杨梅叶精油成分分析及其对肺癌A549细胞增殖的抑制作用

【目的】比较分析‘丁岙梅’‘东魁’‘晚稻杨梅’和‘荸荠种’4个品种杨梅叶精油的成分与抗癌活性差异。【方法】以水蒸气蒸馏法提取4种杨梅叶精油,采用GC-MS技术分析其组成成分,并以3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT法)评价了4种杨梅叶精油对肺癌A549细胞增殖的抑制活性。【结果】经GC-MS分析,‘丁岙梅’‘东魁’‘晚稻杨梅’和‘荸荠种’4种杨梅叶精油分别鉴定出34、33、41和33种成分,包括萜烯、萜醇和萜醚3大类主要成分和脂肪醛、烷酮和酚等微量成分。‘丁岙梅’‘东魁’‘晚稻杨梅’和‘荸荠种’4种杨梅叶精油中共有的成分为11种,特有成分分别为7、6、9和5种。β-石竹烯(12.85%~23.87%)、α-葎草烯(19.27%~24.255%)、橙花叔醇(1.15%~23.47%)、氧化香橙烯(3.82%~7.51%)、氧化石竹烯(2.93%~5.26%)和d-杜松烯(0.8%~5.2%)是杨梅叶精油中的主要成分,但含量存在显著差异。根据MTT结果,‘丁岙梅’‘东魁’‘晚稻杨梅’和‘荸荠种’4种杨梅叶精油对肺癌A549细胞增殖抑制作用均存在时间和剂量依赖性,作用24 h后A549细胞半数致死量IC50分别为127.24、127.14、118.03和123.62μg·m L-1,‘晚稻杨梅’叶精油的抗增殖活性略优于其他3种杨梅叶精油。【结论】‘丁岙梅’‘东魁’‘晚稻杨梅’和‘荸荠种’4种杨梅叶精油成分差异显著,对肺癌A546细胞增殖抑制活性较强,不同品种间无显著差异(p>0.05)。

银杏中银杏酸诱导人白血病细胞U937凋亡的研究

目的:研究银杏酸体外对U937细胞生长的抑制作用,探讨其作用机理。方法:采用MTT法检测银杏酸对U937细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化,DNA琼脂糖电泳检测其生化特征的改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:U937细胞经银杏酸作用24～48h,细胞的生长明显被抑制;银杏酸作用28h出现了细胞皱缩、核浓缩、体积缩小等明显的凋亡的形态学特征;细胞DNA经琼脂糖电泳可见典型的梯形条带;10.0μg/ml的银杏酸作用40h后,细胞凋亡率为14%。结论:银杏酸对U937细胞具有明显的抗肿瘤活性,其作用机理与诱导细胞凋亡有关。

MTT-半固体培养基测定细菌动力的研究

目的 制成一种容易测定细菌动力的半固体培养基。方法 根据Difco动力试验培养基配方 ,降低琼脂浓度 ,加入MTT代替TTC。培养基组成为 10 .0gTryptose ,5 .0gNaCl,3.5gagar ,10 0 0 .0ml蒸馏水 ,高压灭菌后 ,冷却至 5 0℃～ 6 0℃。无菌加入 1.5ml滤器除菌的 10g/LMTT水溶液。分装无菌管。结果 有动力菌株沿着穿刺线扩散 ,形成蓝色云雾状 ,而无动力菌株在穿刺线上生长只形成蓝线 ,蓝线周围培养基保持澄清。检测了 12 3株菌 ,鞭毛染色证实 94株有鞭毛、2 9株无鞭毛 ;有鞭毛的菌株中 ,90株菌培养 10～ 18h动力阳性 ,其余 4株大肠埃希菌培养 2 4h动力阳性 ,但这 4株菌应用Difco动力试验培养基需诱导传代才获得阳性结果。除此 4株外 ,还有 9株用Difco动力培养基需培养 48h才阳性。

眼镜蛇毒细胞毒素在体外对人癌细胞的毒性作用(MTT法)

目的测定眼镜蛇毒细胞毒素（ＣＶ－ＣＴＸ）对人癌细胞株的细胞抑制作用，以期能简便准确地反映其抗癌活性。方法应用溴化二苯四偶氮盐（ＭＴＴ）法测定在ＣＶ－ＣＴＸ作用下体外培养的人胃癌细胞株（ＳＧＣ－７９０１）和人肝癌细胞株（ＳＭＣ）的存活情况和其量效关系。结果（１）ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１的活细胞数与其分解ＭＴＴ的量成正线性关系。（２）ＣＶ－ＣＴＸ对ＳＭＣ、ＳＧＣ－７９０１癌细胞株的细胞抑制作用呈良好的量效关系，ＩＣ５０分别为２．４５和１．２４μｇ／ｍｌ。结论（１）用ＭＴＴ法测定癌细胞的增殖和衰减是可靠的。（２）应用ＭＴＴ法证实ＣＶ－ＣＴＸ对体外培养的人癌细胞的杀伤程度可作为其抗癌活性指标。

种植合金CPTi和Ti-6Al-4V对内皮细胞增殖的影响及在细胞培养液中腐蚀情况分析

目的 3(-4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法体外评价CPTi和Ti-6Al-4V牙科种植体材料对人脐静脉血管内皮细胞(HU)增殖的影响,并检测这两种材料在细胞培养液中的腐蚀情况。方法将HU(2×104/mL)接种于CPTi和Ti-6Al-4V金属表面,电镜观察细胞接种初期的形态,MTT法检测细胞接种后4 h、1 d、2 d、3 d、7 d、10 d和14 d所测的OD值,X射线光电子能谱分析(XPS)法分析2种金属在细胞培养液浸泡前后的表面层组元。结果采用SPSS13.0软件分析,细胞接种后4 h、1 d、2 d、3 d、7 d、10 d和14 d所测的OD值表明2种材料没有统计学差异(P<0.05);接种后6 h电镜下可以观察到细胞在CPTi和Ti-6Al-4V表面的形态基本类似,没有明显的形态和数量差别出现;XPS结果显示2种合金表面都有不同厚度的钝化膜形成,CPTi表面的钝化膜要比Ti-6Al-4V的厚一些。结论 CPTi和Ti-6Al-4V对HU的增殖没有影响,在培养基中也没有发生腐蚀。

凋亡相关蛋白BCL-2与白血病化疗药物敏感性的研究

目的 :研究急性白血病 (AL)细胞BCL 2表达及其与体外化疗药物敏感性的关系。方法 :采用Westernblotting技术和四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 ) ,分别检测HL 60、U93 7细胞株和 6例急性髓性细胞白血病 (AML)细胞BCL 2表达水平及体外对柔红霉素 (DNR)的敏感性。结果 :( 1)BCL 2表达水平HL 60细胞高于U93 7细胞 ,而 6例AML细胞BCL 2表达水平不同 ;( 2 )MTT检测结果显示 ,DNR对HL 60抑制率低于U93 7;BCL 2高表达的AML细胞 ,DNR抑制率低。结论 :细胞系和白血病原代细胞的BCL 2高表达伴低药敏与AML疗效有关。

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2抑制作用的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞株的抑制作用。方法 :用不同浓度的 As2 O3处理人肝癌细胞株 SMMC- 772 1、Hep G2及正常人肝细胞株 L- 0 2 ,应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )观察 As2 O3对细胞生长的影响 ,并与 3种常用抗癌药羟基喜树碱 (HCPT)、顺铂 (DDP)及 5 -氟脲嘧啶 (5 - Fu)的抑制率进行比较。结果 :低浓度的 As2 O3、HCPT、DDP及 5 - Fu对 SMMC- 772 1、Hep G2两种肝癌细胞株的抑制率分别是 86 .3% ,4 3.2 % ;4 .2 % ,4 2 .1%和 76 .7% ,4 5 .6 % ;19.8% ,18.6 % ,As2 O3的抑瘤作用最强 (P<0 .0 5 ) ,而对正常人肝细胞株的抑制较弱。浓度≥ 2 .0 μm ol/ L 的 As2 O3对 SMMC- 772 1和 Hep G2的抑制作用差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :As2 O3体外试验能有效抑制肝癌细胞株的生长 ,且在一定浓度范围内 。

穿心莲内酯对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响

目的研究穿心莲内酯(AD)对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖、周期和Bax、Bcl-2mRNA表达的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的AD对Tca8113细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪分析AD作用Tca8113细胞后细胞周期的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测AD对人舌鳞癌Tca8113细胞Bax、Bcl-2mRNA的表达的影响。结果 AD能抑制人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖,细胞半数致死值(IC50)为74.66μg/mL,且具有明显的剂量时间依赖性;镜下见凋亡细胞形态学特征;随着AD浓度的升高与作用时间的延长,细胞周期中G0/G1期细胞比例由(39.45±0.65)%上升至(63.70±0.65)%,S期细胞比例由(56.55±0.64)%下降至(32.28±0.54)%,对细胞G0/G1期的阻滞作用差异有统计学意义(P<0.01)。AD作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后,Bax mRNA表达量增加,Bcl-2mRNA表达量下调。结论 AD对人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖有明显的抑制作用,并能诱导舌鳞癌细胞凋亡,为临床上舌鳞癌的治疗提供了新的思路。

菱角中抗肿瘤活性成分的分离、提纯及结构鉴定

采用柱层析分离技术,以硅胶为填料,以石油醚-醋酸乙酯-甲酸(体积比为5∶4∶0.1)为展开剂(Rf=0.4),提取并分离菱角中具有抗肿瘤作用的活性成分,经质谱法(MS)、红外光谱法(IR)及核磁共振法(1HNMR、13CNMR)对分离得到的纯品进行了结构鉴定,确定该化合物为3,4,5-三羟基苯甲酸的二聚体,同时采用四甲基偶氮唑盐(MTT)还原法、光学显微镜及透射电子显微镜等方法对其抗癌机理进行初步探讨,实验结果表明,该化合物具有诱导肿瘤细胞凋亡的抗肿瘤作用.

几种瑶药的体外抗病毒活性初步研究

对瑶药中蕨类植物药翠云草、半边旗、白毛蛇、海金沙草的提取物的体外抗病毒活性进行初步的筛选.采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT assay)和细胞病变抑制法(CPE reduction assay),对这4种植物药的水提物、醇提物及醇提物的各萃取部位进行体外抗单纯疱疹病毒(HSV-1)、柯萨奇B组3型病毒(Cox B3)的活性测定.结果:这4种植物药对HSV-1或Cox B3都有一定的体外抑制作用,其中翠云草醇提物的乙酸乙酯萃取部位具有较好的体外抗HSV-1和Cox B3活性,半数抑制质量浓度(IC50)分别为12.5和6.25μg/mL,选择性指数(SI)分别为8.3和20;半边旗醇提物的石油醚部位具有较好的体外抗HSV-1活性,IC50为6.25μg/mL,SI为61.通过对翠云草、半边旗、白毛蛇、海金沙草的抗病毒筛选,发现翠云草的乙酸乙酯部位和半边旗的石油醚部位具有较好的抗病毒活性.

几种医用材料的细胞生物相容性评价的实验研究

目的 :通过 2种体外细胞毒性试验研究 ,评价几种生物材料的细胞生物相容性。方法 :依据ISO 10 993 1.1997及GB/T 16886.1 1997,应用琼脂覆盖法和四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法对聚丙烯酰胺水凝胶、壳聚糖和类金刚石等 5种生物材料的细胞毒性进行评价。通过建立MTT比色法的L92 9细胞生长代谢标准曲线 ,确定了 96孔板适宜的细胞接种数。结果 :5种生物材料MTT试验中毒性级均为 0级 ,琼脂覆盖法中材料周围及脱色区内细胞溶解评价 (Z/L值 )均为 0 / 0。结论

依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的内环境影响因素

目的:观察内环境因素(pH和甘氨酸及离子浓度)对依达拉奉抗神经元缺血性损伤作用的影响。方法:大鼠原代培养皮质神经元,在不同的实验溶液(模拟缺血后脑内环境的变化)以缺氧缺糖(oxygen-g lucose deprivation,OGD)3 h和再灌12 h诱导皮质神经元损伤,以噻唑蓝(MTT)还原反应和乳酸脱氢酶(LDH)释放观察损伤变化。观察不同实验溶液对抗脑缺血药物依达拉奉抗缺血性损伤作用的影响。结果:在弱碱性(pH 7.8)或含甘氨酸(10μm o l/L)的实验溶液中,OGD损伤加重;在弱酸性(pH 6.5)或高M g2+(1.8 mm o l/L)条件下,OGD损伤减轻。依达拉奉(1μm o l/L)能逆转在pH 6.1、7.4、7.8或含甘氨酸溶液中OGD损伤;而对pH 6.5、高M g2+或低Ca2+溶液中的OGD损伤未显示保护作用。结论:内环境因素改变可影响缺血性损伤程度和依达拉奉抗损伤作用。

Earle's液与MEM培养基对神经元活性的影响

目的 观察Earle's液、新配最小必需培养基(MEM)及原 MEM对神经元活性的影响。方法 神经元培养 10 d后,分别换为Earle's液、新配MEM及原MEM,12 h和 24 h后用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒测定细胞的 LDH漏出量,四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法测定MTT代谢率。结果 神经元在不同培养介质中孵育 12 h和 24 h后,细胞 LDH的漏出量及 MTT代谢率有非常显著性差异( P <0.01)。结论 不同孵育液对神经元的活性有影响。

microRNA-107在喉癌组织中的表达及临床意义

目的检测microRNA-107(miR-107)在喉鳞状细胞癌中的表达,初步探讨其在喉鳞状细胞癌发病中可能发挥的作用。方法收集40例喉癌及其癌旁临近正常组织标本,运用RT-qPCR检测miR-107的表达水平,并分析其表达与喉癌患者临床病理特征的相关性。在人喉癌细胞系TU212及TU686中过表达和敲减miR-107,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)方法检测其对喉癌细胞增殖能力的影响。结果miR-107在喉癌组织中的表达低于其临近正常组织,差异有统计学意义(P<0.05),miR-107的表达水平与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移和原发部位均有相关性(P<0.05)。细胞实验结果显示,过表达miR-107后喉癌细胞的增殖能力下降(P<0.05);而敲减miR-107后细胞增殖能力增强(P<0.05)。结论miR-107在喉癌中表达下调,其低表达与喉癌细胞增殖效率密切相关,miR-107可能在喉癌患者体内扮演着抑癌基因的角色。

黄独乙素抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖作用

目的研究黄独乙素(Diosbulbin B)对人胃癌SGC-7901细胞增殖的体外抑制作用。方法 MTT法测定黄独乙素对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 10、20、40、80μmol/L的黄独乙素作用24 h后对SGC-7901细胞增殖抑制率分别为12.48%、30.10%、43.02%和51.41%,半数抑制浓度(IC50)为(64.09±1.81)μmol/L。结论黄独乙素在体外对人胃癌SGC-7901细胞增殖有明显的、呈剂量依赖性的抑制作用。

新型压电陶瓷材料钛酸铋钠的体外生物相容性研究

目的：通过体外实验对钛酸铋钠（ BNT）基无铅压电陶瓷进行生物相容性评价。方法：将BNT组、铌酸锂钠钾组、聚甲基丙烯酸甲酯组及空白对照组与人成骨样细胞进行复合培养，应用扫描电镜、四唑盐比色法观察材料对成骨样细胞形态及增殖的影响。结果：成骨样细胞在实验材料上可很好地黏附、增殖和生长。 BNT组在实验第1~9天光密度值均高于铌酸锂钠钾组、聚甲基丙烯酸甲酯组和空白对照组（P〈0.01）。结论：新型钛酸铋钠基无铅压电陶瓷初步显示了良好的体外生物相容性，有望成为一种新的生物材料。

Anticancer Activity of Total Flavonoids Isolated from Xianhe Yanling Recipe(仙鹤延龄方)

Objective：To investigate the anticancer activity of the total flavonoids isolated from a herbal formula,Xianhe Yanling Recipe（仙鹤延龄方）,a recipe commonly used in cancer patients in China.Methods： The in vitro anticancer activity of the total flavonoids was determined using the 3-（4,5-dimethylthiazole-2-yl）-2,5- diphenyltetrazolium bromide（MTT） assay on three cancer cell lines：MCF-7（a human breast adenocarcinoma cell line）,HepG-2（a human hepatocellular carcinoma cell line） and ES-2（a human ovarian cancer cell line）. The in vivo anticancer effect of the total flavonoids was assessed in a mouse tumor model bearing H22-induced hepatocellular carcinoma,and cisplatin was used as a positive control.Results：The total flavonoids exerted a powerful inhibitory effect on the three cell lines,with 50%inhibiting concentrations（IC_（50）） of 24.948,31.569 and 6.923μg/mL,respectively.In vivo studies showed that the total flavonoids had dose-dependent inhibitory effects on hepatocellular carcinoma in mice.Conclusion：The total flavonoids from Xianhe Yanling Recipe have potential anticancer activity,and further researches and development are warranted.