小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1自发分泌白细胞介素8样化学趋化因子

小鼠胸腺上皮细胞株ＭＴＥＣ１自发分泌白细胞介素８样化学趋化因子北京医科大学免疫学系苗燕玲，曹良弦，刘祝公，陈慰峰在研究胸腺微环境在Ｔ细胞发育过程的选择作用中，发现本室建立的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠胸腺髓质区上皮细胞株ＭＴＥＣ１在体外能自发分泌对嗜中性粒细胞（...

小鼠胸腺上皮细胞株MTEC1表达的化学趋化因子的类型分析

以自行设计的引物用 ＲＴ－ＰＣＲ方法从小鼠胸腺上皮细胞株 ＭＴＥＣ１的总 ＲＮＡ中扩增出了ＳＤＦ－１α．ＩＰ－１０，ＫＣ，ＲＡＮＴＥＳ，ＭＣＰ－１和Ｌｙｍｐｈｏｔａｃｔｉｎ等６种化学趋化因子的ｃＤＮＡ片段，对扩增片段进行了核苷酸测序鉴定．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析结果显示：ＳＤＦ－１ｍＲＮＡ在ＭＴＥＣ１细胞株中存在两种不同的剪切形式． ＭＴＥＣ１的浓缩培养上清对小鼠胸腺 ＣＤ^（４－）ＣＤ^（８－） Ｔ细胞具有中等强度的趋化活性，符合ＳＤＦ－１的生物学功能．

小鼠胸腺髓质上皮细胞系MTEC1对3G11^-6C10^-CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞亚群的作用

3G1 1 -6C1 0 -CD4+CD8-胸腺髓质细胞是CD4单阳性 (SP)胸腺细胞中的亚群之一 ,表型为TCRαβ+CD6 9loHSAmed/lo,可接受ConA刺激产生增殖应答和细胞因子分泌 所分泌的细胞因子以Th2型为主 ,还有少量IFNγ存在 ,是处于CD4SP成熟过程的中后期 ,Th0向Th2转化的过渡型细胞 为探讨胸腺微环境中基质细胞对这一亚群细胞的作用 ,在研究体系中加入一株胸腺髓质型上皮细胞系MFEC1 ,发现MTEC1可促进ConA刺激的 3G1 1 -6C1 0 -CD4+CD8-胸腺髓质细胞增殖和IL 6分泌 ,但IL 4及IL 1 0的产生部分地受到抑制 ,不增加IFNγ分泌 ,亦不诱导IL

胸腺上皮细胞中雌激素诱导lncRNA的鉴定分析及表达载体构建

为研究胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)中雌激素(estradiol,E2)对长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达的调节作用,本研究首先培养小鼠胸腺髓质上皮细胞系1(medullary thymic epithelial cell line 1,MTEC1),经50 nmol/L E2作用24 h后,观察对细胞表型变化的影响,并用CCK-8试剂盒检测细胞活力;提取细胞总RNA,运用实时荧光定量PCR技术验证E2对lncRNA-2410006H16Rik表达的调节作用;最后运用RT-PCR技术扩增其目的基因,构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik重组过表达载体。结果显示,50 nmol/L E2能够明显抑制MTEC1的增殖,且相较于对照组细胞,50 nmol/L E2处理组细胞的D450 nm值极显著降低(P<0.01),表明其细胞活力极显著下降。实时荧光定量PCR结果显示,在E2作用下,lncRNA-2410006H16Rik在MTEC1细胞中的表达极显著上调(P<0.01),约是对照组的2倍,与高通量测序结果一致。经RT-PCR、双酶切及测序结果分析显示,试验成功构建pEGFP-N1-lncRNA-2410006H16Rik表达载体。结果表明,TECs中lncRNA-2410006H16Rik的表达与E2作用密切相关,为后续在细胞水平上进一步验证lncRNA-2410006H16Rik的调节功能奠定了基础。

Notch3胞内活化片段抑制小鼠胸腺上皮细胞系增殖

目的:研究Notch3信号对胸腺上皮细胞(thymic epithelial cells,TECs)增殖的影响。方法:人工合成Notch3胞内活化片段(NICD3)序列,构建慢病毒载体,并进行酶切和测序验证。将NICD3包装后感染小鼠TECs系m TEC1,荧光显微镜观察记录绿色荧光细胞的数量与可见光下细胞数量并计算感染效率。采用Ed U增殖试剂盒检测m TEC1细胞增殖率。结果:酶切和测序证实成功构建NICD3慢病毒表达载体,荧光显微镜观察表明该质粒能较好地感染m TEC1细胞,感染效率约为20%。Ed U增殖实验显示过表达NICD3可抑制m TEC1细胞增殖(P<0.01)。结论:Notch3信号抑制m TEC1细胞的增殖。

17-β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖的影响

为探讨17-β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖的影响及其分子机制,将小鼠胸腺上皮细胞系(MTEC1)经不同浓度和不同时间的17-β-雌二醇处理后,采用CCK-8法、Edu掺入法检测细胞增殖活性的变化;流式细胞术检测细胞周期的变化;DAPI染色法检测细胞核形态的变化;Western blot技术检测细胞周期相关基因CDK1及CyclinB1蛋白表达的变化。结果显示,雌激素显著抑制MTEC1细胞的生长,并呈时间和剂量依赖性;雌激素处理组G2/M期细胞显著增多,出现G2/M期阻滞;细胞形态变化明显,出现形状变大、多核、核染色质凝聚等现象;CDK1及CyclinB1的蛋白表达水平显著下调。结果表明,17-β雌二醇可以抑制MTEC1细胞的增殖,其机制可能是通过下调细胞周期正调节因子CDK1及CyclinB1的表达,使细胞阻滞于G2/M期。

17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响

为探讨17β-雌二醇对小鼠胸腺上皮细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制，将小鼠胸腺上皮细胞系（MTEC1）细胞经不同浓度的17β-雌二醇处理24h后，采用CCK-8法检测细胞增殖活力的变化；流式细胞术检测细胞周期的变化；Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况：DAPI染色法检测细胞核形态的变化；高通量测序技术获得差异基因表达谱并运用KEGG通路分析预测差异基因的作用通路；String基因互作分析差异基因的相互作用；实时荧光定量PCR验证p53通路相关基因的表达情况。结果显示，17β-雌二醇显著抑制MTEC1细胞的增殖活力，并呈浓度依赖性；使细胞周期出现G2／M期阻滞：能诱导MTEC1细胞凋亡，细胞核呈现不规则形态、核碎片、染色质凝聚和凋亡小体等典型的凋亡特征；KEGG通路分析显示，与细胞增殖和凋亡密切相关的p53信号通路呈极显著性差异：String基因互作分析显示，p53信号通路的相关基因互相作用，形成紧密联系的网络；p53信号通路的下游周期基因Cyclin B1表达下调，凋亡相关基因Trp53、Gadd45a、Fas、p21、Apaf1和Bax的表达水平显著上调。结果提示，雌激素可能通过p53信号通路对MTEC1细胞的增殖抑制、周期阻滞和细胞凋亡产生影响。