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MSTN基因编辑湖羊胫腓肌的转录组分析
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作者 李隐侠 刘伟佳 +8 位作者 张晨俭 舒嘉傲 桂红兵 王慧利 孟春花 张俊 张建丽 钱勇 曹少先 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期342-350,共9页
[目的]本文旨在探索肌肉抑制素基因(myostatin,MSTN)调控肌肉生长发育的分子机制。[方法]以3月龄MSTN基因编辑湖羊(试验组)和野生型湖羊(对照组)胫腓肌为对象,采用PCR和Western blot方法验证MSTN编辑湖羊编辑形式,在此基础上开展转录组... [目的]本文旨在探索肌肉抑制素基因(myostatin,MSTN)调控肌肉生长发育的分子机制。[方法]以3月龄MSTN基因编辑湖羊(试验组)和野生型湖羊(对照组)胫腓肌为对象,采用PCR和Western blot方法验证MSTN编辑湖羊编辑形式,在此基础上开展转录组测序和分析,并用real-time PCR方法对差异表达基因进行结果验证。[结果]对照组和试验组共有149个差异表达基因,其中65个基因上调,84个基因下调,GO注释和KEGG富集分析表明,差异表达基因显著富集在氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用、FOXO和AMPK信号通路,表明MSTN基因可能通过以上信号通路参与湖羊生长发育调控。[结论]MSTN基因编辑湖羊可能通过FOXO和AMPK、氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用等与动物代谢相关的信号通路调控其生长发育。 展开更多
关键词 湖羊 mstn基因 CRISPR/Cas9 转录组测序
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花斑裸鲤MSTN-1基因克隆及表达特性分析
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作者 贺彩霞 李长忠 +8 位作者 保长虹 王丽楠 严青春 金文杰 赵娟 王国杰 简生龙 王振吉 陈艳霞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第1期228-238,共11页
花斑裸鲤是黄河上游重要的冷水性土著鱼类,其生长、发育缓慢,性成熟又较晚,故多年来其种群一直呈下降趋势。MSTN(肌肉生长抑制素)是一种对肌肉生长具有负调控作用的因子,通过克隆花斑裸鲤MSTN-1基因并检测其表达特性,为花斑裸鲤生长缓... 花斑裸鲤是黄河上游重要的冷水性土著鱼类,其生长、发育缓慢,性成熟又较晚,故多年来其种群一直呈下降趋势。MSTN(肌肉生长抑制素)是一种对肌肉生长具有负调控作用的因子,通过克隆花斑裸鲤MSTN-1基因并检测其表达特性,为花斑裸鲤生长缓慢的分子调控机理提供基础资料。采用PCR、5′-RACE和3′-RACE法获得花斑裸鲤MSTN-1基因全长cDNA序列,采用qPCR检测MSTN-1基因在花斑裸鲤不同组织的表达特征和在不同鲤科鱼类肌肉组织中的差异性表达。花斑裸鲤MSTN-1基因的cDNA序列全长为2190 bp,其中ORF长1128 bp,5′UTR长96 bp,3′UTR长966 bp,共编码375个氨基酸。该蛋白是带有一个信号肽、无跨膜结构的不稳定亲水性分泌蛋白,主要分布在细胞核、线粒体和细胞质中。MSTN-1蛋白质二级结构以无规卷曲为主,存在2个TGF-β结构域:即TGF-β前肽区域(37—268 aa)和TGF-β功能区域(281—375 aa),有1个蛋白酶水解位点RIRR和9个位于TGF-β功能区域保守的半胱氨酸残基。氨基酸序列同源性分析表明,花斑裸鲤MSTN-1氨基酸序列与其他鲤科鱼类MSTN-1具有较高的相似性,而与禽类和哺乳动物的相似性较低。系统发育分析显示,花斑裸鲤MSTN-1与其他鲤科鱼类聚于同一进化支。qPCR检测结果表明,MSTN-1在花斑裸鲤的脑、肌肉、鳃、心、肝脏和肾脏组织中均有表达,但在脑和肌肉组织中表达量较高。该基因在不同鲤科鱼类肌肉组织中均有表达,在青海湖裸鲤肌肉组织中的表达量最高,其次在花斑裸鲤和黄河鲤鱼肌肉组织中。通过克隆获得花斑裸鲤MSTN-1基因cDNA序列,进行生物信息学分析和qPCR检测,MSTN-1在这几种土著鱼类肌肉组织中的特征性表达差异有助于进一步了解高原鱼类生长缓慢的分子机理。 展开更多
关键词 花斑裸鲤 肌肉生长抑素(mstn) 基因克隆 RACE 基因表达
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牙鲆mstn基因SNPs位点多态性与生长性状的关联分析
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作者 李兵部 王桂兴 +9 位作者 张晓彦 刘玉峰 何忠伟 曹巍 任建功 任玉芹 张祎桐 伞利择 王玉芬 侯吉伦 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期119-128,共10页
为研究牙鲆(Paralichthys olivaceus)肌肉生长抑制基因(mstn)多态性,开发其分子辅助育种新标记,采用重测序方法对120尾牙鲆(3个双克隆杂交家系:60尾;3个雌核发育家系:60尾)的mstn基因进行单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism... 为研究牙鲆(Paralichthys olivaceus)肌肉生长抑制基因(mstn)多态性,开发其分子辅助育种新标记,采用重测序方法对120尾牙鲆(3个双克隆杂交家系:60尾;3个雌核发育家系:60尾)的mstn基因进行单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)位点筛选,并对不同基因型个体的生长性状进行多重比较及SNP标记验证。结果显示,共检测到7个SNPs位点,均为颠换型突变;外显子区3个(Exonl 1:G2063A;Exonl 3:C3883T,C4009A),为同义突变;内含子区3个(Intron 1:A2444T;Intron 2:T3816C,A3832C);3'端非编码区1个(3'UTR:C4564A)。SNPs与生长性状关联分析结果表明,A3832C和C4564A标记位点与牙鲆体质量、体长、体高等生长性状显著相关(P<0.05),其中A3832C位点AA基因型和C4564A位点AC基因型在生长上表现出优势,A3832C位点CC和C4564A位点AA、CC基因型在生长上表现出劣势,其他5个SNPs位点对牙鲆生长性状影响不显著(P>0.05)。将A3832C和C4564A标记位点在牙鲆生长快速群体(F:60尾)和生长缓慢群体(S:60尾)中验证,验证结果与多重比对结果一致,表明2个SNPs位点具有较高的稳定性。综上所述,研究筛选出了牙鲆mstn基因中与生长性状显著相关的A3832C和C4564A两个标记位点,为牙鲆分子辅助育种提供了理论参考。 展开更多
关键词 牙鲆 肌肉生长抑制基因 单核苷酸多态性 生长性状
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Split-GFP双分子荧光互补技术在鸡MSTN基因RNAi检测中的应用
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作者 杨磊 朱正 +4 位作者 王博永 梁谦学 吴文德 李恭贺 郑喜邦 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2444-2453,共10页
【目的】以Split-GFP双荧光互补技术检测鸡肌肉生长抑制素基因(MSTN)RNA干涉(RNAi)效果,并与其他常用检测方法比较,以验证Split-GFP双分子荧光互补技术在RNAi效果评估中的有效性和可行性。【方法】将合成的3个shRNA慢病毒载体(shRNA-a、... 【目的】以Split-GFP双荧光互补技术检测鸡肌肉生长抑制素基因(MSTN)RNA干涉(RNAi)效果,并与其他常用检测方法比较,以验证Split-GFP双分子荧光互补技术在RNAi效果评估中的有效性和可行性。【方法】将合成的3个shRNA慢病毒载体(shRNA-a、shRNA-b和shRNA-c)分别转染稳定表达GFP11-MSTN融合蛋白的HEK 293TGFP11-MSTN细胞,经实时荧光定量PCR筛选出最佳shRNA慢病毒载体并包装为慢病毒,然后以慢病毒感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞,采用潮霉素B筛选mCherry阳性(mCherry+)细胞,再以实时荧光定量PCR和Western blotting检测RNAi效果;得到的mCherry+细胞再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒,通过荧光显微镜观察和流式细胞术评估RNAi效果。【结果】3个shRNA慢病毒载体对MSTN基因表达均有极显著的抑制作用(P<0.01,下同),其中又以Anti-MSTN shRNA-a慢病毒载体的干涉效果最佳。Anti-MSTN shRNA-a慢病毒感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞的最适MOI=3,该条件下MSTN基因相对表达量及GFP11-MSTN融合蛋白表达量均受到抑制;得到的mCherry+细胞再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒,荧光显微镜观察和流式细胞术检测结果表明,GFP+细胞数量明显减少,GFP+细胞百分率由31.1%降至11.5%。Split-GFP检测结果与实时荧光定量PCR及Western blotting检测结果相符,说明Anti-MSTN shRNA-a慢病毒能有效抑制GFP11-MSTN融合蛋白表达,发挥了RNAi作用。【结论】以Anti-MSTN shRNA-a慢病毒对MSTN基因的干涉效果最佳,其感染HEK 293TGFP11-MSTN细胞后MSTN基因表达极显著下调,且再转染pcDNA3.1(+)-GFP1-10质粒后细胞中的GFP+细胞百分率明显下降,与实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果相符,证实Slipt-GFP双分子荧光互补技术是一种可靠的可视化RNAi检测方法。 展开更多
关键词 肌肉生长抑制素(mstn) RNA干涉(RNAi) shRNA 慢病毒 Split-GFP双分子荧光互补技术
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绵羊MSTN基因多态性及其与肉质性状的关联分析
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作者 陶毛孩 孟科 +4 位作者 荣轩 强浩 聂玮 郭晨浩 冯登侦 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2766-2776,共11页
【目的】探讨绵羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性及其对绵羊肉质性状的影响,以期为绵羊肉用性能的选育提供有效的遗传分子标记。【方法】利用液相捕获测序技术获取MSTN基因在杜泊羊(D)、滩羊(T)和小尾寒羊(XH)共91只绵羊中... 【目的】探讨绵羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性及其对绵羊肉质性状的影响,以期为绵羊肉用性能的选育提供有效的遗传分子标记。【方法】利用液相捕获测序技术获取MSTN基因在杜泊羊(D)、滩羊(T)和小尾寒羊(XH)共91只绵羊中的变异位点,并筛选出品种间差异显著的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点。针对筛选出的位点,利用飞行质谱检测技术对滩羊、小尾寒羊、杜泊羊和杜滩寒三元杂交羊(DTH)共30只绵羊进行基因分型,并与肉质性状进行关联分析。【结果】试验筛选出的MSTN基因rs129059715位点在4个绵羊群体中共检测到3种基因型,分别为15个CC基因型、9个CA基因型及6个AA基因型,C为优势等位基因(除杜滩寒三元杂交羊外)。在杜泊羊、滩羊和杜滩寒三元杂交羊群体中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),在小尾寒羊群体中处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P<0.05);在杜泊羊和小尾寒羊群体中均处于低度多态(PIC<0.25);在滩羊和杜滩寒三元杂交羊群体中均处于中度多态(0.25<PIC<0.50)。关联分析发现,rs129059715位点CA基因型个体背膘厚和反亚油酸含量均极显著高于CC基因型(P<0.01),净肉率、肾脏重及脂肪、十一碳酸、十三碳酸和十五碳酸含量均显著高于CC基因型(P<0.05);CC基因型个体肌纤维直径显著高于AA基因型(P<0.05),pH显著高于CA基因型(P<0.05);其他性状各基因型间均无显著差异(P>0.05)。【结论】试验经液相捕获测序技术获得MSTN基因具有差异显著的rs129059715位点,其对绵羊的屠宰性能、肉品质、脂肪酸含量均有显著影响,rs129059715位点可作为产肉性能和肉品质的潜在候选标记。 展开更多
关键词 绵羊 mstn基因 多态性 屠宰性能 肉品质
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欧拉藏绵羊MSTN基因单碱基编辑体系的建立
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作者 赵若琳 张成图 +2 位作者 张迎冰 陈永忠 苏建民 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期274-277,283,共5页
肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因突变时会导致肌纤维增粗,肌肉细胞增多,表现出双肌性状。为敲除欧拉藏绵羊MSTN基因以获得产肉性状更优的欧拉藏绵羊,利用胞嘧啶碱基编辑系统(CBE)在欧拉藏绵羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子。在M... 肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因突变时会导致肌纤维增粗,肌肉细胞增多,表现出双肌性状。为敲除欧拉藏绵羊MSTN基因以获得产肉性状更优的欧拉藏绵羊,利用胞嘧啶碱基编辑系统(CBE)在欧拉藏绵羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子。在MSTN基因3个外显子区域上各设计1条sgRNA,分别连接至pEF1a-BE4max-NG-mU6-gRNA-blast质粒并转染欧拉藏绵羊耳成纤维细胞,通过Sanger测序和T-A克隆检测,成功筛选出1条靶向外显子I的符合预期的sgRNA,编辑效率20%。本研究成功通过单碱基编辑技术在欧拉藏绵羊耳成纤维细胞MSTN基因编码区进行定点编辑,为通过分子育种培育产肉性状更佳的欧拉藏绵羊新品种奠定基础。 展开更多
关键词 欧拉藏绵羊 单碱基编辑 BE4max mstn
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8周有氧和日粮限制对肥胖大鼠减重及比目鱼肌MSTN的影响
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作者 谢玉亭 王兆馨 刘秀娟 《湖北体育科技》 2023年第7期580-583,653,共5页
目的探讨有氧运动和日粮限制对肥胖大鼠减重效果及对比目鱼肌MSTN的影响,为运动和日粮限制对肥胖机体减重及骨骼肌的影响提供理论依据。方法高脂喂养建立肥胖模型后分为安静肥胖组、有氧运动组和日粮限制组,记录大鼠体重、肌肉质量,HE... 目的探讨有氧运动和日粮限制对肥胖大鼠减重效果及对比目鱼肌MSTN的影响,为运动和日粮限制对肥胖机体减重及骨骼肌的影响提供理论依据。方法高脂喂养建立肥胖模型后分为安静肥胖组、有氧运动组和日粮限制组,记录大鼠体重、肌肉质量,HE染色观察比目鱼肌横截面积,试剂盒测定大鼠血清血脂4项、NEFA、MSTN、FST水平,WB测定比目鱼肌MSTN和FST蛋白表达。结果有氧运动和饮食限制均可有效降低肥胖大鼠的体重,有氧运动可显著增加比目鱼肌横截面积、血清HDL和FST水平、比目鱼肌FST蛋白表达;显著降低血清MSTN水平,比目鱼肌MSTN蛋白表达。日粮限制可显著降低肌肉质量、血清LDL和FST水平;显著增加比目鱼肌横截面积和质量指数。结论有氧运动和日粮限制均可显著降低肥胖大鼠的体重,有氧运动可通过增加FST降低MSTN促进比目鱼肌横截面积增加,日粮限制对MSTN无影响。 展开更多
关键词 肥胖有氧运动 日粮限制 骨骼肌 mstn
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关岭牛MSTN基因3'-UTR与bta-miR-27b的靶向验证
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作者 卢贤君 许厚强 +1 位作者 许家利 阮涌 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1235-1243,共9页
【目的】明确关岭牛bta-miR-27b与肌肉生长抑制素基因(MSTN)的结合位点及靶向调控关系,为通过调控miRNA改良关岭牛产肉量提供理论依据,也为贵州地方黄牛分子遗传改良工作提供新的切入点。【方法】通过TargetScan预测牛MSTN基因3'端... 【目的】明确关岭牛bta-miR-27b与肌肉生长抑制素基因(MSTN)的结合位点及靶向调控关系,为通过调控miRNA改良关岭牛产肉量提供理论依据,也为贵州地方黄牛分子遗传改良工作提供新的切入点。【方法】通过TargetScan预测牛MSTN基因3'端非翻译区(3'-UTR)的潜在miRNA结合区域及互作miRNA,对比关岭牛与不同关岭牛杂交品种的生理表型及MSTN基因和3'-UTR端miRNA表达差异,并分析bta-miR-27b在不同关岭牛杂交群体中的靶位点特异性。将MSTN基因3'-UTR序列野生型(WT)和3'-UTR序列突变型(MUT)分别克隆至pMIR-REPORT Luciferase(H306)载体构建重组双荧光素酶报告基因载体,与bta-miR-27b共转染293T细胞以验证bta-miR-27b与MSTN基因的作用关系,并利用实时荧光定量PCR验证bta-miR-27b对MSTN基因表达的影响。【结果】在牛MSTN基因3'-UTR端发现7个miRNA结合位点;关岭牛各系杂交品种的3个miRNA(bta-miR-27a-3p、bta-miR-27b和bta-miR-128)相对表达量均极显著高于关岭牛(P<0.01,下同),MSTN基因相对表达量极显著低于关岭牛,体质量、体高、体斜长、胸围等生长指标却明显优于关岭牛。关岭牛及其杂交牛MSTN基因3'-UTR端的bta-miR-27b结合区域均无突变、无缺失;MSTN-3'-UTR(WT)与bta-miR-27bmimics共转染293T细胞后其相对荧光值下降53.80%,极显著低于MSTN-3'-UTR(MUT)+bta-miR-27bmimics共转染;转染bta-miR-27b mimics后,bta-miR-27b在关岭牛原代成肌细胞株(N2)中成功超表达,而MSTN基因相对表达量呈极显著下调趋势,表明bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。【结论】bta-miR-27b与MSTN基因的结合区域位于3'-UTR端第62~69位碱基处,且靶位点保守性较高。bta-miR-27b对MSTN基因有很强的靶向调控作用,表现为bta-miR-27b能抑制MSTN基因表达。 展开更多
关键词 关岭牛 mstn基因 3'端非翻译区(3'-UTR) bta-miR-27b 双荧光靶向验证
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Sequence and Bioinformatics Analysis on MSTN Gene of the Hybrid Grouper Derived from(Epinephelus fuscoguttatus×Epinephelus polyphekadion)
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作者 Liu CAO Pan CEHN +2 位作者 Youhua ZHANG Xiaomei FU Hai Huang 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2023年第3期46-49,54,共5页
[Objectives]This study aimed to investigate the sequence structure and function of Myostatin(MSTN)gene in the hybrid grouper(Epinephelus fuscoguttatus,♀×Epinephelus polyphekadion,♂).[Methods]Genetic DNA samples... [Objectives]This study aimed to investigate the sequence structure and function of Myostatin(MSTN)gene in the hybrid grouper(Epinephelus fuscoguttatus,♀×Epinephelus polyphekadion,♂).[Methods]Genetic DNA samples were extracted from the caudal fins of the hybrid grouper and its parents to amplify their MSTN genes.Then,MSTN gene sequences were analyzed using bioinformatics tools to predict their protein structures and functions.[Results]The hybrid grouper and its parents shared the same MSTN gene structure,consisting of three exons and two introns.Nucleotide sequence of the gene could be translated into 376 amino acids,including an N-terminal signal peptide,a proteolytic processing site(RXXR motif),and nine conserved cysteine residues at C-terminal,which were the typical features of transforming growth factor beta(TGF-β)superfamily proteins.Alignment of protein sequence showed that MSTN was highly conserved between the hybrid grouper and its parents.Especially,exon 3,an important functional domain,exhibited a sequence similarity of 100%among them.In addition,four variable amino acid residues were detected in exon 2 at positions 141,153,185 and 186 in the hybrid grouper,but they did not affect the secondary structure of the protein.[Conclusion]These results will provide molecular information for future investigation on the growth and heterosis of hybrid grouper species,and on the roles of MSTN gene in regulating the growth traits of the hybrid grouper. 展开更多
关键词 GROUPER mstn gene Growth traits Gene structure
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二甲双胍通过调控MSTN抑制小鼠骨骼肌细胞C2C12分化
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作者 郭洋 张露露 牛文彦 《天津医科大学学报》 2023年第1期41-45,共5页
目的:探讨二甲双胍对小鼠骨骼肌细胞C2C12分化的影响及其分子机制。方法:将小鼠骨骼肌C2C12细胞系分为对照组和二甲双胍(5 mmol/L)组,用含5%马血清分化培养基诱导C2C12细胞分化,观察肌管形成情况。qPCR检测肌球蛋白重链(MyHC)和肌肉生... 目的:探讨二甲双胍对小鼠骨骼肌细胞C2C12分化的影响及其分子机制。方法:将小鼠骨骼肌C2C12细胞系分为对照组和二甲双胍(5 mmol/L)组,用含5%马血清分化培养基诱导C2C12细胞分化,观察肌管形成情况。qPCR检测肌球蛋白重链(MyHC)和肌肉生长抑制素(MSTN)mRNA水平。Western印迹检测My HC、Ⅰ型肌球蛋白重链(MyHCⅠ)、Ⅱa型肌球蛋白重链(MyHCⅡa)、Ⅱb型肌球蛋白重链(MyHCⅡb)、Ⅱx型肌球蛋白重链(MyHCⅡx)和MSTN蛋白表达。应用siRNA下调MSTN的表达,并将小鼠骨骼肌C2C12细胞系分为MSTN敲低阴性对照组(siNC组),MSTN敲低阴性对照+二甲双胍组(siNC+metformin组),MSTN敲低组(siMSTN组),MSTN敲低+二甲双胍组(siMSTN+metformin组),检测二甲双胍是否通过升高MSTN抑制C2C12细胞分化。结果:显微镜观察显示,与对照组相比,二甲双胍组肌管数量减少、肌管直径较小。qPCR结果显示,与对照组相比,二甲双胍组My HC mRNA水平降低(t=29.47,P<0.000 1),MSTN mRNA水平增加(t=14.14,P<0.001)。Western印迹结果显示,与对照组相比,二甲双胍组My HC蛋白水平降低(t=12.57,P<0.001),MSTN蛋白水平升高(t=6.555,P<0.01),MyHCⅠ、MyHCⅡa、MyHCⅡb和MyHCⅡx蛋白水平降低(t=9.288、6.140、8.348、14.75,均P<0.01)。应用siRNA下调MSTN的表达,与siNC组相比,siNC+metformin组My HC蛋白水平显著降低(P<0.001),与siNC+metformin组相比,siMSTN+metformin组MyHC蛋白水平升高(F=12.44,P<0.001)。结论:二甲双胍通过调控MSTN,抑制小鼠骨骼肌细胞C2C12分化。 展开更多
关键词 二甲双胍 骨骼肌 分化 mstn
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贵州杂交黄牛MSTN基因cDNA克隆、生物信息学及多态性分析
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作者 王可人 游绍航 +1 位作者 主性 田兴贵 《家畜生态学报》 北大核心 2023年第4期13-21,共9页
为比较贵州杂交黄牛肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)性质、结构和多态性与本地黄牛的差别,该研究先通过RT-PCR克隆MSTN基因cDNA并进行生物信息学分析,再通过PCR-SSCP结合直接测序法筛查贵州本地黄牛和杂交黄牛MSTN基因外显子多态性。结... 为比较贵州杂交黄牛肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)性质、结构和多态性与本地黄牛的差别,该研究先通过RT-PCR克隆MSTN基因cDNA并进行生物信息学分析,再通过PCR-SSCP结合直接测序法筛查贵州本地黄牛和杂交黄牛MSTN基因外显子多态性。结果在贵州杂交黄牛MSTN基因CDS区序列发现4个突变位点,其中3个为错义突变:76 bp处G/A替换,引起天冬酰胺变为天冬氨酸;79 bp处G/A替换,引起丝氨酸变为甘氨酸;1066 bp处G/A替换,引起谷氨酸变为赖氨酸。267 bp处G/A替换与525 bp处A/G替换,为同义突变。MSTN蛋白基本理化性质和结构与普通牛基本一致,但有细微的差别;通过基因同源性和系统进化树,结合motif、蛋白保守域和结构域分析,可知MSTN基因在哺乳动物中高度保守,但也存在遗传多样性。贵州本地黄牛外显子发现3个SNP位点,分别为g.6279107 G>C、g.6281238 T>C和g.6283933 A>C,贵州杂交黄牛中未发现多态位点。单倍型分析共发现6种单倍型和14种双倍型,双倍型H3H5频率最高,且杂交牛的双倍型均为H3H5,之后可一步将此与生长性状进行关联分析研究。 展开更多
关键词 贵州杂交黄牛 肌肉生长抑制素基因 基因克隆 生物信息学 多态位点
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吉富罗非鱼MSTN基因结构及其多态性与生长性状的相关性 被引量:30
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作者 唐永凯 李建林 +2 位作者 俞菊华 陈雪峰 李红霞 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-51,共8页
通过PCR和基因组步移法,从吉富罗非鱼DNA中扩增出肌细胞生长抑制素(MSTN)基因及其5′调控区。该序列全长2413bp,含有3个外显子,2个内含子。5′调控区462bp,外显子Ⅰ379bp,外显子Ⅱ371bp,部分外显子Ⅲ145bp,内含子Ⅰ305bp,内含子Ⅱ751bp... 通过PCR和基因组步移法,从吉富罗非鱼DNA中扩增出肌细胞生长抑制素(MSTN)基因及其5′调控区。该序列全长2413bp,含有3个外显子,2个内含子。5′调控区462bp,外显子Ⅰ379bp,外显子Ⅱ371bp,部分外显子Ⅲ145bp,内含子Ⅰ305bp,内含子Ⅱ751bp,编码区共编码298个氨基酸。5′调控区含有与肌肉特异性基因转录密切相关的转录调控元件E-box以及其他一些转录调控元件,如TATAbox,OCT1,AP1,AP4。通过随机测序法寻找SNPs(Signal nucleotide poly morphisms),获得了3个SNPs,但在群体筛选中,只有内含子Ⅱ内的1个SNPs表现多态性。同时测量了96尾(45♂,51♀)吉富罗非鱼的体质量、体长、体高、体厚,并将这些数据与MSTN基因的SNPs多态性进行相关性分析,研究发现MSTN基因内含子Ⅱ的728nt处G/T多态与吉富罗非鱼体型(体厚/体长、体高/体长)存在显著相关(P<0.05)。这些研究结果表明,MSTN基因的SNPs可作为吉富罗非鱼育种的候选分子标记。 展开更多
关键词 吉富罗非鱼 mstn基因 SNPS 生长性状
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MSTN基因内含子2多态性与山羊体重性状相关研究 被引量:17
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作者 刘铮铸 李祥龙 +2 位作者 巩元芳 靳晓敏 冯敏山 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期745-748,共4页
以波尔山羊以及波尔山羊与唐山奶山羊的杂交后代共计102只山羊为材料,根据山羊MSTN基因序列(GenBank登录号:DQ167575)设计一对引物,用PCR-RFLP法进行多态性分析。对该片段测序发现共有2处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重进行分... 以波尔山羊以及波尔山羊与唐山奶山羊的杂交后代共计102只山羊为材料,根据山羊MSTN基因序列(GenBank登录号:DQ167575)设计一对引物,用PCR-RFLP法进行多态性分析。对该片段测序发现共有2处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重进行分析表明:AA型个体的断乳重显著高于BB型和AB型(P<0 05)。CC型个体的初生重显著高于CD型(P<0 05)。由此初步推断MSTN基因可能是影响山羊体重性状的主基因或与主基因相连锁,可以用该位点对山羊体重性状进行标记辅助选择。 展开更多
关键词 山羊 mstn 遗传多态性 RFLP 体重
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牦牛MSTN基因内含子2多态性及与生长性状的相关性 被引量:21
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作者 梁春年 阎萍 +6 位作者 刑成峰 裴杰 郭宪 包鹏甲 丁学智 褚敏 朱新书 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期285-289,共5页
采用PCR-SSCP技术对大通牦牛、甘南牦牛和天祝白牦牛(共277头)肌肉抑制素基因(MSTN)内含子2的部分序列进行了多态性研究,分析该基因与牦牛生长性状的相关性。结果表明,牦牛MSTN基因内含子2存在2个等位基因和3种基因型。在该基因座上,甘... 采用PCR-SSCP技术对大通牦牛、甘南牦牛和天祝白牦牛(共277头)肌肉抑制素基因(MSTN)内含子2的部分序列进行了多态性研究,分析该基因与牦牛生长性状的相关性。结果表明,牦牛MSTN基因内含子2存在2个等位基因和3种基因型。在该基因座上,甘南牦牛、天祝白牦牛呈Hardy-Weinberg平衡状态,大通牦牛呈不平衡状态。3种基因型与牦牛部分生长性状的最小二乘法分析表明,MSTN基因内含子2对成年牦牛胸围、体质量、胸围指数、体长指数和肉用指数均显著相关(P<0.05),而不同基因型的牦牛体高、管围、体长和管围指数差异不显著。初步推断牦牛MSTN基因内含子2可作为牦牛标记辅助选择的遗传标记之一。 展开更多
关键词 牦牛 mstn基因 多态性 遗传标记 PCR-SSCP
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黄颡鱼MSTN基因多态性及其与生长性状的相关性分析 被引量:20
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作者 朱媛媛 梁宏伟 +4 位作者 李忠 罗相忠 李林 张志伟 邹桂伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期72-78,共7页
肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)属于转化生长因子β家族,其主要功能是负向调控肌肉的生长发育。采用PCR-SSCP技术对黄颡鱼MSTN基因进行单核苷酸多态性检测和分型,并与其生长性状进行关联分析。结果表明,在第一内含子部分检测到1个... 肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)属于转化生长因子β家族,其主要功能是负向调控肌肉的生长发育。采用PCR-SSCP技术对黄颡鱼MSTN基因进行单核苷酸多态性检测和分型,并与其生长性状进行关联分析。结果表明,在第一内含子部分检测到1个缺失位点和2个突变位点(T1003del、G1022A和T1063G),基因型分别为:AA、AB、CC、CD和DD;在第三外显子部分检测到1个突变位点(T132C),基因型分别为:EE和EF。关联性分析表明,AA基因型个体的全长、体长、体高、体厚、头长和体重显著大于CD和DD基因型(P<0.05),AA基因型雌性个体的全长、体长、体高、体厚、头长、尾柄高、尾柄厚和体重也显著大于DD基因型(P<0.05)。由此推断,AA基因型是影响雌性黄颡鱼生长性状的有利基因型,DD基因型是影响雌性黄颡鱼生长性状的不利基因型,可以尝试利用这两个位点对雌性黄颡鱼进行标记辅助选育。 展开更多
关键词 黄颡鱼 mstn 突变位点 多态性 生长性状
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干扰MSTN对绵羊成肌细胞增殖分化及相关基因表达的影响 被引量:15
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作者 王红娜 孙洪新 +3 位作者 张英杰 刘月琴 谷振慧 史秀芬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期46-54,共9页
旨在探讨MSTN基因对绵羊成肌细胞增殖和分化的作用及相关机制,进一步揭示MSTN在绵羊成肌细胞中的生物学功能。本研究利用重组腺病毒介导shRNA干扰绵羊成肌细胞内源性MSTN基因表达,通过CCK-8法检测成肌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞... 旨在探讨MSTN基因对绵羊成肌细胞增殖和分化的作用及相关机制,进一步揭示MSTN在绵羊成肌细胞中的生物学功能。本研究利用重组腺病毒介导shRNA干扰绵羊成肌细胞内源性MSTN基因表达,通过CCK-8法检测成肌细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期变化,qRT-PCR检测p21基因表达。成肌细胞诱导分化后利用免疫细胞化学技术检测肌管的形成情况,统计细胞融合率,qRT-PCR检测诱导48、72、96h后MyoD、MyoG、Myf5、Myf6和HACD1基因的表达量变化。结果发现,干扰MSTN后成肌细胞的增殖受到抑制,细胞周期停滞在G0/G1期,并且p21的表达呈上升趋势。在对成肌细胞分化作用的研究中,发现干扰组与阴性对照组相比,诱导48h4个生肌调节因子的表达量均呈下降趋势,MyoG基因表达显著下调(P<0.05);诱导72h干扰组成肌细胞融合率极显著高于阴性对照组(P<0.01),Myf5和Myf6基因表达量极显著降低(P<0.01),MyoD基因表达量升高不显著(P>0.05),MyoG基因表达量极显著增加(P<0.01),诱导96h,Myf5基因表达量显著降低(P<0.05),MyoD基因表达量降低不显著(P>0.05),MyoG基因表达量极显著降低(P<0.01),Myf6基因表达量升高不显著(P>0.05)。另外诱导72h,HACD1基因的表达量在干扰组中显著高于阴性对照组(P<0.05),诱导48和96h无显著变化。研究表明,干扰MSTN表达对成肌细胞的增殖有抑制作用,对分化有促进作用,HACD1基因与成肌细胞融合相关。 展开更多
关键词 绵羊 mstn 成肌细胞 增殖 分化
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11个绵羊品种MSTN基因非翻译区的变异 被引量:14
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作者 孟详人 郭军 +6 位作者 赵倩君 马月辉 关伟军 刘娣 狄冉 乔海云 那日苏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1585-1590,共6页
利用PCR-RFLP技术对特克塞尔羊、夏洛莱羊、小尾寒羊、蒙古羊、乌珠穆沁羊、阿勒泰羊、呼伦贝尔羊、塔什库尔干羊、多浪羊、湖羊和岗巴羊11个品种的345个个体的肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因非翻译区(UTR)的变异进行了多态性分析... 利用PCR-RFLP技术对特克塞尔羊、夏洛莱羊、小尾寒羊、蒙古羊、乌珠穆沁羊、阿勒泰羊、呼伦贝尔羊、塔什库尔干羊、多浪羊、湖羊和岗巴羊11个品种的345个个体的肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因非翻译区(UTR)的变异进行了多态性分析。结果表明大小为271bp和1003bp的扩增片段经限制性内切酶MboⅡ和BsaⅠ酶切后表现多态,经卡方检验所有品种在该基因座位均处于平衡状态(P>0.05),3种基因型在11个绵羊品种中的分布差异极显著(P<0.01)。通过限制性内切酶HpyCH4Ⅳ酶切实验,证明我国9个地方绵羊品种不存在特克塞尔绵羊中发现的导致肌肉发达的SNP位点,并在3′UTR区发现了个别碱基突变位点能够形成miRNA作用的靶基序,测序表明3′UTR区的突变频率较高。 展开更多
关键词 mstn UTR PCR—RFLP MicroRNA 多态性
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草鱼MSTN-1基因多态性及与早期生长性状和肌肉成分关联分析 被引量:14
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作者 张猛 陈勇 +5 位作者 沈玉帮 傅建军 徐晓雁 孙俊龙 胡默俨 李家乐 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期618-625,共8页
为研究草鱼MSTN-1基因多态性及与早期生长性状和肌肉成分的相关性,本研究扩增出全长为3824 bp的草鱼MSTN-1基因,用长江选育草鱼群体对MSTN-1基因多态性进行筛选和验证。结果共发现3个多态性位点(Locus 1:C1799T,野生型EE/突变型EF;Locus... 为研究草鱼MSTN-1基因多态性及与早期生长性状和肌肉成分的相关性,本研究扩增出全长为3824 bp的草鱼MSTN-1基因,用长江选育草鱼群体对MSTN-1基因多态性进行筛选和验证。结果共发现3个多态性位点(Locus 1:C1799T,野生型EE/突变型EF;Locus2:C1842T,野生型HH/突变型HI;Locus 3:TGAAGCGCTGGTTCT/2585-,野生型BB/缺失型BD)。利用一般线性模型分析3个位点及其组合型(剔除个体数少于3的组合)与生长性状和肌肉成分的相关性,发现2个位点对幼鱼生长性状表型差异有显著影响,但3个位点对肌肉成分差异均无显著影响。多重比较发现,单倍型HI突变组的体长和体质量显著高于HH野生组,BD突变组的体长和体质量显著性低于BB野生组;多倍型中存在HI突变组合的体长、体质量均显著高于其他组,存在BD突变的组合在体长性状方面显著低于其他组。表明草鱼MSTN-1基因3个SNPs中,HI突变是对草鱼生长性状的有利突变,BD突变是不利突变,而EF突变无显著影响,可将MSTN-1基因作为分子标记辅助草鱼选育的候选基因。 展开更多
关键词 草鱼 mstn 多态性 生长性状 肌肉成分
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刀鲚MSTN基因的克隆及其组织表达 被引量:12
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作者 杜富宽 聂志娟 +2 位作者 徐钢春 徐跑 顾若波 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期684-692,共9页
运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,... 运用同源克隆的方法和RACE技术,从刀鲚(Coilia nasus)肌肉组织中克隆了肌肉生成抑制素基因(Myostatin,MSTN)的cDNA全长并分析了肌肉生长抑制素基因在刀鲚不同组织的表达情况。结果表明,刀鲚MSTN基因的cDNA全长2 252 bp,编码区1 125 bp,编码374氨基酸。二级结构预测显示,刀鲚MSTN具有MSTN家族的典型结构域,包含Pfam和TGFB结构域。运用荧光定量的方法检测了该基因在刀鲚不同组织中的表达。结果显示,MSTN基因在健康刀鲚肌肉和脑中呈高表达,鳃、肝、脾、肠、肾和头肾中微量表达。根据以上研究结果认为,刀鲚MSTN基因的序列具有高度保守性,组织表达模式相似,推测该基因的功能也具有高度保守性。本研究旨为MSTN基因在刀鲚后续育种工作提供基础依据。 展开更多
关键词 刀鲚 mstn基因 克隆 组织表达
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鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律 被引量:10
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作者 梁耀伟 赵宗胜 +3 位作者 陈丹盈 赵松华 张慧 班谦 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期997-1002,共6页
旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准... 旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7~17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7~17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。 展开更多
关键词 鹌鹑 杂交禽 肌肉发育 mstn基因 P21基因 实时荧光定量PCR
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