柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。

柔嫩艾美耳球虫抗马杜拉霉素、地克珠利虫株特异消减文库的构建

以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)敏感株孢子化卵囊为驱动组,马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子化卵囊之间差异表达基因的消减cDNA文库。随机从两个消减文库中分别挑取50个克隆,经PCR鉴定马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊的消减文库重组率分别为96%和98%,差异基因片段大小分布在250bp～1.0kb之间。从每个文库中随机挑取65个阳性克隆经斑点杂交试验,分别选择表达量上调的6个克隆进行序列分析和同源性比较。结果发现,有4个cDNA片段可能是新基因片段,与地克珠利抗药株的产生有关;有3个新的cDNA片段可能与马杜拉霉素抗药株的产生有关。这些结果将为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生及发展的分子机理奠定了一定的基础。

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4。另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向。

柔嫩艾美球虫地克珠利和马杜拉霉素抗药株与敏感株孢子化卵囊18 S rDNA基因的差异

为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18 S rDNA的影响,分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株(ETAD)、马杜拉霉素抗药株(ETAM)和药物敏感株 (ETDS)孢子化卵囊的18 S rDNA基因进行了克隆测序,并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示,ETAM株有3个碱基发生突变(T170突变为C,T646突变为C,G694突变为C); ETAD株有1个碱基发生突变(T646突变为C)。经进一步分析比较,发现ETAM株18 S rRNA 的二级结构与ETDS株的差异很大,而ETAD株18 S rRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。

甜菜碱对聚醚类抗生素抗球虫药的增效作用

从中国广东分离的柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）野外抗药株深圳（ＳＺ）株，分别对３种聚醚类抗生素－马杜拉霉素、盐霉素、拉萨里霉素及它们与甜菜碱同时使用的药效情况进行试验。结果发现，添加甜菜碱可提高聚醚类抗生素组的增重，特别是甜菜碱加马杜拉霉素组增重最明显，而对病变记分和卵囊数量无明显影响。

柔嫩艾美耳球虫地克珠利与马杜霉素耐药株的3种同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对柔嫩艾美耳球虫(E imeria tenella)药物敏感株、地克珠利耐药株、马杜霉素耐药株以及2个耐药株重组体的乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸葡萄糖异构酶(GPI)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)同工酶进行了分析.结果显示:在LDH同工酶谱中,敏感株有一条浓带,3株耐药株均没有酶带;在GPI同工酶谱中,敏感株有4条带,地克珠利耐药株有GPI-2和GPI-4,而马杜霉素耐药株和重组体均含有GPI-2、GPI-3和GPI-4;在G6PD同工酶谱中,敏感株有4条带,而3株耐药株均只有G6PD-3和G6PD-4.同工酶分析表明,药物敏感株与3株耐药株之间的3种同工酶均有差异.3株耐药株之间的GPI存在差异,而在LDH和G6PD无差异.

复方马杜霉素防治鸡球虫病的试验观察

用马杜霉素与氯苯胍配合制成复方制剂对人工诱发鸡球虫病进行了药效研究。结果表明复方制剂中剂量组（马杜２．５５ｍｇ／ｋｇ＋氯苯胍３３ｍｇ／ｋｇ）的抗球虫指数（ＡＣＩ）、卵囊值、病变值、血便计分、相对增重率（％）分别为１９５．５１，０，１，０，９６．５１。显著优于其他各试验组。

中药“球康”防治球虫病的研究(一)——球康与AC—1和杜球对试验性鸡感染混合艾美尔球虫的疗效比较

对无球虫雏鸡人工接种艾美尔球虫混合卵囊(E.tenella,E.maxima,E.acervulina),用中药“球康”两个组方与AC—1、杜球进行疗效比较试验,以雏鸡存活率、抗球虫指数作疗效综合评判指标,结果显示:“球康”Ⅰ、“球康”Ⅱ组的雏鸡存活率和抗球虫指数分别为90％、100％和123.6、179.7。AC—1和杜球组雏鸡存活率和抗球虫指数分别为100％、95％和190.9.187,而接种感染不给药组的存活率为0,抗球虫指数50.5。由此表明,初次拟定的中药“球康”两个组方在强毒卵囊的攻击下,表现出有较好的防治效果。

柔嫩艾美尔球虫(永川株)对四种球虫药的敏感性试验

为了测定柔嫩艾美尔球虫（永川株）对四种抗球虫药物（尼卡巴嗪、麦杜拉霉素、拉沙菌素、地地珠利）的敏感性进行了本试验。通过计算各药物组的最适抗球虫活性百分率（ＰＯＡＡ）、病变记分 减少率（ＲＬＳ）、相对盲肠卵囊产量（ＲＯＰ）及抗球虫指数（ＡＣＩ）。综合四项指标，判定结果为：Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ（永川株）对地克珠利高度敏感，对拉沙菌素有轻度抗药性，对麦杜拉霉素有中度抗药性，对尼卡巴嗪有严重抗药性。

甜菜碱与三种抗球虫药配伍的增效比较试验

为研究甜菜碱与抗球虫药物配伍抗球虫病的增效作用,进行了疗效比较试验。用甜菜碱(8×104)分别与球安(125×106)、加福(5×105)和球佳(1×106)配伍的3组药物拌入饲料,治疗人工感染E.tenella的鸡,结果各组的平均体增重分别为83.6g、61g和37.5g;盲肠病变值为5.8、8.0和10;ACI为193.7、158.35和126.875。而单用球安、加福和球佳拌料喂的鸡平均体增重分别为82.6g、42g和74g;盲肠病变值8.75、13.25和6.75;ACI为189.375、99.75和180.75。试验表明:甜菜碱加聚醚类抗球虫药组的平均体增重和ACI值均高于单用药组,尤其甜菜碱加加福组增效显著,但甜菜碱加球佳组疗效却降低。

柔嫩艾美尔球虫(荣昌株)对球佳等三种抗球虫药的抗药性试验

采用鸡体药效试验法测定了柔嫩艾美尔球虫对球佳、球安、加福三种药物的抗药性。试验结果表明：球佳、球安、加福的最适抗球虫活性百分率（poAA）分别为58．po％、78．23％、叨．27％；病变记分减少率（RLS）为100％、72。73％、74．03％；相对盲肠卵鲢产量（ROP）为限26％、577.6％。288．6％。POAA‘PLS显示柔嫩艾美尔球虫对三种药物均无抗药性，而ROP显示对球安、加福有抗药性。综合POAA、RLS、ROP三项参数指标判定柔嫩艾美尔球虫对球佳敏感，对球安、加福有轻度抗药性。

麦杜拉霉素等7种药物对柔嫩艾美耳球虫效力的初步比较试验

对麦杜拉霉素(Maduramycin)、杀球灵(Diclazuril)和拉沙洛菌素(Lasalocid)等7种药物抗鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)进行效力比较试验.每只肉用雏鸡人工感染1×10~5个卵囊,在感染前两天按常用量将药物混入饲料中给予.与对照组相比,7种药物均表现出一定的抗球虫效力.抗球虫指数(ACI)以Maduramycin和Diclazuril最高,分别达到199.8和198.7,显示出极强的抗球虫效力.那拉菌素(Narasin)(186.2)、莫能菌素(Monensin)(184.4)、拉沙洛菌素(Lasalocid)(183)和尼卡巴嗪(Nicarbazin)(180),ACI达到180～186显示具有较高的抗球虫效力.与上述抗球虫药相比,腐霉素(Carriomycin)的效力较差,ACI为169,属中效抗球虫药.

重复使用马杜霉素引起雏鸡中毒

马杜霉素按5ppm拌饲,能有效地预防和治疗鸡的各种球虫病,但超过此浓度就有中毒的危险.本文介绍的是一起因重复添加马杜霉素引起雏鸡严重中毒的病例,共中毒死亡雏鸡17070只,死亡率达34.14%.

猪马杜霉素中毒的病例分析

马杜霉素是一种新型聚醚类离子载体抗生素 ,通过猪病例的临床症状、病理剖检及生物学复制试验 ,用马杜霉素治疗猪球虫病应该注意使用剂量 ,生产实践中使用不当 ,会造成猪马杜霉素中毒。中毒解救时可用抗氧化剂、补液、保肝、广谱抗生素。

马杜霉素和泰妙菌素联合应用对雏鸡血液中微量元素的影响

[目的]研究药物对雏鸡血液中微量元素含量的影响。[方法]将不同剂量的马杜霉素和泰妙菌素添加到雏鸡的饲料和饮水中,比较雏鸡血液中K、Zn、Cu元素含量的变化。[结果]正常推荐剂量的马杜霉素和泰妙菌素联合使用时,雏鸡血液中K、Zn、Cu元素含量变化不大。加倍剂量的马杜霉素会产生中毒反应,与正常或加倍剂量的泰妙菌素联合应用时,雏鸡血液中K、Zn、Cu元素含量升高,使中毒反应显著加强。[结论]高剂量马杜霉素和泰妙菌素联合应用,会使雏鸡产生毒性反应。

几种抗球虫药防治鸡盲肠球虫病的疗效试验

试验对鸡人工接种Etenella孢子化卵囊，在饲料中添加加福、球安、球必清和氯苯胍以比较其防治球虫病的疗效，结果表明：加福、球必清和球安显示有良好的抗球虫效果，对雏鸡的保护率为100％，抗球虫指数（ACI）分别为厂8．27，178．90和168．35；而氯苯胍对球虫病的疗效很差，保护率为25％，抗球虫指数31．98．表明球虫已对氯苯胍产生严重的抗药性。因此，在临床治疗时不宜再选用氯苯胍．可选用聚醚类和苯乙腈类的高效抗球虫药。

马度米星铵对克氏原螯虾鳃组织的毒性

旨在研究马度米星铵对克氏原螯虾鳃组织结构和抗氧化系统的影响。首先采用24 h换水式生物试验研究了马度米星铵对克氏原螯虾96 h急性毒性,在此基础上,设定低（0.7 mg/L）、中（3.5 mg/L）、高（7.0 mg/L）3个马度米星铵剂量组和一个空白对照组,暴露28 d。分别在第7、14和28天从每组随机抽取6只克氏原螯虾,测定鳃组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量（以每毫克蛋白计）,并在28 d时做鳃组织HE染色观察结构变化。结果显示：马度米星铵对克氏原螯虾96 h半数致死浓度（LC50）为70.08 mg/L,95%置信限为58.95-83.31 mg/L。与空白对照组相比,SOD活性中、高剂量组主要表现为先下降后逐渐恢复,低剂量组则是逐渐下降（P〈0.01）;各剂量组CAT活性7 d时稍有上升后逐渐下降,28 d时,各剂量组CAT活性显著低于空白对照组（P〈0.05）;中、高低剂量组MDA含量变化趋势先升高后下降,低剂量组与空白对照组相比则无显著变化（P〉0.05）。各剂量组鳃组织可见明显病理变化,上皮细胞脱落、呈碎片化,微血管腔结构消失,鳃膜结构受损。研究表明马度米星铵对克氏原螯虾为低等毒性。0.7、3.5和7.0 mg/L马度米星铵均可诱导克氏原鳌虾鳃组织的氧化应激,并引起鳃组织结构的严重损伤。