LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的:观察脂多糖(LPS)致大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的作用。方法:LPS作用大鼠AMs后,用电泳迁移率改变分析法(EMSA)测NF-κB活性;用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)后,Western blotting检测p65表达变化;ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。结果:于LPS作用AMs后4h,NF-κB活性达到峰值,24h仍维持在高水平;作用后4h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基(p65)表达后,LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组(P<0.01)。结论:LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。

当归对大鼠心肌梗死后心肌纤维化的影响及机制

目的:观察转化生长因子-β1(TGF-β1)、巨噬细胞在心肌梗死后心肌纤维化发生发展过程中的变化及当归的治疗作用,探讨心肌梗死后心肌纤维化的发生及当归的干预机制。方法:结扎SD大鼠冠脉前降支复制心肌梗死模型,随机分为假手术(sham)组、心肌梗死(M I)组和心肌梗死当归(M I+angelica)组。术后24 h开始给药,M I+angelica组腹腔注射当归(20 mL.kg-1.d-1,相当于生药10 g.kg-1.d-1),sham组和M I组腹腔注射等量生理盐水。于术后1、2、4周记录左室血流动力学改变,检测非梗死区心肌胶原含量、TGF-β1及巨噬细胞的变化。结果:①M I组和M I+angelica组非梗死区心肌TGF-β1及巨噬细胞阳性表达显著高于sham组(P<0.01),以1周的阳性表达为最高,但M I+angelica组低于M I组(P<0.01);②术后各时点M I组心功能受损,于术后2周和4周心肌胶原含量明显高于sham组(P<0.01);术后4周M I+angelica组心功能损害轻于M I组,心肌胶原含量低于M I组(P<0.01)。结论:当归通过抑制巨噬细胞在非梗死区的浸润、下调TGF-β1的表达,阻断促纤维化发生的环节,减轻心肌梗死后非梗死区反应性胶原的过度沉积,防治心肌梗死后心肌纤维化,改善心脏功能。

罗非鱼腹腔巨噬细胞分离与培养

为获得罗非鱼腹腔巨噬细胞体外分离培养条件和培养形态特征,试验在不同饲养温度和时间点注射角鲨烯的奥尼罗非鱼进行腹腔巨噬细胞分离;通过培养基血清筛选和瑞氏染色对分离的巨噬细胞进行了体外培养及其形态观察。结果表明,19～25℃饲养温度有利于腹腔巨噬细胞分离,大于28℃对分离效果有明显影响;注射角鲨烯后48～72 h是分离腹腔巨噬细胞最佳时期;体外培养显示自体血清有利于罗非鱼腹腔巨噬细胞的存活与生长,胎牛血清不适于罗非鱼腹腔巨噬细胞培养。同时,罗非鱼腹腔巨噬细胞体外培养具有哺乳动物巨噬细胞相似特征,形态不规则、核浆比值低、贴壁生长、可形成多核巨大细胞。为下一步研究罗非鱼腹腔巨噬细胞免疫学功能奠定了基础。

山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

目的 探讨山莨菪碱对脂多糖诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）氧化应激损伤的影响。方法 采用支气管肺泡灌洗和细胞差速贴壁的方法分离犬鼠肺泡巨噬细胞，在20μg／mL脂多糖干预基础上，分别给予10^-9-10^-6mol／L山莨菪碱，测定AM培养上清液丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性和乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果 在20μg／mL脂多糖干预基础上，山莨菪碱使大鼠AM培养上清液MDA含量显著降低，SOD、LDH活性显著升高，并且具有浓度依赖性。结论 山莨菪碱对脂多糖诱导的AM脂质过氧化损伤具有一定保护作用，这可能是山莨菪碱防治内毒素引起的肺部炎症反应失控和急性肺损伤的机制之一。

细脚拟青霉多糖诱导小鼠巨噬细胞一氧化氮生成和iNOS mRNA的表达

目的研究单一组分细脚拟青霉多糖(Paecilomyces tenuipespolysaccharide,PTPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节活性及其作用机制。方法应用水提、乙醇沉淀、DEAE-纤维素色谱,对PTPS进行提取并分级;用CCK-8试剂检测PTPS对小鼠脾细胞的增殖作用,硝酸盐还原酶法检测小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成量和RT-PCR半定量法检测iNOS mRNA的表达。结果从细脚拟青霉菌丝体中分离出含糖量为92%的中性多糖PTPS,可促进脾细胞的增殖,并在一定浓度下显示剂量依赖效应;能明显诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的生成和iNOS mRNA的表达。结论PTPS通过诱导小鼠巨噬细胞NO合成和iNOS的转录,表明其具有免疫调节和潜在的抗肿瘤活性。

银杏叶聚戊烯醇对小鼠免疫功能和诱导肿瘤细胞凋亡的研究

用不同剂量银杏叶聚戊烯醇(GP)给正常小鼠和荷瘤小鼠灌胃,用碳粒廓清法分析正常小鼠巨噬细胞吞噬功能;采用流式细胞术(FCM)检测S180荷瘤小鼠的凋亡细胞比率(APO)、S期细胞比率(SPF)和增殖指数(PI)的变化,分析T细胞亚群CD4/CD8比值的影响。结果表明,10和20mg/kg的GP能提高正常小鼠巨噬细胞的吞噬功能,对碳粒的清除作用高于环磷酰胺(CTX);高剂量组(40mg/kg)GP与对照组比较,能增加肝癌(Heps)荷瘤小鼠胸腺指数和艾氏腹水癌(EC)荷瘤小鼠脾指数。5mg/kgGP对S180荷瘤小鼠细胞的APO为6.35,明显高于阴性对照组及其它给药组,使S180荷瘤小鼠CD4/CD8比值接近正常小鼠。

巴马汀对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6表达的影响

目的:观察巴马汀对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细白介素6(IL-6)表达的作用.方法:采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用ELISA法检测IL-6的生成量;采用qRT-PCR法检测IL-6 mRNA的表达.结果:巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6的生成,以及IL-6mRNA的表达,并呈现出浓度依赖性.结论:巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IL-6的生成及IL-6mRNA的表达,从而发挥抗炎作用.

醒脑静注射液对内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞核转录因子-kB激活和细胞因子产生的影响

目的探讨内毒素诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)核转录因子-kB(NF-kB)的激活和细胞因子的释放以及醒脑静注射液(XNJ)的干预作用。方法通过支气管肺泡灌洗获取大鼠AMs。先用XNJ(10ml/L)孵育AMs 2 h后,加入内毒素(10μg/L)分别刺激2、4和6 h。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AMs中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中TNF-α和白细胞介素-8 (IL-8)含量;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测AMs中NF-kB抑制蛋白-α(kB-α)、磷酸化IkB-α(pIkB-α)和NF-kB的水平变化。结果内毒素能增加AMs中TNF-α基因表达水平和培养上清液中TNF-α、IL-8的水平,同时能促进IkB-α降解和NF-kB激活。与内毒素组比较,XNJ能减少AMs中TNF-α基因表达水平和培养上清液中TNF-α和IL-8的水平;抑制内毒素诱导的IkB-α降解和NF-kB激活(P均<0.05)。结论XNJ通过抑制AMs中IkB-α的降解,减少了NF-kB的激活,减少了内毒素诱导大鼠AMs细胞因子的产生。

透明质酸对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌蛋白酶的影响

目的:研究不同大小透明质酸对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(MMPs)的诱导作用及对细胞周围胶原收缩和降解的影响。方法:Wistar大鼠肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,Wistar乳鼠肺组织块培养获取肺成纤维细胞;透明质酸(简称HA)分为4个分子量:100kD、200kD、500kD、1000kD;将两种细胞混悬液分别与胶原溶液、不同分子量的透明质酸溶液混匀形成胶原凝胶后将凝胶漂浮于培养液中连续培养72h;每24h记录凝胶面积;留取第1个24h的培养上清液应用酶联免疫吸附法检测MMPs;72h后收集凝胶,应用分光光度测定法进行羟脯氨酸检测。结果:(1)不同分子量HA都可刺激肺泡巨噬细胞分泌MMP-9、MMP-12和MMP-13,与对照组比差异显著(P<0.05);其中以200kDHA作用最强。(2)不同分子量HA都可刺激肺成纤维细胞分泌MMP-1、MMP-9和MMP-13,与对照组比较,P<0.05;其中以100、200kDHA作用最为显著。(3)凝胶形成后24h,100、200、500kDHA使肺泡巨噬细胞凝胶面积明显缩小,与对照组比较有显著差异(P<0.05),并且这种作用一直持续到72h。(4)凝胶形成后24h,100、200、500kD的HA使肺成纤维细胞凝胶面积明显缩小,与1000kDHA组及对照组比较有显著差异(P<0.05));72h后,100、200kDHA使凝胶面积进一步缩小,与500、1000kDHA组及对照组比较,P<0.05。(5)4种分子量的HA与肺泡巨噬细胞共同孵育72h后,凝胶中羟脯氨酸含量与对照组比较均有显著减少,其中100、200kDHA组羟脯氨酸含量降低最显著(P<0.05)。(6)4种分子量的HA与成纤维细胞共同孵育72h后,凝胶中羟脯氨酸含量与对照组比较均显著减少,且不同分子量之间差异显著(P<0.05)。结论:(1)HA可以刺激大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞分泌多种与胶原降解相关的MMPs;其中200kDHA作用最强。(2)HA可以促进两种细胞凝胶收缩,以100、200、500kD的HA作用最显著。(3)HA可以降解细胞凝胶中的胶原,使其羟脯氨酸含量减低,以100、200kDHA作用最强。

肿瘤相关巨噬细胞促进胃癌上皮-间质转化的机制

目的探讨胃癌中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)促进上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关机制。方法采用免疫组化法检测90例胃癌组织和20例癌旁正常组织中TAMs、TGFβ1及EMT标志物(E-cadherin、vimentin)的表达,并分析其相关性。结果 TAMs和TGFβ1在胃癌中的阳性率均高于正常胃黏膜(P<0.05),且均与Lauren分型、分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移相关(P均<0.05);胃癌中E-cadherin阳性率低于正常胃黏膜而vimentin阳性率高于正常胃黏膜(P均<0.001)当胃癌分化程度为低～未分化、浸润深度达浆膜、临床分期达Ⅲ+Ⅳ期及有淋巴结转移时,E-cadherin表达减少而vimentin表达增加。胃癌中TAMs与TGFβ1表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关,与vimentin表达呈正相关。结论 TAMs可能通过调节TGFβ1促进胃癌EMT,进而促进肿瘤浸润和转移。

决明子蒽醌苷对小鼠免疫功能的调节作用

目的研究决明子蒽醌苷(SCAG)体外给药对小鼠细胞免疫功能的影响。方法将小鼠淋巴细胞或巨噬细胞与不同浓度的SCAG共培养,用二甲氧唑黄(XTT)法测定T及B淋巴细胞的增殖能力、对混合淋巴细胞反应(MLR)的影响、对丝裂霉素C所致淋巴细胞增殖抑制的拮抗作用,用中性红染色法观察SCAG对巨噬细胞吞噬功能、自然杀伤(NK)细胞活性、小鼠脾细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)活性的影响。结果SCAG体外给药可明显促进小鼠T及B淋巴细胞的增殖,增强巨噬细胞吞噬中性红的能力,提高NK细胞活性及分泌TNF活性,并可促进MLR,拮抗丝裂霉素C对淋巴细胞增殖的抑制作用。结论SCAG体外给药可显著增强小鼠细胞免疫功能。

腹腔感染法复制蒙医“粘疫”病热证动物模型及其应用的研究

目的:建立符合蒙医"粘疫"病热证(感染症)特征又能观察巨噬细胞免疫应答的动物模型,为蒙医"粘疫"病相关病症和蒙药药理研究提供造模方法。方法:取20只BALB/C小鼠随机分为对照组,模型组。对照组腹腔注射生理盐水(0.5mL/只);模型组小鼠腹腔注射大肠杆菌菌液(0.5mL/只,含3.0×107个细菌)复制蒙医"粘疫"病热证模型。观察症状、腹腔液巨噬细胞计数、巨噬细胞吞噬百分率及吞噬指数和腹腔液中IL-1,IL-6、TNF-α的含量。结果:模型组的小鼠在大肠杆菌腹腔注射2h后逐渐出现体温升高,口唇干、发红,呼吸短促,疲乏懒动,饮水增加,饮食减少等症状,表明符合蒙医"粘疫"病热证表现。模型组的腹腔液巨噬细胞计数、巨噬细胞吞噬指数及IL-1,IL-6、TNF-α的含量与对照组比较有显著性差异。结论:根据蒙医"粘疫"病热证临床特征,利用革兰阴性细菌的致病特点,用大肠杆菌腹腔注射诱发了符合蒙医理论的"粘疫"病热证模型。为进一步观察干预因素对巨噬细胞功能的影响和蒙医"粘疫"病相关病症的研究提供参考。

氧化低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的:观察氧化低密度脂蛋白(oxLDL)对THP-1巨噬细胞CD36表达和细胞胆固醇流入的影响,探讨CD36在巨噬细胞胆固醇流入中的作用。方法:用50 mg/L oxLDL分别孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和W estern印迹分别检测CD36 mRNA和蛋白质的表达;用油红O染色观测细胞内脂质蓄积情况;用液体闪烁计数法检测[3H]胆固醇流入。结果:50mg/L oxLDL孵育THP-1巨噬细胞不同时间(0、12、24、36和48 h),THP-1巨噬细胞CD36 mRNA及蛋白质表达上调,油红O染色可见细胞内脂滴逐渐增加,液体闪烁计数发现THP-1巨噬细胞胆固醇流入增加,分别为23.5%、27.8%、39.7%、44.1%和49.7%。结论:oxLDL可使THP-1巨噬细胞CD36表达上调,并使细胞胆固醇流入增加。

养阴益气合剂增强外源性糖皮质激素小鼠免疫功能的研究

目的:研究养阴益气合剂对外源性糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法:实验应用外源性糖皮质激素肌肉注射小鼠造成免疫抑制后,灌服养阴益气合剂,高剂量组(10g生药/kg体重)、中剂量组(5g生药/kg体重)、低剂量组(2.5g生药/kg体重)。采用淋巴细胞体外培养和MTT法测定T、B淋巴细胞的增殖、中性红吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬作用和NK细胞的细胞毒作用。结果:养阴益气合剂高、中、低3个剂量组均可提高免疫抑制后小鼠的脾指数,高、中剂量组分别比模型组提高89.3%和42.9%,在统计学上均有显著性差异;均可协同ConA和LPS促进免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞的增殖,增殖率分别是模型组的132.6%、82.8%和21.7%及110%、63.4%和19.7%;同时对免疫抑制小鼠的NK细胞杀伤活性及巨噬细胞吞噬活力都有一定的提高作用,分别比模型组提高77.9%5、7.4%1、7.6%及57.3%9、.3%和14.7%。结果:养阴益气合剂对免疫功能低下者的特异性和非特异性免疫功能都有明显促进作用,这一结果为临床上提高SARS患者免疫功能低下及改善SARS患者外源性糖皮质激素治疗后免疫力低下状态提供了理论依据。

巨噬细胞移动抑制因子在幽门螺杆菌相关胃粘膜炎症中的表达

目的检测MIF在幽门螺杆菌相关胃粘膜炎症中的表达,并在体外分析幽门螺杆菌感染对单核细胞MIF表达的影响。方法连续收集胃镜检查的标本,胃窦与胃体同时进行病理组织学检查,根据悉尼系统作胃粘膜的组织学分型。MIF/T细胞(CD45RO)和MIF/巨噬细胞(KP1)进行双重免疫组化染色,MIF mRNA进行原位杂交检测。在体外幽门螺杆菌ATCC26695与THP-1单核细胞共培养后,分别用ELISA与RT-PCR测定THP-1细胞MIF的表达。结果在62例慢性胃炎患者中,42例幽门螺杆菌阳性患者胃窦与胃体粘膜内T细胞总数、MIF阳性T细胞数、巨噬细胞总数、MIF阳性巨噬细胞数和MIF mRNA阳性细胞数都显著高于20例幽门螺杆菌阴性患者。而且在42例幽门螺杆菌相关胃粘膜炎症中MIF的表达随炎症程度的增加而增加。在体外幽门螺杆菌与THP-1细胞共培养后,幽门螺杆菌促进了THP-1细胞MIF蛋白质与mRNA表达增加。结论MIF在幽门螺杆菌感染相关胃粘膜炎症细胞中表达增加,可能在幽门螺杆菌感染相关胃粘膜炎症的形成中起着重要的作用。

蒲公英提取物对小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮的影响

用MTT法测定蒲公英提取物对脂多糖(LPS)激活小鼠腹腔巨噬细胞的毒性作用,以确定无细胞毒性剂量范围,并在该剂量范围内采用Griess试剂比色法测定蒲公英提取物对LPS激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(NO)的影响,为蒲公英提取物药理作用的进一步研究提供依据。结果表明,蒲公英提取物≤1mg/mL剂量范围内对巨噬细胞无细胞毒性作用。其在0.25～1mg/mL浓度范围内对LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO具有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖关系。

类风湿关节炎患者血清趋化因子MCP-1、MIP-1α的表达

目的：探讨单核细胞化学趋化蛋白1（MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP1α）在类风湿关节炎（RA）发病中的可能机制。方法：收集年龄为18～79岁的早期RA活动期患者17例，非早期RA活动期患者18例，以及正常健康者15例，评估握力、关节疼痛指数和肿胀指数等临床活动指数，测定红细胞沉降率、C反应蛋白、类风湿因子等血清学指标，应用ELISA法测定各自血清MCP-1、MIP—1α水平。Kruskal—Wallis法比较各组间MCP-1、MIP1α水平的差异；应用直线相关分析法对血清MCP1、MIP—1α水平与临床活动指数及血清学指标作相关性分析。结果：早期RA、非早期RA血清MCP-1表达均较正常对照组明显升高（P均〈0．01），早期组与非早期组间无明显差异。早期RA的血清MIP1α表达较非早期RA、正常对照组明显升高（P〈0．01），非早期组与对照组间无明显差异。RA患者的血清MCP-1、MIP-1α水平以及早期RA患者的血清M1P-1α水平与疾病临床活动指数以及血清学指标均无明显相关。结论：MCP-1、MIP1α与RA的发生、发展有关；MIP-1α可能在RA早期滑膜炎的发生机制中起了重要作用；未发现RA患者的血清MCP1、MIP-1α表达与炎症活动相关。

二氧化硅对人肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞TGF-β_1表达的影响

目的探讨二氧化硅(SiO2)参与矽肺纤维化形成的机制。方法收集矽肺患者肺泡灌洗液中的巨噬细胞(AM),在体外以SiO2(50μg/ml)和不加血清的DMEM培养2、6、12、18、24、36 h,应用免疫细胞化学法检测AM中转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;然后取培养18 h的AM上清与人肺成纤维细胞(FB)共同孵育6、12、18、24、36、48 h,同法检测FB中TGF-β1水平。结果经SiO2刺激的矽肺患者AM中TGF-β1表达增加(P<0.05);AM上清也可使FB中TGF-β1表达上调,经SiO2刺激的AM上清作用更明显(P<0.01)。结论SiO2可促进矽肺纤维化形成,其机制可能为上调AM和FB中TGF-β表达。

巨噬细胞移动抑制因子在非IgA系膜增生性肾小球肾炎肾组织中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在非IgA系膜增生性肾小球肾炎患者肾组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学双标记技术检测正常对照组及不同病变程度非IgA系膜增生性肾小球肾炎患者肾组织内MIF和人巨噬细胞标记抗原CD68的表达。结果在正常对照组和IgA系膜增生性肾小球肾炎患者轻度组仅有少量MIF和CD68表达。随着非IgA系膜增生性肾小球肾炎病变程度的加重,MIF、CD68的表达逐渐增强,重度病变时,MIF、CD68的表达最强,且MIF表达水平与CD68表达呈正相关(r=0.87,P<0.01)。结论肾组织内MIF表达上调所导致的巨噬细胞浸润增加可能是非IgA系膜增生性肾小球肾炎进展的重要机制之一。

二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响。方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预。酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1α(IL-1β)浓度。反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果LPS1 mg/L)孵育细胞1、2、3、6 h,TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加(P＜0．01),呈时间依赖性。用DATS(0．1、0．5、2．5、5．0 mg/ L)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激3h,可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖性,其中TNF -α含量仍高于对照纽(P＜0．05),但IL-1β含量在2．5、5 mg/L DATS作用下可降至对照组水平。单独DATS对TNF-α及IL -1β的生成及其mRNA表达无明显影响(P＞0．05)。结论DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1βmR- NA表达而减少其蛋白生成,具有直接的抗炎效应,这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制。