小议在MTT法测细胞增殖抑制率中IC_(50)的计算方法

半数抑制浓度、半数致死量等半数量是分析和比较药效及毒效的重要数值,可用以测定药物安全性、比较效价等,其具体应用范围广泛,但计算相同。本文阐述了半数抑制浓度(IC50)的概念、含义、计算原理以及几种具有实际应用价值、精密度较好的计算方法。重点讨论在MTT法测药物对细胞增殖抑制的影响中计算IC50的特点和注意事项等,对正确、简便求解IC50值进行了初步探讨。

MTT法测定双黄连粉针中有效成分对大鼠腹腔肥大细胞的IC_(50)

目的:采用MTT法测定双黄连粉针中三种组成药材提取物及三种主要有效成分对大鼠腹腔肥大细胞IC50。方法:将空白大鼠腹腔肥大细胞无菌条件下分离纯化后,高、中、低三个浓度与腹腔肥大细胞及一定量的MTT共同孵育后,测定490nm处OD值。结果:双黄连中三种药材提取物及主要有效成分对大鼠肥大细胞的IC5 0分别为:0.18mg/mL、12.0μg/mL、0.06mg/mL;0.5mg/mL、8.0μg/mL、0.04mg/mL。结论:通过对上述各组药物对大鼠腹腔肥大细胞的IC50的测定,为考察双黄连粉针中各物质对肥大细胞的脱颗粒作用奠定实验基础。

SYSMEX UF50和MTT法检测黄芩苷对小鼠淋巴细胞作用的比较

目的通过MTT法和使用SYSMEX UF50检测黄芩苷对小鼠淋巴细胞的作用,探讨使用SYSMEX UF50分析淋巴细胞转化的可行性。方法对同一批标本采用两种方法同时进行测定,并对结果进行分析。结果SYS-MEX UF50测得的结果与MTT法的结果基本一致。结论可以使用SYSMEX UF50研究不同浓度黄芩苷对淋巴细胞的作用。

MTT比色法测定Vero毒素-1的CD_(50)

〔目的〕测定Vero毒素 - 1对Vero细胞的毒性。〔方法〕用MTT法测定Vero毒素 - 1Vero细胞的毒性。〔结果〕Vero毒素 - 1的CD50 为 1pg。〔结论〕MTT法方法简便 ,灵敏度高 ,且没有同位素的污染 ,是测定Vero毒素 - 1细胞毒性的一个简便方法。

褐藻裙带菜孢子叶粗提物体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型活性研究

从药物对细胞的保护、对HSV-2增殖的影响及对HSV-2感染细胞的综合作用三个方面研究不同稀释度的裙带菜孢子叶粗提物抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型对Vero细胞的感染作用,细胞病变效应法(Cytopathogenic effect,CPE)观察和MTT法测定裙带菜多糖抗HSV-2活性,结果表明裙带菜多糖能明显抑制HSV-2对Vero细胞的致病变作用,使细胞存活率升高,其水提醇沉法所得裙带菜多糖的IC50为6.49μg/mL,并初步推测其抗HSV-2活性是作用在HSV-2和受体结合,侵入Vero细胞阶段,为筛选新型抗病毒药物、研究海藻多糖抗HSV-2活性机理及优化裙带菜孢子叶的提取工艺提供参考依据。

地不容粗提物体外抗柯萨奇B_3病毒活性作用的实验研究

目的:研究地不容粗提物体外抗柯萨奇B3病毒活性。方法:采用细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法、MTT法对样品的细胞毒作用、抗病毒活性进行测定。结果:地不容粗提物能明显抑制CVB3对Hela细胞的致病变作用,使细胞存活率升高,其中S1(含千金藤素)的ED50为1637.16μg/mL,S2(不含千金藤素)的ED50为2964.86μg/mL。结论:地不容多糖能显著抑制CVB3病毒所致的细胞病变,具有成为一种有效抗病毒药物的开发潜力。

右旋松萝酸对小鼠口服急性毒性及细胞毒性的实验研究

目的观察右旋松萝酸的口服急性毒性,MTT方法测其细胞抑制活性。方法建立小鼠经口急性中毒小鼠模型,观察不同剂量药物灌胃小鼠的中毒表现。测定小鼠的经口LD50,观察不同剂量右旋松萝酸对小鼠生存时间及存活率的影响。同时,用不同浓度的右旋松萝酸作用于体外培养的心肌成纤维细胞,MTT方法测定细胞的IC50,观察不同浓度药物对细胞的抑制率。结果右旋松萝酸剂量越大,小鼠的中毒症状越明显,生存时间越短。小鼠经口LD50为388mg/kg,中毒表现主要有精神萎靡,耸毛,畏寒,呼吸急促,行动迟缓,厌食等症状。体外细胞培养实验显示,右旋松萝酸对细胞增值的抑制呈剂量正相关,较大剂量对细胞有破坏作用,其对心肌成纤维细胞的IC50为322μg/ml。结论右旋松萝酸为一种中低毒的天然化合物,中低剂量没有明显的细胞毒性。

松果提取物的体外抗腺病毒活性研究

用95%的乙醇沸腾回流提取,制备松果提取物。MTT法确定提取物对细胞的最大无毒浓度;用梯度滴定法观察腺病毒所携带的绿色荧光蛋白基因的蛋白表达量确定病毒液的效价(TCID50);参照所得数据,设计3个松果提取物潜在的抗腺病毒靶位,分别探究松果提取物对腺病毒的直接灭活作用、对病毒吸附的抑制作用和对病毒生物合成的抑制作用。结果表明,试验所用腺病毒原液感染HEK293细胞的效价为106.1 TCID50/mL;乙醇溶剂和松果提取物均对腺病毒具有直接灭活作用,但提取物可以加强这种灭活作用;两者对于腺病毒的吸附并不起什么作用;松果提取物能够抑制腺病毒的生物合成作用,而且该抑制效果较乙醇更为显著。

基于IC_(50)的医疗器械细胞毒性试验方法的研究

针对ISO 10993-5:2009中规定的MTT法的振动条件和观察终点进行研究,并对IC50在MTT法结果评价中的应用情况进行探讨。研究表明,将IC50用于MTT法试验结果的定量分级评价是可行的。

长枣多糖中抗肿瘤多糖的筛选研究

[目的]筛选出长枣多糖中的抗肿瘤多糖,为长枣新产品的开发提供依据。[方法]对长枣中提取的6种多糖运用Sepharose CL-6B及高效液相色谱法分析检测,同时运用MTT法,对6种长枣多糖对人肝癌细胞株Bel7402、人胃癌细胞株BGC823、人鼻咽癌细胞株KB的增殖抑制率进行了测定,并进行了比较分析。[结果]检测结果表明,制得的6种长枣多糖均为单一组分多糖。当浓度为400 mg/L时,LJU-3对3种肿瘤细胞的抑制率分别为61.29%、68.77%、72.16%,均高于其他多糖,且高于50%,说明它对3种肿瘤的抑制作用为中度敏感或高敏感。运用IC50软件计算得它对Bel7402、BGC823、KB抑制的IC50值分别为198、178、167 mg/L,因此认为长枣多糖中抗肿瘤多糖为LJU-3。[结论]该研究为进一步深入研究枣多糖抗肿瘤作用机制奠定了良好的基础。

野木瓜皂甙对HL60肿瘤细胞增殖的影响

研究野木瓜皂甙(Stauntoniae Saponin,SS)提取物对人类白血病细胞系HL60增殖的影响,为中草药抗肿瘤提供实验依据．以不同浓度SS作用于HL60细胞,然后用MTT比色法测定它对HL602细胞增殖的影响．当浓度为18mg/L时,SS能明显地促进HL60细胞的增殖(P＜0．01);浓度大于90 mg/L时,SS对HL60细胞增殖产生抑制作用;当浓度为2253mg/L时,抑制率高达63．15%(P＜0．01)．浓度大于18mg/L后,细胞增殖的抑制率与SS浓度呈线性相关,r=0．8928(P＜0．001);SS的LC50为1652 mg/L．野木瓜皂甙提取物对HL60细胞的增殖有明显的双向调节作用,即在较小范围的低浓度区域内有促进HL60细胞增殖的作用,浓度增大后则改变为抑制作用;浓度越大,抑制作用越强．

PG490及PG736的抗肿瘤活性研究

目的通过研究PG490及血清孵化PG736对肿瘤细胞的毒性作用,评价PG736的抗肿瘤活性。方法采用14种人肿瘤细胞为实验瘤株,通过MTT法检测PG490、PG736对14种肿瘤细胞的毒性作用。结果与对照组相比较,PG490对所试14种人类肿瘤细胞的增殖均有显著抑制作用(P<0.05),对于不同来源的细胞作用强度略有不同;PG736经人血清孵化后对LOVO及GMC-803细胞增殖有显著抑制作用(P<0.05)。结论PG490及PG736对14种人肿瘤细胞具有不同程度抗肿瘤作用。

白花蛇舌草提取物对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法采用甲基噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).结果在同一浓度下,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制作用随着作用时间的延长而增强,0.08 mg/mL的白花蛇舌草乙醇提取物作用CT-26细胞24 h、48 h、72 h,细胞抑制率分别为(16.67±9.35)%,(34.66±9.23)%,(40.07±9.16)%.白花蛇舌草乙醇提取物作用24 h、48 h、72 h的IC50值分别为0.315,0.155,0.115.在同一作用时间内,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制率随着药物浓度的增加而增加,在72 h内不同浓度药物(0.06 mg/mL,0.08 mg/mL,0.10 mg/mL,0.12 mg/mL,0.14 mg/mL,0.16 mg/mL,0.18 mg/mL,0.20 mg/mL)作用下,细胞抑制率分别为(35.46±3.59)%,(40.07±9.16)%,(40.77±6.92)%,(52.81±1.87)%,(54.22±2.35)%,(68.72±3.71)%,(70.04±8.03)%,(71.84±3.12)%.结论白花蛇舌草乙醇提取物可以抑制BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株的增殖,其对CT-26细胞增殖的抑制作用呈现时效和量效的关系.

纳米氧化石墨烯对小鼠体内外急性毒性作用

目的通过体内和体外实验观察氧化石墨烯纳米颗粒的急性毒性作用。方法选择60只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成6组,每组10只,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,分别以剂量0 mg/(kg·bw)、3.125 mg/(kg·bw)、6.25 mg/(kg·bw)、12.5 mg/(kg·bw)、25.0 mg/(kg·bw)和50.0 mg/(kg·bw)进行纳米氧化石墨烯灌胃,观察动物一般状态及死亡情况;另取60只ICR小鼠,分为6组,在无菌条件下,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,以剂量0 mg/(kg·bw)、1.0 mg/(kg·bw)、2.0 mg/(kg·bw)、4.0 mg/(kg·bw)、8.0 mg/(kg·bw)和16.0 mg/(kg·bw)进行尾静脉注射,观察动物一般状态及死亡情况。采用MTT法,以剂量为9.875 mg/(kg·bw)、18.75 mg/(kg·bw)、37.5 mg/(kg·bw)、75 mg/(kg·bw)、150 mg/(kg·bw)、300 mg/(kg·bw)和600 mg/(kg·bw)的氧化石墨烯与A549细胞进行共培养,观察细胞的生长状况并计算细胞的LC_(50)。结果纳米氧化石墨烯经口染毒途径未引起小鼠器官病理改变,无动物死亡;通过尾静脉注射对小鼠的LD_(50)为5.657 mg/(kg·bw),肺、肝、心组织血管内可见褐色纳米颗粒,但组织未见病理学变化;对A549细胞的LC_(50)为56.885μg/m L。结论未经修饰的纳米氧化石墨烯经尾静脉注射可导致动物死亡,并对A549细胞生长具有抑制作用。

地花菌提取物Albaconol的抗肿瘤活性研究

目的:研究地花菌提取物albaconol的抗肿瘤活性。方法:以人白血病K 5 62、人乳腺癌Bcap 3 7、人胃腺癌BGC 82 3和人非小细胞肺癌A5 49为模型,采用MTT法测试albaconol对肿瘤细胞增殖的影响;以小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌H2 2为移植性肿瘤模型,检测albaconol静脉给药对肿瘤生长的影响。结果:Albaconol对K5 62、Bcap 3 7、BGC 82 3、A5 49的IC50 分别为2 .42±1.77、1.88±1.41、1.0 4±0 .64、1.18±1.10 μg/ml ;Albaconol 0 .87、1.73、3 .46mg/kg剂量组对S180的抑瘤率分别为2 8.2 %、43 .2 %、47.4% ,对H2 2的抑瘤率分别为15 .6%、2 2 .4%、3 7.8%。结论:Albaconol具有较强的体内、外抗肿瘤活性。

红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究

目的:探讨红毛毡提取物的体外抗癌作用。方法:用MTT法检测红毛毡提取物对13种肿瘤细胞株体外生长的抑制作用。结果:红毛毡提取物对所试肿瘤细胞株的体外生长均具有较强的抑制作用,其中对急性T细胞白血病细胞Jurkat、人肾癌细胞OS-RC-2、人慢性髓质白血病细胞K562、人肺癌细胞A549和人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435s的作用强,半数抑制浓度(IC50)分别为9.25±3.68、10.75±2.40、10.90±3.74、11.21±3.07和12.66±1.19μg.ml-1,其次是对人食管癌细胞Eca-109、人胰腺癌细胞PANC-1、人黑色素瘤细胞A375、人肝癌细胞QGY-7703和人胃癌细胞SGC-7901,半数抑制浓度(IC50)分别为14.36±2.26、15.36±6.73、15.48±1.98、17.21±10.32和19.01±5.95μg.ml-1。结论:红毛毡提取物具有广谱抗肿瘤作用。

丁烯酸内酯对心肌线粒体呼吸链酶复合物活力的影响

目的 研究丁烯酸内酯 (BUT)对大鼠心肌细胞毒性作用机制。方法 差速贴壁结合化学方法分离纯化大鼠心肌细胞。MTT法检测BUT作用于心肌细胞后其存活率的改变。用差速离心法分离心肌线粒体。TBA法检测心肌匀浆和心肌线粒体悬液中MDA的含量。应用紫外分光光度法检测BUT作用于线粒体悬液 2h后线粒体呼吸链酶复合物活力。结果 BUT对培养的心肌细胞有很强的毒性作用并且呈现明显的量效 关系 ,其作用于心肌细胞的LC50 为5 3 μg/mL。BUT作用在线粒体悬液中所引起的脂质过氧化效应强于其在心肌匀浆中所引起的脂质过氧化作用。BUT作用后线粒体酶复合物活力发生了改变 ,复合物Ⅰ和复合物Ⅱ的活力受到了比较明显的抑制 ,而复合物Ⅲ、Ⅳ的活力则有一定程度升高。结论 BUT能引起心肌细胞的脂质过氧化作用 ,这种作用有可能是因为BUT作用于线粒体呼吸链影响了电子在呼吸链上的传递过程所致。

维吾尔药罗勒不同提取部位对ECV304和Raw264.7细胞毒性的相关研究

目的:确定维吾尔药罗勒的不同极性提取部位的细胞毒性,为后续研究提供可靠的实验依据。方法:采用MTT比色法筛选出最佳的细胞铺板密度及给药浓度,并检测罗勒5个不同提取部位对ECV304和Raw264.7细胞的毒性作用,进而确定各部位药的IC50值。结果:两种细胞在96孔板中的最佳接种密度均为1×105个/ml,在溶媒DMSO的最大终体积浓度为1%的条件下,OBL-乙醇、OBL-石油醚,OBL-氯仿,OBL-乙酸乙酯,OBL-正丁醇IC50值分别为320,62.4,29.3,84.8,258μg/ml。结论:维药罗勒各提取部位对ECV304和Raw264.7细胞有不同的毒性作用,为后续研究提供了较为可靠的实验依据。

Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤

目的:研究Isogoniotriol衍生物对肿瘤细胞DNA的损伤作用。方法:用Isogoniotriol衍生物处理体外培养白血病K562细胞,MTT法测定IC50,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞核DNA的损伤。结果:Isogoniotriol衍生物处理K562细胞IC50为4×10-5mol/L,不同浓度的Isogoniotriol衍生物处理细胞后可见彗星状拖尾。结论:Isogoniotriol衍生物可造成肿瘤细胞DNA损伤,抑制肿瘤细胞生长。