基于重组MTFP基因蛋白的犬心丝虫抗体Dot-ELISA检测方法的建立

以建立Dot-ELISA检测犬心丝虫血清抗体的方法,用纯化的犬心丝虫MTFP基因蛋白为包被抗原,进行条件优化,筛选最佳反应条件,并进行敏感性、重复性和特异性等试验。结果表明,建立的犬心丝虫Dot-ELISA检测方法最佳抗原包被浓度为0.5μg·片-1;待检样品血清最佳稀释比例为1∶50;HRP标记兔抗犬抗体最佳稀释比例为1∶4 000;建立的Dot-ELISA方法敏感性为1∶200;批间重复试验证明,该方法具有良好的重复性,且与犬等孢球虫阳性血清和犬蛔虫阳性血清没有交叉反应;利用建立的方法对吉林省某地的62份待检血清进行检测,结果阳性率为4.8%。研究成功建立了基于重组MTFP基因蛋白的犬心丝虫Dot-ELISA检测血清抗体方法,为犬心丝虫病流行病学调查和临床诊断提供了新技术。

利用种子序列检测山羊皮肤中microRNA靶基因分子方法的建立

文章旨在建立一种种子序列介导的可控遗传操作—microRNA靶基因指纹图谱(MicroRNA targets fingerprint,MTFP),用于在基因表达检测中筛选与特定microRNA相关的靶基因。在设定上游种子序列的互补序列和下游锚定序列的基础上添加特殊接头,通过反转录和特殊二步PCR将microRNA的靶基因扩增;扩增后的microRNA靶基因在聚丙烯酰胺凝胶电泳中检测其片段大小和表达丰度,用于筛选在不同生理状态或试验条件下特异表达的基因;特定的靶基因序列通过DNA回收和测序方法得到。以miR-203为例,在不同生理状态的山羊皮肤样品中获得了5条大小分别为718 bp(JN709494)、349 bp(JN709495)、243 bp(JN709496)、156 bp(JN709497)和97 bp(JN709498)的靶基因序列。MTFP经济适用、可操作性强,可用于探索microRNA调节的靶基因,或用来评估靶基因的表达谱特征。