茶树甲羟戊酸激酶基因CsMVK克隆及表达特性分析

【目的】克隆茶树甲羟戊酸激酶基因(Cs MVK),分析其生物学信息及在不同组织及乌龙茶做青过程中的表达特性,为研究茶叶加工过程中香气形成机制提供参考。【方法】RT-PCR扩增Cs MVK基因,应用生物信息学软件对其编码蛋白(Cs MVK)的氨基酸序列进行预测分析,通过实时荧光定量PCR(q PCR)分析Cs MVK在茶树不同组织及乌龙茶做青过程中的表达特性。【结果】克隆获得的Cs MVK基因(Gen Bank登录号MF668187)全长1455 bp,开放阅读框(ORF)长度为1164 bp,编码387个氨基酸,蛋白质分子量41.18 k D,理论等电点(p I)5.88。Cs MVK蛋白具有GHMP_kinases_N domain和GHMP_kinases_C domain 2个功能结构域,定位于细胞质中,不存在跨膜结构和信号肽。系统发育进化树分析结果显示,Cs MVK与三七、常春藤的MVK聚为一类,表明茶树与三七、常春藤的亲缘关系最近。q PCR检测结果显示,Cs MVK基因在果实中的表达量显著高于其他组织(P<0.05,下同),在不同组织中的表达量排序为:果实>根>叶>茎>花;在乌龙茶做青过程中,从鲜叶到晒青叶,Cs MVK基因的表达量上升,晒青到一摇过程中表达量下降,经过3次摇青,其表达量持续升高并在杀青前达最大值,与其他做青阶段差异显著。【结论】Cs MVK基因表达与茶叶香气品质形成有关。

大戟科植物MVK基因家族的全基因组鉴定与分析

基于已公布的基因组和EST数据,对蓖麻、麻疯树、木薯和橡胶树4种大戟科植物的MVK基因家族进行系统鉴定,并在此基础上分析其基因结构与进化关系。结果表明,这4种植物均含有2个MVK基因,所有基因均含有4个内含子。同源分析表明,MVK广泛存在于各种古细菌、真细菌和真核生物中,显示出较早的起源;虽然MVK在大多数基因组已测序的物种中主要以单拷贝的形式存在,但在所研究的4种大戟科植物中均出现了基因加倍现象,这与玉米和杨树类似。基因表达谱分析显示,在蓖麻的叶片、花、II/III期胚乳、V/VI期胚乳和种子等组织中,RcMVK1的表达丰度总体高于RcMVK2;虽然2个基因表达丰度最高的组织均为II/III期胚乳,但丰度最低的组织却分别为种子和叶片。

播散性浅表性光化性汗孔角化症MVK基因突变检测

目的:检测2个中国汉族播散性浅表性光化性汗孔角化症(DSAP)家系患者MVK基因突变。方法:提取2个DSAP家系及100名无亲缘关系的健康对照外周血DNA,采用PCR扩增患者MVK基因的全部外显子及其侧翼序列,用Sanger测序法对PCR扩增产物直接测序检测基因突变。结果:发现1个新的剪切位点突变(c.1040-2A>C)和1个已报道的错义突变(c.1094T>C)。结论:本研究进一步证实MVK基因突变与DSAP发病相关。

播散性浅表性光化性汗孔角化症MVK基因突变分析

目的:检测12例中国汉族播散性浅表性光化性汗孔角化症(DSAP)患者MVK基因突变位点。方法:对中国汉族6个家系和6个散发DSAP患者及100名无亲缘关系的健康对照血样,提取外周血DNA,PCR扩增样本MVK基因的全部外显子及其侧翼序列,Sanger测序法对PCR扩增产物进行测序。结果:在2个家系和1例散发患者中分别检测到c.566C>T,c.722G>T和c.207_208delAC突变位点。结论:MVK基因与DSAP的发病有关。

斑块型汗孔角化症一家系MVK基因突变检测

目的:检测1家系7例中国汉族斑块型汗孔角化症(PM)患者MVK基因上的突变位点。方法:收集家系成员7例患者及2名正常成员的临床资料及血液样本,提取外周血DNA,PCR技术扩增MVK全部外显子及其侧翼序列,并采用Sanger测序法对纯化后的PCR产物进行检测。并将检测结果与既往测得676名健康对照的全部外显子进行对比。结果:在7例患者中检测出突变位点(c.604G>A),此突变曾在播散性浅表性光化性汗孔角化症(DSAP)患者中报道。正常家系成员及健康对照中未检测到此突变。结论:本家系中MVK基因突变(c.604 G>A)与PM发病有关,且为DSAP与PM的共同突变位点。

橡胶树HbMVK启动子的克隆与缺失表达分析

为了研究橡胶MVK基因启动子精细结构及功能,笔者利用PCR技术对橡胶树HbMVK基因启动子进行了克隆,并对其进行了生物信息学分析。结果表明,该启动子序列全长1 696 bp,包含CAAT-box,TATAbox,CAT-box,LTR,GARE-motif,TCA-element等元件。此外,根据元件分布,构建橡胶树HbMVK基因启动子系列缺失和全长序列表达载体并转化拟南芥。T2代转基因拟南芥中,报告基因GUS组织化学染色结果表明:HbMVK启动子全长序列和5'端-1 386 bp缺失,HbMVK启动子驱动的GUS基因只在转基因拟南芥实生苗胚轴中有极微弱表达。5'端-1 221 bp和-725 bp缺失,HbMVK启动子驱动GUS基因表达的活性较强,而5''端-325bp缺失,HbMVK启动子则完全失去活性,这表明启动子核心调控元件位于-725 bp到-325 bp之间。

一例甲羟戊酸激酶缺乏导致的高IgD综合征患儿的MVK基因变异分析

目的探讨甲羟戊酸激酶缺乏症的临床表型及遗传学特点,明确其可能的致病原因。方法应用高通量测序进行trio全外显子组测序。应用Sanger测序对检出的变异进行验证。结果测序结果显示患儿MVK基因存在c.248C>T(p.Phe83Cys)和c.971C>T(p.Ala324Val)复合杂合变异,父亲携带c.248C>T(p.Phe83Cys)杂合杂合变异,母亲携带c.971C>T(p.Ala324Val)杂合变异,2个变异均未见报道。根据根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,这2个变异均判定为可能致病变异(PM1+PM2+PM3+PP3)。结论MVK基因c.248C>T(p.Phe83Cys)和c.971C>T(p.Ala324Val)复合杂合变异可能为患儿的致病原因,新变异的检出丰富了MVK基因变异谱。

RODOS系统中RIMPUFF模型的验证与比对

采用MVK工具的统计分析方法并结合实际的示踪气体试验数据集对RODOS系统中的大气扩散模型RIMPUFF进行了验证,并与其他4个模型的结果进行了比对。结果表明,RIMPUFF模型在20km范围内的预测结果比较符合实际;与其他模型相比,其性能良好。

甲醛 丙酮催化缩合合成甲基乙烯基酮

以硅胶为催化剂,丙酮和甲醛可经常压缩合反应合成甲基乙烯基酮。本文探索研究了催化剂添加组份和硅胶细孔平均孔径对缩合反应的效应。实验结果表明,选用适当的硅胶催化剂,在适宜的反应条件下,产物甲基乙烯基酮收率可达65％以上,反应选择率可接近90％。并且硅胶可多次再生,重复使用,催化活性并无明显减退。

双下肢浅表播散型汗孔角化症一例基因突变检测

目的:检测一例局限于双下肢的散发浅表播散型汗孔角化症患者致病基因突变。方法:提取患者外周血DNA,在IlluminaHiSeq测序平台进行全基因组外显子测序,将测序结果与既往报道的汗孔角化症致病基因比对,采用Sanger测序对发现的突变位点在100例患者中进行验证。结果:最终将DSP的致病基因锁定为位于12号染色体的MVK基因,检测到10号内含子c.1040-2A>C突变位点,在全部正常对照中未检测到该位点。经检索,该突变为浅表播散型和播散性浅表性光线型汗孔角化症的共同突变位点。结论:本家系中MVK基因突变位点(c.1040-2A>C)与浅表播散型汗孔角化症发病相关。

以Ni/(SiO_2-MgO)为催化剂甲基乙烯基酮气相加氢动力学研究

使用负载型金属镍催化剂对甲基乙烯基酮(MVK)进行了反应动力学研究。于反应温度125—160℃、常压下进行气相加氢试验,导出的动力学方程为: γ_(MVK)=k·P^(0.2)_(MVK)·P_H·P^(-0.5)_(MEK)[mol/g cat·min] 测出表观活化能E_■为44kJ/mol,求得阿累尼乌斯方程式中的指前因子A_0为9.20×10~3。式中γ_(MVK)表示反应速度,k为反应速度常数,P_(MVK)、P_H和P_(MEK)分别表示甲基乙烯基酮、氢和甲基乙基酮(MEK)的分压(atm)。

核事故应急大气扩散模型ARTM验证与评价

[目的]针对国内外普遍关注的核事故应急决策支持与事故后果评价的问题,围绕目前验证、评价大气扩散模型的两个主要困难。[方法]应用目前国际上应用广泛的KINCAID示踪实验数据集和MVK模型验证评价方法,验证了评价放射性核素大气扩散模型ARTM(Atmospheric Radionuclide Transport Model)。[结果]统计结果表明:ARTM的模拟结果基本上是可信赖的,3 km内的预测有低估的趋势,5 km外的预测有高估的趋势。[结论]ARTM模型总体上可以应用于核电厂事故后果评价。

牛血清蛋白催化Michael-Aldol串联反应的研究

首次报道了牛血清蛋白(BSA)催化二苯甲酰甲烷和丁烯酮的Michael-Aldol串联反应,并对1,3-二羰基化合物进行了研究,丁烯酮与α,β-不饱和酮酯化合物只生成一分子Michael及双分子Michael加成产物,该方法为合成环状化合物提供了新的途径。

武广客运专线隧道内悬挂吊柱安装问题探讨

针对武广客运专线区间线间距5m的双线隧道内采用上下行分别进行吊柱悬挂的形式,在施工及准备阶段遇到关于吊柱长度选型及吊柱限界误差确定的技术问题进行了理论分析,并将分析结果应用在施工中,解决了施工难题,对今后客运专线设计、施工有一定指导意义。

干细胞移植治疗甲羟戊酸尿症1例并文献复习

对2019年3月首都儿科研究所附属儿童医院风湿免疫科收治的1例行干细胞移植(SCT)治疗的甲羟戊酸尿症(MA)患儿临床资料进行回顾性分析。患儿,女,2岁11个月,以"反复发热2年11个月,双膝关节肿胀9个月"就诊,且存在特殊面容及发育落后,炎症指标、尿甲羟戊酸增高,全外显子检测示MVK基因复合杂合突变,c.439G>A(p.A147T),c.976G>A(p.G326R)。托珠单抗治疗部分有效后接受SCT治疗获得完全缓解。文献复习发现39例MA患儿,多婴幼儿期起病,全身各系统均可受累,神经系统异常、反复发热、肝脾大、体格发育落后、消化道症状、眼部受累对诊断MA有提示意义。10例(包括本例)MA患儿于其他治疗部分有效后接受SCT治疗,7例获得完全缓解。本病例提示对于常规治疗未能获得完全缓解的MA,SCT可能为一种有效治疗方法。

北京市植物排放的异戊二烯对大气中甲醛的贡献

2006年3-11月期间利用2,4-二硝基苯肼涂敷的硅胶柱采集了北京市大气中的羰基化合物,并使用高效液相色谱（HPLC）的方法测定了甲醛及异戊二烯光氧化特征产物：甲基乙烯基酮（methyl vinyl ketone,MVK）和甲基丙烯醛（methacrolein,MACR）的大气浓度.研究发现北京市大气中MVK和MACR具有明显的季节变化和日变化：在植物生长季节的4-10月,可在大气中检测出MVK和MACR,它们在大气中的浓度（体积分数）的月平均范围分别为0.11×10^-9-0.67×10^-9和0.19×10^-9-1.36×10^-9,日最高浓度均出现在10：00-14：00（4月除外）,8月的浓度达到最高;3月和11月的大气中未检测出MVK和MACR,可能是因为植物处于枯叶期,异戊二烯的排放较少.本研究通过异戊二烯与其光氧化产物MVK、MACR和甲醛之间的转化产率关系,先利用测定的MVK和MACR的大气浓度反演在光氧化过程中损失的异戊二烯的大气浓度,然后估算异戊二烯光氧化对甲醛形成的贡献量.估算结果显示,4-10月,异戊二烯光氧化所产生的甲醛浓度（体积分数）范围为0.35×10^-9-2.50×10^-9,占北京市大气中甲醛总量（在大气中的体积分数范围为5.49×10^-9-22.04×10^-9）的4.6%-11.5%,在大气光化学活跃的夏季（6-8月）植物排放的异戊二烯对大气中甲醛贡献尤为显著.本研究证实了北京市区植物排放异戊二烯对大气光氧化剂形成有重要贡献.

甲羟戊酸激酶缺乏症

甲羟戊酸激酶缺乏症(MKD)是一种罕见的自身炎症性疾病,属常染色体隐性遗传病。根据甲羟戊酸激酶(MVK)活性和临床表现不同,MKD又分高Ig D伴周期性发热综合征(HIDS)和甲羟戊酸尿症(MA)两种亚型。文章系统阐述MKD发病机制、临床表现、诊断标准、治疗原则及预后,以提高临床医生对疾病的认识。

负压刀预防肝切除手术并发症的作用

负压刀(MVK)是一种专门用于肝切除的手术器械,我院使用负压刀施行肝叶切除术48例,与同期传统手工肝切除(TOK)方法相比术后并发症明显减少,提高了治愈率,报告如下.

铜锰镧铈复合催化剂的制备及其降解对二甲苯的机制

采用溶胶凝胶法制备了镧掺杂的铜锰镧铈催化剂,研究了其对对二甲苯的催化性能.通过BET、SEM、H_(2)-TPR、XRD和XPS等对不同元素比例的催化剂进行表征,探讨了催化剂结构和性能的关系;同时,研究了不同影响因素(初始浓度、空速、O_(2)含量和混合物)对其催化氧化性能的影响;最后,利用FT-IR、XRD和GC-MS对降解产物进行分析,探究了其催化降解对二甲苯的机理.结果表明,La掺杂增加了催化剂的比表面积和孔体积,以及表面氧含量,抑制了晶体形成,增强了催化活性.Cu-Mn-La-Ce(1∶2∶1∶1)催化剂性能最好,在初始浓度为600 mg·m^(-3),空速为15000 h^(-1),20%O_(2)的条件下,其T90为230℃.对二甲苯的降解率随着初始浓度、空速的增加而降低,随着O_(2)含量的增加而增加.气流中混入苯提高了对二甲苯的降解率.对二甲苯催化反应后催化剂表面的O—H、C=0、C—H和金属—氧键都相应减少,降解中间产物主要为对甲基苯甲醛和对甲基苯甲酸.降解反应涉及MVK机理,对二甲苯先氧化成对甲基苯甲醛,再氧化成对甲基苯甲酸,最终生成CO_(2)、H_(2)O.