Study on the Milk Yield Pattern of Maiwa Yak

The change in lactation of Maiwa yak was studied based on the data of locating Maiwa yak in warm seasons during 2003- 2009. The results showed that the milk yield was increasing gradually during days 30- 70 after calving,reached the peak at days 70- 110,and decreased gradually to no milking whenafter. The milk yield of Maiwa yak was greatly influenced by lactation age rather than the yearly effect.

麦洼牦牛程序化人工授精技术操作规程

牦牛是川西北地区重要的生产、生活资料,与牧区人民的生活息息相关。为更好的开展牦牛繁育工作,提高牦牛数量、提升牦牛质量,最大限度的发挥优质种公牛价值,通过运用现代生物学手段同期发情和人工授精技术提升牦牛受胎率和繁殖率,促进川西北牧区草原畜牧业高质量发展,该文主要阐述牦牛程序化人工授精操作规程,希望给牦牛养殖户提供参考。

麦洼牦牛H-FABP、HSL基因多态性及与生长性状的相关分析

【目的】探讨心脏脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid-binding protein,H-FABP)、激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)基因在牦牛中的遗传多态性,进一步揭示牦牛各品系间的遗传分化以及候选基因与牦牛生长性状间的关联性,同时为2个候选基因在牦牛中的表达调控等研究提供理论依据,寻找可用于辅助选择的分子标记。【方法】采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对共100头麦洼牦牛个体的H-FABP、HSL基因的外显子部分进行遗传多态性分析,统计基因和基因型频率,进行Hardy-Weinberg平衡性检测,计算纯合度、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数等遗传多态指标,分析候选基因不同基因型与体高、体重、体斜长、胸围、管围等生长性状的关联性。【结果】①麦洼牦牛H-FABP、HSL基因外显子部分均存在多态性,多态性检验均存在3种基因型;②适合性检验表明仅HSL基因外显子8上多态位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余多态位点均偏离;③测序分析表明,H-FABP基因外显子4第7 339位(与原序列相比)发生单碱基突变(T→C),该突变属同义突变;HSL基因外显子7第6 883位发生G→C转换,以及第6816处发生碱基A→G突变,并导致编码氨基酸由天冬氨酸(D)转变为甘氨酸(G);外显子8第10 183 bp处发生A→G碱基突变,编码氨基酸由半胱氨酸(C)变为甘氨酸(G);④对各标记基因型生长发育指标(体高、体斜长、胸围、管围、体重)进行差异显著性检验,仅HSL基因外显子7上A6816G基因座差异极显著(P﹤0.01)。【结论】麦洼牦牛H-FABP、HSL基因存在遗传多态性,且HSL基因外显子7上A6816G基因座表现的多态有可能作为一种遗传标记。

麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因的SNPs检测及其与体尺性状的关联分析

旨在探讨生长激素(Growth hormone,GH)、生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)、生长激素促分泌素受体(Growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因在麦洼牦牛中的遗传多样性,揭示不同基因型与其生长性状的关联性,同时为候选基因在牦牛中的表达调控提供理论依据,寻找可用于遗传育种辅助选择的分子标记。本试验采用DNA池技术,结合PCR-RFLP和直接测序法研究麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因的遗传多态性,分析候选基因多态位点与体高、体斜长、胸围、管围和体重等生长性状的关联性。结果表明:1)麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因均存在多态性,其中GH基因存在A757G和T949C2个SNPs位点,GHR基因发现T2416C、T3490C和A7500G3个突变位点;GHSR基因存在T1387C和T3006C突变;2)适合性检验表明,GHR基因A7500G位点在粉嘴类群,及GHSR基因T3006C位点在纯黑类群中偏离Hardy-Weinberg平衡状态,其他位点均符合Hardy-Weinberg平衡;3)差异显著性检验表明,GHR基因T2416C、T3490C和A7500G位点与麦洼牦牛管围极显著相关(P<0.01),GHSR基因T1387C位点与其体重显著相关(P<0.05)。麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因均存在遗传多态性,推断GHR基因T2416C、T3490C和A7500G位点、GHSR基因T1387C位点可能是影响麦洼牦牛管围、体重性状的主基因或与主基因相连锁的基因座,可作为辅助选择的遗传标记。

麦洼牦牛TLR1～10基因克隆及分子生物学特征分析

本研究克隆了麦洼牦牛天然免疫受体1~10基因的编码区,利用生物信息学工具分析基因特点,荧光定量PCR测定TLRs基因在不同组织中的表达量。序列比较分析结果表明,麦洼牦牛TLR基因与其他物种在核苷酸水平及氨基酸水平上均表现出很高的保守性。遗传进化方面,麦洼牦牛TLRs与牛和绵羊TLRs遗传进化距离最近,并与人、马、鼠TLRs等形成哺乳动物的一个分支,与鸡则形成遗传距离较远的一个分支。同时我们在进行系统发育分析时发现,TLR1、TLR6先聚为一小支,再与TLR10又聚为更紧密的一支,然后TLR1、2、6、10和TLR7、8、9分别聚集在两个单个的分支上,TLR其他成员各自成为一支。荧光定量结果表明,TLRs在麦洼牦牛各组织均有表达,但不同成员在不同组织的表达存在较大的差异。其中TLR2、TLR4和TLR6在脾表达量最高,在卵巢、小肠、肾、肝中有高表达,TLR1、TLR5、TLR7、TLR8、TLR9和TLR10在肾表达量最高,在肝、肾、脾等组织中高表达。综上所述,本研究的开展能为以后揭示TLRs在牦牛等高原模式动物分子免疫机制以及牦牛抗病育种奠定基础。

不同年龄麦洼牦牛肉品质分析

为了解1.5~3.5岁麦洼牦牛的肉质品质规律,试验选择1.5岁10头、2.5岁8头、3.5岁8头麦洼牦牛进行屠宰并测定牦牛肉pH值、色差、熟肉率及剪切力等肉质指标。结果表明:1.5岁、2.5岁及3.5岁麦洼牦牛肉pH_(1h)值与pH_(24h)值之间差异极显著(P<0.01),剪切力、熟肉率差异不显著(P>0.05)。3.5岁麦洼牦牛肉的亮度(Lightness,L^(*))值、色相角度(H)值、红度(a^(*))值、黄度(b^(*))值和颜色饱和度(C)值与1.5岁、2.5岁麦洼牦牛之间差异极显著(P<0.01);黄度(b^(*))值与1.5岁麦洼牦牛差异极显著(P<0.01);与2.5岁麦洼牦牛差异显著(P<0.05)。说明1.5岁、2.5岁及3.5岁麦洼牦牛肉肉质均较好,且嫩度较低、加工性能良好,其中3.5岁龄麦洼牦牛肉更好。

麦洼牦牛和九龙牦牛FSHβ基因的PCR-SSCP分析

运用一对特异性引物对麦洼牦牛、九龙牦牛的FSHβ基因的5,端侧翼区进行了扩增,应用PCR-SSCP方法对其进行了多态性分析.结果表明:在麦洼牦牛的FSHβ基因的5,端侧翼区有AA型、AB型和BB型三种基因型,九龙牦牛的FSHβ基因的5,端侧翼区只检测到了AA型、AB型两种基因型.在两种牦牛品系中,AA基因型频率最高,A等位基因频率均明显高于B等位基因频率.麦洼牦牛和九龙牦牛群体中多态信息含量分别为0.3431、0.1411,麦洼牦牛多态性能高,遗传变异大.

麦洼牦牛TLR1基因组织表达分析

【目的】建立一种牦牛TLR1基因表达量的荧光定量PCR检测方法,并分析TLR1基因在牦牛不同组织中的表达差异。【方法】参考牦牛TLR1基因序列,在其保守区设计特异性引物,并以牦牛β-actin基因为内参基因建立荧光定量方法;基于该荧光定量方法分析TLR1基因在牦牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、胃、乳腺、肌肉、卵巢11种组织中的表达水平。【结果】TLR1基因和β-actin基因扩增产物电泳结果呈现单一条带,其产物熔解曲线均为特异的单峰,表明引物具有较高的特异性。组织表达结果显示,TLR1基因在所检测的牦牛11个组织样本中均有表达,其中在肾、肝、脾、肺、卵巢、小肠中表达量较高,在胃、乳腺、心、大肠、肌肉组织中表达量较低。【结论】TLR1基因在牦牛各组织中转录水平差异较大,这可能与各组织对病原体的识别和抵抗能力有关。

麦洼牦牛和九龙牦牛乳蛋白遗传多态性的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳对109头麦洼牦牛和100头九龙牦牛乳蛋白多态性进行分型,并采用最小二乘法分析乳蛋白多态性与泌乳性能及乳蛋白组分之间的相关性。结果表明:β CN、κ CN和α La呈单态,基因型分别为AA、BB和BB型;而αs1 CN和β Lg呈多态,αs1 CND基因为优势基因,在麦洼牦牛和九龙牦牛中的频率分别为0.8073和0.6000,β Lg座位优势基因为β LgE,在麦洼牦牛和九龙牦牛中的频率分别为0.9770和0.9700;麦洼牦牛和九龙牦牛群体平均杂合度分别为0.1021和0.1867;在2个品种牦牛群体中,除αs1 CN基因座对九龙牦牛乳脂率有显著影响外,其余乳蛋白基因座对泌乳性能及乳蛋白相对百分含量均无显著影响。

麦洼牦牛高产奶性能新品系(品种)选育方案

为了保护并有效利用麦洼牦牛这一珍贵的遗传资源,提高麦洼牦牛种质质量,试验针对麦洼牦牛育种现状,制订了适合麦洼牦牛新品系选育的方法,以高产奶性能的麦洼牦牛新品系(品种)选育为目标,研究开放式群体继代选育法的步骤。结果表明:新品系(品种)选育的总体目标、具体目标、选育实施方案、选育方法、选育措施等方面均有所提高。

麦洼牦牛产奶变化规律研究

为了探索麦洼牦牛泌乳的变化规律,收集了四川龙日种畜场2003-2009年间产犊母牦牛的产奶数据,分析了暖季牦牛泌乳的变化规律.结果表明,产犊后30～70 d时,牦牛日产奶量逐步升高,70～110 d时达到高峰期,110d后日产奶量逐步降低至不挤奶;麦洼牦牛日产奶量受年度效应的影响较小;不同日龄的挤奶量之间相关性较强.

麦洼牦牛SRY基因克隆及序列分析

SRY是Y染色体上具体决定生物雄性性别的基因片段,是多数哺乳动物性别决定基因之一。本试验采用克隆测序SRY基因并结合生物信息学对其序列进行分析,利用软件Codon W分析麦洼牦牛、普通牛、绵羊、山羊、猪、小鼠、鸡和人该基因编码区的密码子偏好性。克隆测序得到SRY基因序列含1个690bp的开放阅读框,共编码229个氨基酸;其编码区核苷酸序列与普通牛、绵羊、山羊、猪、小鼠、鸡、人相应序列间的一致性分别为99.9%、93.9%、91.2%、76.5%、43.3%、21.4%、69.1%。经聚类分析,麦洼牦牛首先与普通牛聚在一起,绵羊与山羊聚为一类,这两类相聚后再依次与猪、人、小鼠相聚,最后与鸡聚为一类,其结果与以往的生物学分类结果一致。该基因编码的蛋白质分子式为C1155H1827N351O348S11,相对分子质量为2655.0,理论等电点PI为9.55,亲水性平均数为-0.855。其密码子偏好性分析显示,T3s为0.2905、C3s为0.3240、A3s为0.3728、G3s为0.2963,第3位碱基中出现G和C占第3位碱基总量的48%,同义密码子数为61。上述数据表明麦洼牦牛SRY基因编码序列与普通牛、绵羊、山羊、猪、人具有较高的一致性,在物种进化过程中较为保守。该基因对含A的密码子有较高的偏爱性,尽量避开以G结尾的密码子,且其所编码的蛋白质为亲水性蛋白。

全哺乳饲养方式麦洼牦牛公犊肉的营养及品质分析

为了解全哺乳饲养方式麦洼牦牛公犊肉的营养及肉质性状,对6月龄和18月龄麦洼牦牛公犊进行了屠宰测定。结果表明:6月龄和18月龄牦牛公犊的脂肪含量分别为1.43%、1.25%,蛋白质含量分别为22.92%、22.59%,其间均无显著性差异;水分含量6月龄为77.28%,显著低于18月龄(78.30%)。矿物质元素锰含量6月龄为0.20mg/kg,显著高于18月龄(0.13mg/kg),其他矿物元素间均无显著性差异。氨基酸各指标含量间均无显著性差异。6月龄牦牛公犊的饱和脂肪酸(SFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸(EAA)分别为64.53%、1.61%、19.95%、7.75%,均高于18月龄;单不饱和脂肪酸(MUFA)、PUFA/SFA分别为33.85%和0.02,均低于18月龄,但其间均无显著性差异。重金属镉、铬、砷、铅和汞含量均远低于国家标准(GB2762-2005)的限量值,均未检测到六六六、滴滴涕、五氯硝基苯、金霉素、土霉素和磺胺类药物残留。6月龄和18月龄牦牛公犊肉具有高蛋白、低脂肪的特点,且矿物质及氨基酸含量丰富,属于优质蛋白质食物,是绿色、安全、环保、无污染的优质肉食品。

麦洼牦牛群体4个新微卫星位点遗传多态性分析

【目的】利用4个新分离的牦牛基因组多态微卫星位点,分析麦洼牦牛的遗传多态性及群体的遗传分化特征。【方法】以130个麦洼牦牛个体基因组DNA为模板,PCR扩增Bogr203、Bogr204、Bogr205和Bogr215 4个微卫星位点序列,通过测序进行基因分型,根据基因型计算各个位点的多态性,并推断麦洼牦牛群体的遗传分化特征。【结果】麦洼牦牛群体在4个微卫星位点具有较高的遗传多态性,平均观察杂合度(Ho)、平均期望杂合度(He)和平均多态信息含量(PIC)分别达到0.626,0.800和0.751;通过Structure软件能够较明确地将麦洼牦牛群体区分为2个亚群,这与麦洼牦牛分布地域广泛有较大关系,但各个亚群的牦牛个体及其分布区域还需要进一步研究。【结论】麦洼牦牛品种具有较高的遗传多态性,并可能分化为至少2个亚群。

麦洼牦牛Hoxa10基因克隆、原核表达及组织表达谱

从麦洼牦牛肾脏组织提取总RNA,以已公布牛Hoxa10编码区序列设计引物,RT-PCR法克隆麦洼牦牛Hoxa10基因;构建原核表达载体pET-32a(+)-Hoxa10,并在大肠杆菌表达系统中表达,SDS-PAGE检测融合蛋白;采用RT-PCR检测该基因在麦洼牦牛各组织中的表达分布。结果表明:从麦洼牦牛肾脏中克隆Hoxa10基因的CDs区,大小为285bp,编码94个氨基酸残基,与牛、猪和绵羊的Hoxa10同源性高;经IPTG诱导,pET-32a(+)-Hoxa10在BL21中可表达1个大小约为28ku的特异蛋白;在牦牛各组织中,肾脏和肺脏中表达较高,但在心脏表达量极低或不表达。

麦洼牦牛MC4R基因多态性及与生长性状的相关分析

为探究黑皮质素4受体基因(MC4R)在麦洼牦牛群体中的遗传多态性,开展其与生长性状间的关联分析,采用PCR-SSCP技术和DNA测序技术对100头麦洼牦牛MC4R基因外显子区域进行多态性分析,并运用最小二乘方差分析法,对各基因型间体高、体质量、体斜长、胸围、管围等生长性状指标进行差异显著性检验。结果表明:MC4R基因引物P6上存在EE和EF 2种基因型,其中,粉嘴群只有EF基因型,存在严重偏态,EF型在2个群体中占绝对优势,E等位基因为优势基因;2个群体均处于中度多态(0.25<PIC<0.5),遗传变异较大;测序结果表明,在1 172bp处(与原序列相比)发生了C→T单碱基突变,并导致编码氨基酸由丝氨酸(S)变为苯丙氨酸(F)。该突变位点对体高、体斜长、胸围、管围、体质量等生长发育指标均无显著影响(P<0.05)。

麦洼牦牛暖季补饲育肥效果研究

本试验通过不同补饲水平对28头3岁麦洼牦牛150d育肥效果测定,补饲组18头全期平均总增重67.73kg,平均日增重451.67g,相对增重率47%;高水平补饲的A组头平均增重比不补饲D组高34.5kg,日增重高230g,两项指标比对照组相对提高近70%。试验表明,在高寒牧区,暖季对牦牛进行适量补饲,能提高生长速度,使其提前出栏。

麦洼牦牛公牛肥育期生长发育及屠宰测定试验

[目的]为进一步推广麦洼牦牛在传统饲养条件下的适时出栏技术,以期有效解决养殖效益低及草场过载问题。[方法]对3岁麦洼牦牛公牛进行暖季生长发育测定及出栏前的屠宰试验。[结果]66 d的试验期体重体尺分析结果(n=30)表明,体重平均增加了26.47 kg(P<0.001),日增重达0.40 kg;体高和胸围平均增加2.69 cm和5.72 cm(P<0.001),体斜长和管围差异不显著(P>0.05);全放牧不去势条件下3.5岁公牦牛出栏体重可达180 kg左右,宰前活重、屠宰率、净肉率、肉骨比分别为171.00 kg±18.93 kg、41.07%、30.32%、3.00(n=8)。[结论]表明在传统饲养条件下,3.5岁麦洼牦牛公牛可以出栏,获得较好的经济效益。

麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5克隆及蛋白结构分析

采用RT-PCR方法扩增并克隆麦洼牦牛G蛋白信号转导调节因子5(regulator of G protein signaling 5,RGS5)基因序列,利用ClustalX 1.83和Mega 5.0软件构建系统进化树,并选用多种生物信息学软件进行序列分析和蛋白结构预测。结果表明,所得麦洼牦牛RGS5基因长度为863bp,包含1个546bp的完整开放阅读框,编码181个氨基酸,GenBank登录号为KJ867514。系统进化树分析发现,麦洼牦牛RGS5氨基酸序列与普通牛亲缘关系最近,其次是山羊和绵羊。RGS5基因编码的蛋白质分子质量为20.94ku,理论等电点(PI)为6.35,它是一种以α-螺旋为主,不含信号肽的非跨膜、不稳定性蛋白。三级结构预测显示,麦洼牦牛与人RGS5蛋白三级结构相似性高达90.51%。以上结果为深入研究RGS蛋白功能积累科学资料。

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性

为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法,从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞,并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力等生物学特性的检测,建立并鉴定麦洼牦牛乳腺上皮细胞系。结果显示,乳腺细胞形态良好,细胞接种存活率达91%,群体倍增时间26.97h,细胞生长曲线呈典型"S"型,细胞传至25代以上仍保持旺盛的增殖活力。可见,通过对细胞传代及反复冻存和复苏已成功建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞系,获得大量的乳腺上皮细胞,使麦洼牦牛物种在细胞水平上得以保存,为建立牦牛乳腺生物反应器及泌乳调控机制研究提供基础。