蒜头果中一种新的植物蛋白(malanin)的分离纯化

蒜头果(Malania oleiferaChun et S.Lee)属于铁青树科(Olacaceae)蒜头果属.蒜头果蛋白(malanin)是通过粉碎、抽提、硫酸铵沉淀、疏水色谱层析等分离手段,从蒜头果种仁中分离、纯化出的一种新的植物蛋白.Malanin是一种糖蛋白,分子质量为61 875 u,等电点为5.5,由A,B 2条肽链通过二硫键连接而成.该蛋白的A链和B链N-端序列分别为DYPKLTFTTS和DETXTDEEFN(X一般情况下为C),用NCBI-BLASTP程序对nr数据库和其它蛋白质数据库进行检索,未发现有相同的序列存在.经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及分析各自的肽质量指纹图谱(PMF),结果没有匹配数据库中的任何记录,说明malanin为新蛋白质.

蒜头果蛋白氨基酸组成分析

采用酸水解法测定蒜头果蛋白的氨基酸组成,结果发现,蒜头果蛋白的氨基酸组成丰富,含有17种氨基酸。根据其精确分子量推算,得出每个蒜头果蛋白分子的各氨基酸残基数约为503个。其中酸性和碱性氨基酸残基含量分别为23.06%和13.32%,说明蒜头果蛋白是一种酸性蛋白质;亲水作用较强的氨基酸残基占总氨基酸残基数的50.3%,说明该蛋白在水溶液中的溶解性比较好,便于用0.9%生理盐水溶解其干粉样品,为蒜头果蛋白作为药品的开发利用提供了便利条件。

新的植物毒素蒜头果蛋白的荧光光谱研究

蒜头果蛋白(Malanin)是从我国稀有植物蒜头果中分离纯化出的一种具有高细胞毒性的蛋白质。用荧光光谱法研究在温度、酸度、有机溶剂、表面活性剂、变性剂及荧光猝灭剂等不同条件对蒜头果蛋白溶液构象的变化。实验表明,Malanin在天然状态下荧光发射峰位于340 nm处,色氨酸(Trp)残基较大程度位于Malanin分子的疏水区。十二烷基硫酸钠、异硫氰酸胍、丙烯酰胺和碘化钾的加入均可使Malanin的分子构象发生变化,导致分子内Trp残基的荧光猝灭。异硫氰酸胍的加入使Trp残基的荧光发射峰位明显红移,表明位于Malanin分子较疏水环境内的Trp残基相对外露。

荧光光谱法研究蒜头果蛋白与金属离子的相互作用

蒜头果蛋白(malanin)是从云南、广西特有植物蒜头果中分离纯化出的一种新的、具有抗肿瘤活性的糖蛋白。用荧光光谱法研究了Cu2+,Ag+和Ca2+对malanin和apo-malanin溶液(经EDTA透析脱去金属离子后的脱金属蛋白)荧光强度的影响。结果表明,Cu2+对malanin和apo-malanin荧光均有明显的静态猝灭现象,其离解常数Kd分别为2.37×10-4和2.66×10-4 mol·L-1;Ag+对malanin的荧光强度变化不大,但对apo-malanin荧光强度却有明显的静态猝灭现象,其离解常数Kd为2.37×10-4 mol·L-1;而Ca2+对malanin和apo-malanin荧光强度均无明显变化,说明Ca2+对维持malanin分子天然构象具有重要作用。

蒜头果蛋白性质的鉴定及其中性糖含量的测定

[目的]鉴定新的植物蛋白质蒜头果蛋白是否为糖蛋白。[方法]采用高碘酸-希夫试剂法进行糖蛋白性质的鉴定,并用苯酚-硫酸法测定蒜头果蛋白的中性糖含量。[结果]蒜头果蛋白能被高碘酸-希夫试剂染成紫红色。[结论]蒜头果蛋白为糖蛋白,中性糖含量为3.75%。

蒜头果蛋白对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用

从蒜头果种子中提取蒜头果蛋白并测定其对人白血病K562细胞体外生长的抑制作用。结果表明,蒜头果蛋白具有明显抑制K562细胞体外增殖的作用,且存在时间和剂量依赖性,其半数抑制浓度IC50值为1.58×10-8mol·L-1。蒜头果蛋白与顺铂联用表现出了明显的协同抑制效应,两药联用效应会增加。此外,蒜头果蛋白的热稳定性较好,非常便于贮存。本文为蒜头果蛋白在肿瘤治疗方面的开发利用提供依据和思路,也为该蛋白作为新药的研发奠定基础。

蒜头果蛋白的急性毒性试验

[目的]观察蒜头果蛋白(malanin)对小鼠的急性毒性。[方法]采用灌胃和腹腔注射给药后,观察小鼠的中毒表现和死亡情况,计算小鼠的半数致死量(LD_(50))。[结果]灌胃和腹腔注射均随着malanin剂量的增加,小鼠的死亡率增大,其LD_(50)分别为43.11 mg/kg(95%可信限范围为29.11～61.62 mg/kg)和26.22μg/kg(95%可信范围为18.06～36.12μg/kg)。[结论]malanin是一种毒性非常大的植物蛋白质。

SDS-PAGE电泳法测定蒜头果蛋白的相对分子质量

蒜头果蛋白(malanin)是从广西、云南特有植物蒜头果中分离、纯化出的一种新的、具有抗肿瘤活性的植物蛋白质.采用变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定malanin的相对分子质量.结果表明,malanin是一种双链蛋白质,由A、B 2条肽链通过二硫键连接而成,其相对分子质量约为65.94×103.方法具有简单、快速、直观的特点.

荧光法测定蒜头果蛋白中Trp的含量

蒜头果蛋白(malanin)是从蒜头果种仁中分离、纯化出的一种新的植物蛋白质.以Na OH为水解液水解malanin,在激发波长225 nm,发射波长350 nm处测定色氨酸(Trp)的相对荧光强度.结果表明,malanin中Trp的含量为5.116 mg·g-1,即每分子malanin中含Trp约为4个.此结果将为酸水解测定malanin氨基酸的组成作为补充,同时也为malanin全序列的测定提供较好的参考数据.

BCA法测定新的植物毒素——蒜头果蛋白质量浓度

蒜头果蛋白(malanin)是从蒜头果种仁中分离、纯化出的一种新的植物毒蛋白.采用BCA法用酶标仪测定蒜头果蛋白的质量浓度,结果得到标准牛血清白蛋白回归方程.根据malanin的光吸收值,得出理论质量浓度为1 mg/mL的malanin的实测质量浓度为472.793μg/mL,说明malanin干粉的水溶性较好.

蒜头果蛋白对HeLa细胞体外抗肿瘤活性及稳定性研究

蒜头果是一种单种属稀有植物,仅分布在云南、广西部分地区.将蒜头果种仁捣碎,采用离心、(NH 4)2SO 4沉淀及色谱层析等方法得到蒜头果蛋白(Malanin).MTT法测定Malanin对人宫颈癌HeLa细胞体外抗肿瘤活性并测定其与广谱抗癌药物顺铂(DDP)联合用药的效果,再测定Malanin的稳定性及贮存方式.结果表明,Malanin对HeLa细胞具有明显的抑制作用,其IC 50值非常小,仅为9.55×10^(-6)g/L,明显比DDP(IC_(50)值为4.76×10^(-4)g/L)的抗肿瘤活性强,且Malanin和DDP联合应用具有协同抑制效应,二者联合应用药效会相加;Malanin的稳定性很好,不易失活,便于贮存在冰箱中.此研究为Malanin在肿瘤治疗方面的开发利用打下基础,也对云南植物资源的开发利用具有重要意义.

蒜头果蛋白的纯化鉴定及分析

采用粉碎、磷酸盐缓冲溶液浸提、硫酸铵沉淀、疏水色谱层析等分离手段,从蒜头果种仁中分离纯化蒜头果蛋白,并对其相对分子质量、氨基酸组成、等电点、中性糖含量、自由巯基含量、细胞活性等进行分析。结果表明:蒜头果蛋白是一种糖蛋白,含有18种氨基酸,等电点为4.6,相对分子质量为61875 Da,由A、B 2条链通过二硫键连接而成,蒜头果蛋白对Hela和Vero细胞具有强烈的细胞毒性。蒜头果蛋白作为一种新的蛋白质,有较好的药用价值。

蒜头果蛋白的提取及凝血活性测定

从云南、广西濒危植物蒜头果中分离、纯化出一种新的蛋白质―蒜头果蛋白,并分别用鸡、兔的红细胞悬液检测其凝血活性.结果表明,蒜头果蛋白对鸡、兔的红血球都具有凝集作用,是一种凝集素,有开发利用价值.

蒜头果蛋白的红外光谱及圆二色谱分析

[目的]研究蒜头果蛋白微观结构与其抗肿瘤活性的关系。[方法]采用红外光谱及圆二色谱等方法研究蒜头果蛋白微观结构的变化。[结果]蒜头果蛋白在顺式构型状态下较稳定,是一种α+β型蛋白质。[结论]试验结果为进一步研究蒜头果蛋白的结构与功能奠定了基础。