应用单克隆抗体AC-ELISA检测鸡蛋卵黄中鸡毒支原体

采用抗鸡毒支原体阳性血清包被酶标板作为捕捉抗体 ,以 4株鸡毒支原体特异单克隆抗体作为第二抗体和酶标羊抗鼠IgG作指示抗体建立了一种检测鸡蛋卵黄中鸡毒支原体的双夹心AC_ELISA。该法具有简便、灵敏、快速等优点 ,从采样到获得结果 6小时内完成。检出率高于分离培养法 ,且重复性良好。该方法的建立为鸡群鸡毒支原体感染的检测和净化提供了一种新的可靠方法。

Development of a Polyclonal Antibody-based AC-ELISA and Its Comparison with PCR for Diagnosis of Canine Parvovirus Infection

A polyclonal antibody-based antigen-capture ELISA （AC-ELISA） has been developed for detection of Canine parvovirus （CPV） antigens in faecal samples of dogs. The assay uses rabbit anti-CPV polyclonal antibody as the capture antibody, guinea pig anti-CPV polyclonal antibody as tracing antibody and anti-guinea pig HRPO conjugate as the detection system. The optimum dilution of the capture antibody and the tracing antibody capable of detecting the CPV-2 antigens was found to be 1：1 600 and 1：400, respectively, in the check-board titration. In this study, a total of 152 samples （129 faecal samples and 23 cell culture supernatant） were tested both by AC-ELISA and by polymerase chain reaction （PCR）. Of the samples tested, 69 and 78 samples were found positive by AC-ELISA and PCR, respectively. The AC-ELISA had relative sensitivity, relative specificity and accuracy of 88.4%, 100.0% and 91.4% respectively. The analytical sensitivity of AC-ELISA was estimated to be 102.8 TCID50/mL whereas PCR sensitivity was 100.8 TCIDs0/mL. The AC-ELISA is a simple, quick and reliable method for screening large numbers of faecal samples of dogs suspected of CPV infection.

T. pyogenes PLO蛋白单克隆抗体的制备与AC-ELISA方法的建立

为了建立可以定量检测化脓隐秘杆菌(T.pyogenes)培养上清液中PLO蛋白含量的方法,试验首先制备针对毒力蛋白PLO分子第4结构域(D4)的单克隆抗体,然后应用筛选出的最佳捕获抗体,并结合辣根过氧化物酶(HRP)标记的靶向PLO分子第2结构域(D2)的单克隆抗体(HRP-AP-1A3)建立一种用于检测PLO蛋白含量的抗原捕获ELISA(AC-ELISA)方法,计算该方法的检测线,选择8种非T.pyogenes菌株验证该方法的特异性,绘制AC-ELISA方法的标准曲线,并应用该方法定量检测T.pyogenes HLJ-0912菌株培养上清液中wtPLO蛋白含量。结果表明:通过制备获得的5种单克隆抗体2G3、3G10、4C9、3C8、3C7对PLO蛋白均具有良好的特异性,其中单克隆抗体2G3、3G10、4C9、3C8是IgG2b亚型,均具有较强的抗溶血活性,靶向表位1(VEAGEATGLAWDPWWT);而单克隆抗体3C7是IgG1亚型,抗溶血活性非常弱,靶向表位2(KGTTLNPWVEDNVKS)。筛选出的最佳捕获抗体为单克隆抗体2G3,建立的AC-ELISA方法的最低检测限(OD_(450)值)为0.19。应用建立的AC-ELISA方法检测T.pyogenes HLJ-0912菌株的培养上清液为阳性,OD_(450)值为0.21;检测8种非T.pyogenes菌株的培养上清液均为阴性,OD_(450)值<0.19。标准曲线的方程为y=809.04x^(2)-85.695x,相关系数(R^(2))为0.999,拟合度较高。经AC-ELISA方法测定,在10,12,14小时时采集的T.pyogenes菌株培养上清液的OD_(450)值均高于最低检测限,培养上清液中的wtPLO蛋白含量分别为416.67,499.43,272.57 ng/mL。说明试验成功制备了针对PLO分子第4结构域的单克隆抗体,建立的AC-ELISA方法具有良好的特异性。

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的研究 Ⅱ．AC─ELISA方法的建立

将所制备的腹水单抗ＡＢ７、ＢＧ９经硫酸铁盐析、透析，再经ＤＥＡＥ－纤维素柱层析纯化后，采用戊二醛二步法用辣根过氧化物酶标记单抗，建立了用于鉴别传染性法氏囊病病毒抗原型的ＡＣ－ＥＬＩＳＡ方法，并对国内的６个分离株及美国变异株１０８４Ａ进行了检测，结果表明，上述国内分离株均含有ＣＪ８０１株相一致的ＡＢ７、ＢＧ９位点，而１０８４Ａ株缺失ＡＢ７位点。

巨细胞病毒感染捕获ELISA分析方法的建立和应用

目的 :建立CMVIgM抗体捕获ELISA法并用聚合酶链反应 (PCR)技术对此方法进行了评价。方法 :采用巨细胞病毒 (CMV)AD— 16 9株感染人胚肺细胞的方法制备CMV抗原 ,并采用冻化抗原制备法及甘氨酸法制备抗原 ,羊抗人IgM (μ链 )McAb包被酶标板 ,建立CMVIgM抗体捕获ELISA法。结果 :不同浓度抗 μ链McAb包被 ,包被时间、包被液、封闭液等不同条件 ,以及抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对此法的建立有不同的影响。PCR法与用最佳条件配盒后的本方法CMVIgM抗体检出率无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :本法测定CMV—IgM抗体的敏感性和特异性较高 ,简便、适用 ,易于推广 。

蓝舌病病毒抗原捕获ELISA检测方法的建立

为建立蓝舌病病毒（BTV）病原学检测方法,本研究以纯化的BTV-1免疫绵羊和兔子,制备高免血清。以绵羊抗BTV血清为捕捉抗体、以兔抗BTV血清和羊抗兔Ig G-HRP为检测抗体建立了检测BTV的抗原捕获ELISA（AC-ELISA）方法。该方法能够特异性检测BTV,对羊痘病毒、赤羽病病毒无交叉反应,与鹿流行性出血热鸡胚样品有微量交叉反应,但样品OD450nm/阴性对照OD450nm低于阴阳性临界值,不影响结果判定;敏感性试验检测结果表明该方法可以检出102.79 TCID50的病毒;批内和批间重复性试验变异系数分别为1.44%~8.46%和2.26%~12.44%;采用该方法与RT-PCR方法对60份鸡胚样品进行检测,阳性符合率为90%。本研究建立的AC-ELISA方法为BTV抗原检测提供了一种快速、实用的技术手段。

巨细胞病毒IgM抗体捕捉ELISA法的建立及其应用

建立巨细胞病毒（ＣＭＶ）ＩgＭ抗体捕捉ＥＬＩＳＡ法（ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），并用该法 调查１９１７例杭州市不同人群的巨细胞病毒感染情况。结果显示：抗原浓度、抗ＣＭＶ抗体酶结合物浓度对所测得的标本ＯＤ值都有不同程度的，用最适的实验条件建立的ＡＣ－ＥＬＩＳＡ法检测杭州市不同人群，表明儿童组ＣＭＶ感染率高于成人组，工人组的感染率高于其他职业人群。以本方法测定ＣＭＶ－ＩgＭ抗体的敏感性和特异性较高。

IBD单抗快速诊断试剂盒

河南省农科院畜牧兽医研究所张改平等,以传染性法氏囊病病毒(IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原,免疫BALB/C系小鼠,取其脾细胞与NSO浆细胞进行细胞融合;以AC-ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次有限稀释克隆化及鉴定,获得2株识别IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该2株单克隆抗制备快速诊断试剂,组装了鸡IBD快速诊断试剂盒。