MTT比色法在检测重组人GM-CSF生物活性中的应用

探索了ＭＴＴ比色法的一系列实验条件，并利用ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ－１，测定了家蚕基因工程生产的重组人ＧＭ－ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ－ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ）的生物活性，并与半固体培养集落刺激法进行了比较。

测定昆虫细胞存活或死亡的MTT方法的改进

MTT方法具有灵敏、简便、稳定可靠、不需同位素等特点。为了摸索测定昆虫细胞存活（或死亡）的MTT方法的各种最适条件，本文以中国棉铃虫细胞系为对象，确定了一些基本参数、并比较了三种MTT测定方法。结果表明：改进的方法所选用的溶剂——pH为4.5的3％SDS异丙醇效果最好，溶解甲所需时间短、OD值高。测定昆虫细胞范围为每孔500～60000细胞，测试波长为560nm，参考波长为690nm.

测定细胞存活和增殖的MTT方法的建立

MTT方法具有简便,灵敏,稳定可靠,不需要同位素等优点。为了摸索测定细胞存活和增殖的MTT方法的各种最适条件,我们以Raji细胞为对象,比较了十二种不同的MTT甲(月替)溶解缓冲液。实验结果表明,20％SDS-50％DMF效果最好,溶解力强,溶解甲(月替)所需时间短,背景低,OD值高,不会引起培养基中小牛血清的絮状沉淀。其溶解的甲(月替)产物吸收峰在550—600nm之间。测定细胞范围为每孔500—400 000,这一范围能满足生物学和医学研究中多种测定的需要。

MTT法分析培养成骨细胞的存活和增殖能力

用ＭＴＴ法测定离体培养的成骨细胞存活与增殖能力。并观察１３７Ｃｓγ线对成骨细胞生长的影响。细胞接受０、３、６、９、１２Ｇｙ照射，培养至第７天，增殖率分别为４１６、３３６、２７５、１４７、１０８％。结果表明：１３７ＣＳγ线剂量高于３Ｇｙ成骨细胞增殖受到显著抑制，９Ｇｙ以上，则基本抑制其增殖。

用MTT改良法检测肿瘤细胞化疗药物敏感性

综合运用ＭＴＴ、台盼兰和镜下观察法检测９１例临床肿瘤标本对于１１种常用化疗药物的敏感性，并用淋巴细胞分离液和Ｐｅｒｃｏｌ分离纯化肿瘤细胞。上述分离纯化法适于大多数病例，仅滋养叶细胞肿瘤和１例宫颈癌所致腹水未达到分离目的。ＭＴＴ法实验中发现，甲肟结晶含量和分布的镜下观察方便、可靠，既适于琥珀酸脱氢酶活力低的病例和细胞数少的标本，还可用来观察药物对肿瘤细胞的作用是否均一。把结晶观察和ＭＴＴ抑制率的计算结合起来，可提高试验成功率和预测准确率。

利用MTT建立一种快速检测青枯菌活菌的方法

利用四氮唑蓝(MTT),优化了检测波长、菌浓度、MTT用量、MTT反应时间、三联液的用量和溶解时间等,建立一种有效快速检测青枯菌活菌的方法。结果发现,MTT反应的最佳检测波长为512 nm,青枯菌浓度A_(600)为0. 3,MTT用量为30μL,MTT还原反应控制在20 min以内,三联液溶解甲臜晶体的用量为3 m L,溶解8 h,甲臜溶液在10～120μL以内与A512的数值线性关系良好,平板计数印证了这一结果。实验结果表明,MTT法可以用于快速检测青枯菌等植物病原菌活菌,对农产品进出口检验检疫具有一定的应用价值。

MTT比色分析法的方法学探讨

本文以检测K562细胞增殖活性为例，对MTT法的实验条件进行了探讨，结果表明：20％SDS～50％DMF作甲溶解缓冲液效果最佳，其溶解的甲产物吸收峰为570nm波长。测定细胞范围800～400000／孔，能广泛地应用于多种细胞存活和增殖的测定。

MTT法检测细菌细胞数的主要影响因素分析

MTT法是生物活细胞计数的灵敏、快速和便捷方法。报告对MTT法应用于细菌细胞数定量分析时的分析前培养时间、MTT反应时间、MTT剂量和检测波长等主要影响因素的分析结果,同时报告MTT反应产物溶解检测与直接检测,以及MTT法与平板菌落计数法定量检测的结果比较。结果如下:Formazan生成量与细菌活细胞数呈正相关,对数生长期变化最明显;MTT为0.25 mg/mL,反应2 h时吸光值与菌落数具有良好的线性关系(r=0.999 8);Formazan的最大吸收波长为570～580 nm;MTT反应产物溶解检测和直接检测结果经统计学分析无显著性差异(P>0.05);细菌细胞数在107～109 cfu/mL范围内,MTT法与菌落计数法定量结果呈现良好的线性关系(r≥0.991 7)。

一种抗癌药物的体外筛选方法—MTT比色分析法

本文主要介绍一种国外目前研究十分活跃的MTT法。由于它不涉及使用同位素，操作简单、快速、准确，适用于基层单位，是肿瘤学、免疫学研究极为简便的方法。

改良MTT比色法检测消化道肿瘤患者的淋转功能

目的探讨ＭＴＴ比色法测定淋转功能的条件改良。方法采用ＤＭＳＯ、酸化异丙醇、酸化２０％ＳＤＳ、ＤＭＳＯ∶乙醇（１∶１）这四种甲溶解剂作分组比较，同时对实验中的不同淋巴细胞浓度与甲形成量、不同ＭＴＴ浓度与显色ＯＤ值之间的相关性做了研究。随后采用该法检测了各类消化道肿瘤患者和正常人的淋转功能。结果ＤＭＳＯ∶乙醇（１∶１）作为ＭＴＴ甲溶解剂效果最好。ＭＴＴ的浓度以５ｍｇ／ｍｌ为宜，淋巴细胞数在（２０～０．６）×１０５／ｍｌ范围内与甲形成量成正向线性关系。应用该法测定了８０例消化道肿瘤患者，其淋转功能皆明显低于正常对照（Ｐ＜０．００１）。结论该法的改良使检测结果更准确、稳定，操作简便，更适合于广大医院的临床应用。

热毒宁抗呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)作用体外实验研究

目的:研究中草药热毒宁注射液对呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)的抑制作用。方法:以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率。以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L。预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428、1.160、1.189g/L,治疗指数TI分别为9.28、3.42和3.34,热毒宁对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系。结论:热毒宁对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著。

留兰香提取物体外抗猪细小病毒的作用

通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测留兰香提取物抗猪细小病毒(PPV)活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50%inhibitingconcentration,IC50),并从药物预防给药(抗病毒吸附)、直接杀灭及治疗给药(抑制病毒在细胞内的生物合成)3个方面分析留兰香提取物抗PPV活性的作用机制。结果显示:留兰香挥发油在这3种作用方式中对PPV均有抑制效果,其半数抑制浓度(IC50)分别为0.008 0 mg/ml、0.001 9 mg/ml、0.003 6 mg/ml,治疗指数(TI)分别为25.88、108.95、57.50;留兰香水提液和粗提物对PPV直接杀灭的半数有效浓度(IC50)分别为0.034 0 mg/ml、0.356 0mg/ml,治疗指数(TI)分别为79.18、8.37;留兰香水提液和粗提物抑制病毒在细胞内生物合成的半数有效浓度(IC50)分别为0.043 0 mg/ml、0.063 0 mg/ml,治疗指数(TI)分别为62.60、47.27,留兰香水提液和粗提物均无抗病毒吸附作用。表明留兰香挥发油在对PPV的3种作用方式中均有安全高效活性,留兰香水提液和粗提物对PPV侵入细胞无阻止作用,但在直接灭活和抑制其在细胞内的增殖方面均有较高的活性。

利用MTT法检测活体线虫的主要影响因素及可行性研究

MTT法是一种灵敏、快速和便捷的计数生物活细胞的方法。为探讨这一方法用于计数活体线虫的主要影响因素和可行性,本试验以秀丽新杆线虫为研究对象,对MTT法检测秀丽新杆线虫的检测波长、MTT的用量、溶解用DMSO用量和与药物作用时间等主要影响因素进行分析,并将MTT法检测结果与显微镜直接镜检计数法结果比较。结果表明：甲瓒（Formazan）生成量与线虫活虫体数呈正相关;在试验反应体系中,MTT为10g/L,反应3h时,Formazan的最大吸收波长为550nm,溶解用DMSO最佳用量为150μL,与药物作用时间为24h;MTT法检测和直接镜检结果相似。结果表明,MTT法可用于秀丽新杆线虫虫体等的计数,且可以大大缩短检测的时间,有效减少人力的消耗,结果准确性也较高,对大批量的进行药物或其他物质对虫体活力作用的研究具有重要积极意义。

痰热清抗呼吸道合胞病毒作用体外实验研究

目的研究中草药注射液痰热清对呼吸道合胞病毒(RSV、Long株)的抑制作用。方法以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率。以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果。结果痰热清注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L,预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428/1.160/1.189g/L,治疗指数TI分别是9.28、3.42和3.34,痰热清对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系。结论痰热清对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著。