哌嗪嘧啶类CCR4拮抗剂的设计、合成及生物活性

基于对已报道的CCR4拮抗剂的构效关系分析,设计并合成了一系列哌嗪嘧啶类化合物.采用细胞趋化抑制实验测试了合成化合物的体外活性,其中化合物8a的活性优于目前报道的活性最好的化合物BMS-397;在小鼠鼻炎模型中,化合物8a以极低的剂量达到了布地奈德(鼻炎临床治疗药物)的治疗效果.采用毛细管电泳法测得化合物8a与CCR4 N端40肽的结合常数为(3.6179±0.5976)×104L/mol.

CCR4与肿瘤的关系及其临床意义

CCR4是CC趋化因子受体(CC chemokine receptor,CCR)家族中的一员,主要表达于多种淋巴细胞。其高亲和力配体为胸腺和活化调节的趋化因子(thymus and activation regulated chemokine,TARC/CCL17)及巨噬细胞衍生的趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC/CCL22/STCP-1)。CCR4主要通过CCR4+Treg细胞及CCR4+Th2细胞发挥免疫效应。CCR4的高表达与多种血液系统肿瘤以及恶性实体瘤的浸润和预后相关,其机制为Treg细胞表面的CCR4通过与其配体TARC、MDC的结合趋化Treg细胞,引起免疫逃逸,从而导致不良临床后果。多种恶性肿瘤转移模型的研究进一步揭示了CCR4与恶性肿瘤转移之间的关系。抗CCR4嵌合型单克隆抗体KM2760的研究已进入Ⅱ期临床试验阶段,阻断TARC/MDC-CCR4信号通路,有可能成为恶性肿瘤分子靶向治疗的新策略。

血清内巨噬细胞衍生趋化因子、胸腺和活化调节趋化因子水平与支气管哮喘临床参数的关系

目的:探讨巨噬细胞衍生趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)、胸腺和活化调节趋化因子(thymus-and activation-regulated chemokine,TARC)与支气管哮喘密切相关的IgE、白细胞介素-5(IL-5)及外周血嗜酸粒细胞计数(eosinophils,EOS)等临床参数的关系。方法:收集支气管哮喘患者112例(特应性皮炎患者除外)、健康人58例(性别、年龄与支气管哮喘患者相匹配,无特应性皮炎)作对照。应用酶联免疫吸附法检测每例患者非急性发作时血清内MDC、TARC、总IgE、IL-5的浓度及健康人血清中MDC、TARC浓度,测定外周血EOS计数。分别评价支气管哮喘患者血清内MDC、TARC水平与总IgE、IL-5及EOS的关系,评价血清内MDC、TARC水平在支气管哮喘患者与健康人之间的差异性。结果:支气管哮喘患者血清内MDC浓度与总IgE、IL-5水平呈正相关(IgE,r=0.243,P=0.013 0;IL-5,r=0.309,P=0.004 0),MDC、TARC血清内浓度与EOS呈正相关(MDC,r=0.388,P=0.000 1;TARC,r=0.275,P=0.042 2)。支气管哮喘患者非发作时血清内MDC、TARC浓度与健康人之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MDC、TARC可能是支气管哮喘有价值的临床生物学标志物,在支气管哮喘的发病机制中起着重要作用。

壹期矽肺患者血清8-iso-PGF2α、T-AOC和MDC水平变化

目的探讨壹期矽肺患者血清中8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)、总抗氧化能力(T-AOC)和巨噬细胞衍生趋化因子(MDC)水平变化及意义。方法采用酶联免疫吸附法检测58例壹期矽肺(矽肺组)、35例具有与矽肺组相同接尘条件的健康井下接尘矿工(接尘组)和33例非接尘井上健康人员(对照组)血清中8-iso-PGF2α水平;用Luminex流式荧光技术检测血清MDC水平;化学比色法检测血清T-AOC水平。结果与对照组比较,接尘和矽肺组血清T-AOC水平均明显升高,接尘组MDC水平则明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.01);与接尘组比较,矽肺组血清8-iso-PGF2α和T-AOC水平降低,MDC水平升高,差异也具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);矽肺并发慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清T-AOC水平高于单纯矽肺患者(P<0.05);饮酒矽肺患者血清8-iso-PGF2α水平低于非饮酒矽肺患者,差异具有统计学意义(P<0.05);壹期矽肺患者血清T-AOC与MDC呈负相关(r=-0.247,P<0.05)。结论壹期矽肺患者血清8-iso-PGF2α、T-AOC及MDC水平异常,并与矽肺发生发展有关;饮酒可影响壹期矽肺患者血清8-iso-PGF2α水平。

MDC对不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白免疫原性的影响

观察巨噬细胞源趋化因子(macrophage-derived chemokine,MDC)联合不可分型流感嗜血杆菌重组P6蛋白免疫小鼠的免疫效果,探讨MDC的佐剂效应。将50只BALB/c小鼠随机分为5组:P6重组蛋白+MDC,P6重组蛋白,MDC组,P6重组蛋白+IL-2组及PBS对照组,分别于第0 d、14 d、28 d经腹腔免疫3次,末次免疫后14 d,取小鼠血、脾标本,ELISA法检测血清中抗体IgG水平,并分析其脾淋巴细胞IL-10和IFN-γ的产生水平。CCK-8法检测各组脾淋巴细胞增殖活性。结果是小鼠血清IgG水平,P6重组蛋白联合MDC组高于PBS对照组、MDC组、P6重组蛋白+IL-2组及P6重组蛋白组(P<0.05)。P6重组蛋白联合MDC组小鼠特异性脾淋巴细胞刺激指数及其所产生的IL-10、IFN-γ水平均高于PBS对照组、MDC组及P6重组蛋白组(P<0.05)。因此MDC联合P6重组蛋白诱导小鼠的免疫应答优于P6重组蛋白单独免疫,MDC可以作为不可分型流感嗜血杆菌P6重组蛋白的佐剂。

巨噬细胞源性趋化因子对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响

观察巨噬细胞源性趋化因子(MDC)佐剂对NTHiP6蛋白疫苗免疫效果的影响。将原核表达质粒PGEX-6P2/P6转入E.coli XL1-Blue,IPTG诱导P6蛋白的表达并进行纯化。将BALB/c小鼠随机分为A-D四组,分别为PBS对照组、MDC对照组、P6蛋白组、P6蛋白联合MDC组。分别于0、14、28d经黏膜免疫,末次免疫后14d,每组12只小鼠取血和肺泡灌洗液,ELISA检测血清中IgG抗体和肺泡灌洗液中IgA抗体水平。每组取3只小鼠,制备脾淋巴细胞,ELISA检测IL-4、IL-17和IFN-γ水平。用10LD50NTHi攻击每组剩余15只小鼠,观察免疫保护作用。在大肠杆菌中成功表达P6蛋白。第三次免疫后,D组诱导的IgG抗体、IgA抗体、IL-4、IL-17和IFN-γ水平显著高于其他各组(P<0.05)。经NTHi攻击后,D组生存率达80%,与A组、B组相比差异有统计学意义(P<0.05),但C组、D组之间无显著性差异(P>0.05)。MDC作为佐剂可以使NTHiP6疫苗获得较好的免疫效果。