,并通过多重滤波电路实现了对电磁干扰的抑制。最后通过CMOS广角摄像头视频信号进行试验验证,能够实现分辨率为800×480的TFT-LCD的低时延、高稳定显示。

哺乳动物不育系20样激酶1基因多态性与结直肠癌的关联分析

目的通过病例-对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中探讨哺乳动物不育系20样激酶1(Mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)基因多态性及其单体型与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险的关联性。方法收集经病理学确诊的结直肠癌患者390例和正常体检人群413例,留取2 ml外周血用于后续基因分型;根据美国国家生物技术信息中心-人类单体型图数据库提供的中国汉族人群遗传多态性数据筛选MST1基因的单核苷酸多态性(SNP);采用Taqman探针法进行基因分型;Logistic回归计算各SNP在共显性、显性、超显性、隐性四种遗传模型下与结直肠癌、直肠癌和结肠癌发病风险之间的关联性。结果共筛选出4个MST1基因SNP,即rs8000、rs2234197、rs2267853、rs6073629,其中SNP rs2234197与直肠癌发病风险有关,相对于GG+AA基因型,AG基因型可降低直肠癌发病风险,OR[95%置信区间(CI)]=0.657(0.442~0.976);SNP rs8000与结肠癌发病风险有关,相对于TT+GT基因型,GG基因型可降低结肠癌发病风险[OR(95%CI)=0.425(0.182~0.992)]。结论MST1基因SNP rs2234197 AG基因型和SNP rs8000 GG基因型可能分别是直肠癌和结肠癌的保护性因素。