Determination of contents of eight alkaloids in fruits of Macleaya cordata (Willd) R. Br. from different habitats and antioxidant activities of extracts

A reliable ultrasound-assisted extraction （UAE） method combined with HPLC-UV for quantification of eight active alkaloids in fruits of Macleaya cordata （Willd） R. Br. was developed. The optimization conditions of UAE were obtained by using Box-Behnken design of response surface methodology. Chromatography was carried out using a Kromasil C18 column by gradient elution with 0.1% phosphoric acid aqueous solution for HPLC-UV. All calibration curves showed good linear correlation coefficients （R^2〉0.999 6） and recoveries （from 97.3% to 104.9%） were acceptable. 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） method was employed to test the antioxidant activity of the extract from the samples. The proposed method was successfully applied to quantifying eight components in nine samples of M.cordata, and significant variations of alkaloid contents and antioxidant aetivity of the samples from different habitats were demonstrated. It presents a powerful proof for the selection of the best sources to extract eight kinds of alkaloids.

Stability of Sanguinarine and Chelerythrine in Macleaya cordata (Willd.) R. Br.

[Objectives]To explore the stability of sanguinarine and chelerythrine in Macleaya cordata(Willd.)R.Br.[Methods]The solubility and stability of sanguinarine and chelerythrine in seven solvents were measured by HPLC.Besides,the effects of water quality,light source,oxidant,temperature,and pH on stability were investigated.[Results]The solubility and stability of sanguinarine and chelerythrine in methanol and ethanol are good;the stability of sanguinarine and chelerythrine in distilled water and rainwater is not affected by light and is very stable,but they are unstable in tap water whether they are protected from light or not;oxidants have a great influence on the stability of sanguinarine and chelerythrine;sanguinarine and chelerythrine are stable at room temperature lower than 54℃;sanguinarine is stable in pH 2.5-7.0,while chelerythrine is stable in pH 2.5-8.0.[Conclusions]The good stability of sanguinarine and chelerythrine under specific conditions shows that they have broad development prospects and value.

博落回鲜叶中生物碱类化学成分的分离与结构鉴定

目的:研究博落回叶的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构。结果:从博落回新鲜叶的乙醇提取物中分离纯化得到14个生物碱,分别鉴定为:原阿片碱(1)、别隐品碱(2)、血根碱(3)、白屈菜红碱(4)、去甲基白屈菜红碱(5)、去氢紫堇碱(6)、N-甲基四氢黄连碱(7)、黄柏碱(8)、6-甲氧基去甲基血根碱(9)、6-氰基二氢血根碱(10)、6-氰基二氢白屈菜红碱(11)、6-丙酮基二氢血根碱(12)、二氢血根碱(13)、二氢白屈菜红碱(14)。结论:其中化合物5~9为首次在博落回属植物中分离得到。

基于质谱示踪研究博落回根的化学成分

目的:研究博落回根的化学成分。方法:采用LC-MS确定分离目标,运用硅胶柱层析以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构。结果:从博落回根的乙醇提取物中分离纯化得到8个化合物,分别鉴定为:6-hydroxymethyldihydrosanguinarine(1)、7-去甲基二氢白屈菜红碱(2)、四氢非洲防己胺(3)、四氢小檗红碱(4)、hunnemannine(5)、白藜芦醇(6)、对羟基苯甲醛(7)、2,2-二甲氧基乙酸(8)。结论:8个化合物均首次在博落回属中分离得到。

基于HPLC-Q-TOF/MS技术鉴定博落回叶中化学成分

目的快速获取博落回叶中的生物碱组分信息。方法应用HPLC-Q-TOF/MS技术鉴定博落回叶的化学成分。结果从博落回叶的甲醇提取物中鉴定了19个化合物,包括17个生物碱（3个苯并菲啶类、1个二氢苯并菲啶类、2个苄基异喹啉类、2个原小檗碱类、5个四氢原小檗碱类、3个普罗托品类和1个氮甲基-四氢原小檗碱类生物碱）、2个黄酮类化合物（1个黄酮苷和1个槲皮素）。结论化合物1~6,8首次在博落回中报道。

博落回不同部位提取物对大肠菌群的抑菌作用研究

研究了博落回提取物对大肠菌群的抑制作用。本实验以大肠杆菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌为指示菌,采用牛津杯法筛选对三种指示菌有最佳抑制作用的博落回组织粗提物;对抑菌效果好的粗提物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,采用滤纸片法筛选出抑菌活性最高的萃取物,并测定其最小抑制浓度和最小杀菌浓度。实验结果表明博落回不同部位粗提物有抑制指示菌的活性,其中以博落回根部提取物的抑菌活性最佳;根部萃取物抑菌实验结果表明正丁醇萃取物对三种指示菌均有较好的抑制效果,抑菌圈直径均在12 mm以上,远高于粗提物,对大肠杆菌,其最小抑制浓度和最小杀菌浓度分别为400、600μg/m L,对产气肠杆菌与阴沟肠杆菌,其最小抑制浓度均为500μg/m L,最小杀菌浓度均为700μg/m L。博落回根部提取物对上述三种指示菌均有抑制作用,尤其以正丁醇萃取物的抑菌效果最佳。

超临界CO_2流体萃取博落回总生物碱的研究

目的从博落回中提取生物碱,为博落回生物碱的提取、纯化提供方法和依据。方法采用超临界CO2结合使用甲醇、乙醇、丙酮作为夹带剂和Na2CO3碱化处理原料研究对生物碱提取率及提取物中总生物碱的影响。通过元素分析,计算提取生物碱的平均相对分子质量,获得各种提取条件下对生物碱分子的提取能力。结果在318.15K、35MPa条件下,相对于单纯使用超临界CO2萃取,使用甲醇作为夹带剂和Na2CO3碱化剂可使生物碱的提取率从0.0436%提高到0.2019%,提取物中生物碱的质量分数从12.5%提高到20.03%,提取生物碱的平均相对分子质量从334.63提高到400.03。结论超临界CO2中夹带甲醇或乙醇可以提高对生物碱的提取能力,丙酮的影响很小;碱化处理原料,可以使超临界CO2及其夹带剂提取更大相对分子质量的生物碱物质。

博落回果荚中生物碱的研究

目的:研究博落回果荚的化学成分。方法:采用硅胶柱层析以及制备高效液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱学数据鉴定化合物的结构。结果:从博落回果荚的乙醇提取物中分离纯化得到8个生物碱,分别鉴定为:6-氰基二氢血根碱(1)、6-丙酮基二氢血根碱(2)、6-丙酮基二氢白屈菜红碱(3)、白屈菜红碱(4)、二氢白屈菜红碱(5)、13,14-去氢-N-甲基黄连碱(6)、N-甲基氢化小檗碱(7)、小檗碱(8)。结论:其中,化合物1、6为新的天然产物,化合物7为首次在博落回属植物中报道。

博落回白绢病的病原鉴定及防治

目的:明确博落回根腐病致病菌病原,提出合理的防治措施。方法:运用致病菌形态学观察、致病菌内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析生开展鉴定研究,针对致病菌的生物学特性分析其防治策略。结果:通过形态学和分子生物学鉴定证明病害为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii sacc.)导致的白绢病,防治方法需要以生物防治为主,最终实现白绢病安全、有效防控。结论:通过研究证明博落回的病害为白绢病,提出了安全有效地防治策略,能够保证药材的品质,保护生态环境。

血根碱酊剂体外抗真菌初步研究

通过分析博落回(Macleaya cordata(willd)R.Br.)提取物——血根碱(制成血根碱酊剂)、总生物碱对须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)、玫瑰色毛癣菌(Trichophyton rosaceum)、许兰黄癣菌(Trichophyton schoenlei-ni)、红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)几种皮癣真菌的抑菌试验,以探讨血根碱酊剂和总生物碱对皮癣致病真菌的抑制作用。结果表明:血根碱酊剂对须癣毛癣菌、许兰黄癣菌的最小抑菌浓度为16μg/mL,对玫瑰色毛癣菌的最小抑菌浓度为128μg/mL,对红色毛癣菌的最小抑菌浓度为64μg/mL;在含等量血根碱的条件下,血根碱酊剂的抗皮癣真菌效果比博落回总生物碱好。血根碱酊剂具有良好的抗真菌效果,可用于治疗脚癣。

博落回药材的提取工艺研究

目的研究博落回药材的提取工艺。方法采用正交试验法,以白屈菜红碱得率及固形物含量为指标,考察乙醇浓度、提取温度、pH3个因素对博落回提取工艺的影响。结果优化的博落回提取工艺为A2B1C2,即取博落回药材,以80%乙醇提取,调节pH=5.0,60℃温浸提取。结论该最佳工艺可行。

博落回急性及亚慢性毒性试验

博落回对小鼠经口急性毒性和对大鼠腹腔注射亚慢性毒性试验结果表明:博落回生物碱硫酸盐对昆明系小鼠的急性毒性为;水溶液LD_(50)=900 mg·kg^(-1),水混悬液LD_(50)=1043 mg·kg^(-1),均属低毒级。博落回注射液对Wistar大鼠亚慢性毒作用的靶器官主要为肝,长时间或大剂量接毒引起肝细胞变性、增生,使雄性动物肝/体比明显增高,而血清谷-丙转氨酶下降。

博落回中苄基异喹啉类生物碱生物合成与代谢工程研究概况

植物生长产生多种多样的次生代谢产物,其中许多还有非常重要的药用价值。但是植物中具有药用价值的次生代谢产物含量较低,而利用微生物代谢工程技术可以为次生代谢产物提供新的药源途径。本文对植物次生代谢产物特别是博落回属植物中苄基异喹啉类生物碱的生物合成以及国内外研究中利用微生物代谢工程技术在酵母中异源表达生产苄基异喹啉类生物碱的研究进展进行综述,同时结合博落回研究进展对未来博落回资源的综合利用进行展望。

中药博落回生物碱提取新工艺研究

通过实验研究,探索博落回中总生物碱的提取新工艺,精制工艺,脱脂工艺,脱毒工艺及用HPLC法测定博落回中血根碱和白屈菜红碱含量.

博落回非生物碱类化学成分研究

目的：研究博落回的化学成分。方法：利用硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20柱等色谱分离技术分离其非生物碱成分,利用MS、NMR等光谱技术鉴定化合物结构。结果：从博落回中分离鉴定了11个非生物碱类化合物,分别为：3-（3,4-二羟基）苯基丙酸甲酯（1）、阿魏酸（2）、正二十八烷醇（3）、丁香酸（4）、对羟基苯甲酸（5）、对香豆酸（6）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（7）、N-p-香豆酰酪胺（8）、10-eicosenoic acid（9）、β-谷甾醇（10）、胡萝卜苷（11）。结论：其中,化合物1、3~9为首次从该植物中分离得到。

博落回中生物碱质谱裂解规律研究进展

博落回中生物碱的代谢途径可简化为:氨基酸→苄基异喹啉类生物碱→四氢原小檗碱型生物碱(或者转化成阿朴芬类生物碱)→N-甲基-四氢原小檗碱型生物碱(或者转化成原小檗碱型生物碱)→普罗托品类生物碱→二氢苯并菲啶类生物碱→苯并菲啶类生物碱→苯并菲啶类生物碱二聚体。对博落回代谢途径中9类生物碱质谱裂解规律的总结,为利用质谱裂解方式初步确定生物碱的结构类型;利用LC-MS鉴定不同产地、不同时期、不同部位博落回中标识性生物碱;以博落回中生物碱为原料而开发的中兽药药动学以及药物残留的研究;解析博落回中微量生物碱的结构式以及对其他天然药物中同类生物碱的质谱研究提供参考。

不同产地博落回果化学成分指纹图谱研究

目的构建博落回Macleaya cordata果化学成分指纹图谱,建立博落回果品质评价方法。方法根据湖南省长沙市地方标准2009年版测定博落回中原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱含量;采用高效液相色谱法构建基于不同产地的博落回果化学成分指纹图谱;利用主成分分析和聚类分析方法,分析博落回果中共有指纹峰、产地和药材品质的关联性。结果构建不同产地博落回果化学成分指纹图谱,确定11个共有指纹峰;主成分分析和聚类分析将8个产地的博落回果分为2大类,其中共有峰5、7、8、9和11对指纹图谱差异贡献较大,6号峰是指纹图谱参照峰的最佳选择。结论本实验建立的博落回果化学成分指纹图谱具有良好的精密度、重复性和稳定性,能够对不同产地博落回果进行品质评价。