Comparison of chemiluminescence enzyme immunoassay based on magnetic microparticles with traditional colorimetric ELISA for the detection of serum α-fetoprotein

A chemiluminescence enzyme immunoassay based on magnetic microparticles (MmPs-CLEIA) was developed to evaluate serum a-fetoprotein (AFP) in parallel with traditional colorimetric enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).A systematic comparison between the MmPs-CLEIA and colorimetric ELISA concluded that the MPs-CLEIA exhibited fewer dosages of immunoreagents,less total assay time,and better linearity,recovery,precision,sensitivity and validity.AFP was detected in forty human serum samples by the proposed MPs-CLEIA and ELISA,and the results were compared with commercial electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) kit.The correlation coefficient between MPs-CLEIA and ELISA was obtained with R 2 0.6703;however,the correlation between MPs-CLEIA and ECLIA (R 2 0.9582) was obviously better than that between colorimetric ELISA and ECLIA (R 2 0.6866).

磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立

建立磁分离酶联免疫法定量检测人白细胞介素 4 (IL - 4 )的方法。用异硫氰酸荧光素 (FITC)和碱性磷酸酶(AP)分别标记识别不同表位的两种抗IL - 4单克隆抗体 (mAb) ,用抗FITC多抗或mAb包被免疫磁珠。结果显示 :检测标准品浓度在 0 - 3ng/mL范围内线性关系良好 ,敏感性达 10pg/mL ,平均回收率为 10 1.7% ,批内批间CV均为 3.6 % ,与ELISA比较相关系数为 0 .912 4。此法所需样本量少 ,方法稳定 ,敏感性高和特异性强 ,又无放射性污染 ,在临床检验和基础研究中有较大应用价值。

磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究

目的 ：建立检测鳞状上皮细胞癌抗原（squamous cell carcinoma antigen,SCC-Ag）的磁分离酶联免疫法（magnetic affinity immunoassay,MAIA）。方法：采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AP）分别标记识别不同表位的两种抗SCC-Ag单克隆抗体（mAb）T17和H390,以耦联羊抗FITCmAb包被的免疫磁珠作为固相载体,APS-5作为显色底物,建立检测SCC-Ag的磁分离酶联免疫法。结果：成功实现了用磁分离酶联免疫法对SCC-Ag的定量检测,其检测灵敏度为0.22μg/mL,线性范围0-50μg/mL,批内CV 7%-8%,批间CV 6%-9%。添加回收率为97%。与雅培AxSYM微粒子化学发光检测结果对比,相关系数为0.973。结论：磁分离酶联免疫法的检测结果接近进口同类试剂的检测结果,为开发一种高质量的SSC-Ag测定试剂盒提供实验数据。

基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法

以磁微粒偶联多抗为磁性捕获探针,酶标噬菌体抗体为特异信号检测探针,采用＂磁性捕获探针-待测物-酶标噬菌体抗体探针＂的检测模式,成功建立了一种基于酶标噬菌体抗体的磁分离免疫分析方法。本方法检测β-银环蛇毒素线性范围为0.016-62.5μg/L,回归方程为Y=0.641X＋1.355（R=0.9925,n=13,p〈0.0001）,检出限为0.016μg/L。本方法比传统ELISA法检测灵敏度提高了10倍,与采用酶标单抗复合物探针的双抗体夹心磁分离免疫分析法相比,检测灵敏度提高4倍。本方法灵敏度高,具有较好重现性与特异性,在毒素的痕量检测方面具有广阔的应用前景。

磁分离酶联免疫分析与ELISA法在梅毒抗体筛检中的应用

目的比较磁分离酶联免疫分析法(MAIA)与ELISA法在无偿献血者梅毒抗体筛检中的应用价值。方法以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。分别采用MAIA及ELISA法对评价标本作盲法筛检,以临检中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。分析真实性与可靠性,并评价2种试剂的Cut-off值的合理性。结果MAIA及ELISA法的灵敏度分别为92.3%,100.0%,特异度分别为99.1%,100.0%,约登指数分别为0.91和1.00,重复试验符合率均为100.0%。结论提高MAIA法的灵敏度与特异度,将具有更大的临床应用价值。

日本血吸虫重组抗原rSj26的磁分离酶联免疫分析的建立及其在低感染度血清抗体检测中的应用

目的建立基于重组日本血吸虫抗原Sj26(rSj26)的磁分离酶联免疫分析(rSj26-MEIA),并将其用于检测低感染度的日本血吸虫病患者的血清抗体。方法将重组质粒pET28a-Sj26转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,用0.6 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析法纯化后,二喹啉甲酸(BCA)法测定蛋白含量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)检测分析rSj26。将纯化后的rSj26与磁珠偶联(100μg抗原/mg磁珠),优化反应条件,建立rSj26-MEIA方法。用rSj26-MEIA和ELISA分别检测58份低密度感染的日本血吸虫病患者血清、30份非血吸虫病流行区阴性血清和6份并殖吸虫病患者血清,并比较两者的检测结果。结果纯化后的重组蛋白含量测定结果显示,rSj26浓度为2.5 mg/ml。SDS-PAGE结果显示,rSj26相对分子质量约27 000,主要以可溶性的形式表达。Western blotting结果显示,rSj26可被感染日本血吸虫的兔血清和小鼠血清特异识别。rSj26-MEIA优化反应条件结果显示,采用rSj26-磁珠0.2 mg(含rSj26 10μg)、血清稀释度为1∶100时,阳性血清平均吸光度(A_550值)/阴性血清平均A_550值(P/N)最大,为3.97。rSj26-MEIA和rSj26-ELISA检测低密度感染日本血吸虫病患者血清的结果显示,两者的阳性检出率均为24.14%(14/58),两者P/N分别为3.61和2.56;相关分析结果表明,两者检测的抗体A_550值间存在正相关关系(r=0.658,P<0.01)。rSj26-MEIA和ELISA检测6例并殖吸虫病患者血清和30例非血吸虫病流行区阴性血清,均未出现阳性反应。结论rSj26-MEIA可作为检测低密度感染日本血吸虫血清抗体的一种新技术。

磁微粒酶联免疫吸附法检测人体尿液中日本血吸虫抗体

目的应用磁微粒酶联免疫吸附法(MPAIA)检测日本血吸虫病患者尿液中日本血吸虫特异性抗体,探索血吸虫病新的无创性免疫诊断方法。方法采用MPAIA对158例日本血吸虫病患者和100例健康人的尿液进行检测,并同步进行血清检测,评价其检测效果。结果 MPAIA尿液检测加样量确定为10μl未特殊处理原尿,尿液与血清阳性检出率分别为48.10%(76/158)和88.61%(140/158),两者差异有统计学意义(χ2=60.24,P<0.05),尿液及血清检测特异度均为100%。结论 MPAIA可用于检测日本血吸虫病患者尿液中抗日本血吸虫抗体,但还须对影响其阳性检出率的多种因素进行系统研究,以提高其敏感性。