性别特异分子标记在斑鳢全雄育种上的应用

为了快速筛选培育出全雄斑鳢,本研究结合性别特异分子标记和三系配套育种技术,开发了全雄斑鳢的育种方法。将健康的七日龄斑鳢幼鱼随机分成3组进行雌化处理,在饲料中分别添加雌二醇(E2)100、300、600 mg/kg,饲养60 d。利用性别特异分子标记引物M12、P2鉴定筛选出决定型为XY型斑鳢,将XY型正常雄鱼与XY型伪雌鱼交配,获得的子代分为两组,一组为投喂正常饲料,另一组进行雌激素投喂,利用MX1和MX3引物筛选出YY超雄鱼,最后将YY超雄鱼和正常雌鱼作为亲本交配生产出全雄斑鳢子代。结果显示,600 mg/kg激素浓度组的性逆转率最高,达75%,从508尾经雌激素E2投喂的家系中筛选获得235尾具有XY基因型斑鳢。XY伪雌鱼与正常雄鱼交配获得的子代在2月龄时检测到22尾YY超雄鱼,7月龄时检测到14尾YY超雄鱼,筛选获得YY超雄鱼个体用于生产全雄子代。本研究方法显著提高了全雄化斑鳢育种效率,缩短了育种周期,展现出巨大的经济潜力和应用价值,为其他鱼类开展性别特别分子标记辅助育种提供借鉴或参考。

FISH studies of chromosome abnormalities in germ cells and its relevance in reproductive counseling

Chromosome abnormalities are one of the major causes of human infertility. In infertile males, abnormal karyotypes are more frequent than in the general population. Furthermore, meiotic disorders affecting the germ cell-line have been observed in men with normal somatic karyotypes consulting for infertility. In both cases, the production of unbalanced spermatozoa has been demonstrated. Basically addressed to establish reproductive risks, fluorescence in situ hybridization （FISH） on decondensed sperm heads has become the most frequently used method to evaluate the chromosomal constitution of spermatozoa in carriers of numerical sex chromosome abnormalities, carriers of structural chromosome reorganizations and infertile males with normal karyotype. The aim of this review is to present updated figures of the information obtained through sperm FISH studies with an emphasis on its clinical significance. Furthermore, the incorporation of novel FISH-based techniques （Multiplex-FISH; Multi-FISH） in male infertility studies is also discussed. （Asian J Androl 2005 Sep; 7： 227-236）

胡桃楸高质量中期染色体制片及rDNA的物理定位

【目的】以胡桃楸雄花序为材料,建立染色体形态良好、染色体分散且无细胞质背景的胡桃楸高质量染色体制片技术,为深入开展胡桃楸分子细胞遗传学研究提供参考。【方法】通过卡宝品红压片观察花药发育进程,采集花药细胞处于分裂旺盛阶段的雄花序,分别采用1 MPa一氧化二氮(N2O,笑气)、0.7 mmol·L^(-1)环己酰胺、2 mmol·L^(-1)8-羟基喹啉对花序进行不同时间预处理。剥开花序取出花药,酶解后制成悬液,在55℃的烤片机上涂片。以45S rDNA和5S rDNA为探针,对中期染色体进行原位杂交。【结果】1)当雄花序颜色鲜绿、长度达到约1.5 cm、花药顶端变为红色时,花药细胞分裂旺盛,可以观察到大量小孢子母细胞和中期分裂相。因此,为了获得丰富的有丝分裂中期分裂相,取材最佳时机是雄花序中上部的花药顶端变红时,可以保证雄花序中大部分花药处于旺盛分裂期。2)2 mmol·L^(-1)8-羟基喹啉预处理4、6、8 h的染色体都均凝缩不充分,边缘不清晰,拖尾明显,且大部分着丝粒无法辨认;0.7 mmol·L^(-1)环己酰胺预处理4 h的染色体较长,凝缩不充分,拖尾严重,预处理6 h的染色体凝缩适当,形态清晰,大部分着丝粒可以辨认,预处理8 h的染色体边缘清晰,但凝缩过度,着丝粒不明显;1 MPa N2O预处理2 h的染色体长度适中,但凝缩不充分,边缘模糊,处理3、4 h的染色体凝缩程度都较高,染色体较为粗短,染色体间形态差异不明显;此外,N2O预处理4 h的染色体中,有部分会出现粘连拉丝的情况。因此,胡桃楸雄花序最合适的预处理条件为0.7 mmol·L^(-1)环己酰胺处理6 h。3)胡桃楸染色体数为32,染色体基数为16(2n=2x=32)。45S rDNA和5S rDNA探针在胡桃楸染色体上均产生明亮的FISH信号。45S rDNA的杂交信号位于1对中着丝粒染色体的着丝粒附近,2条染色体上的信号强度相近;5S rDNA的杂交信号位于另外1对中着丝粒染色体的着丝粒附近,2条染色体上的信号强度一强一弱。【结论】以胡桃楸花药顶端变红的雄花序为材料,成功建立胡桃楸高质量中期染色体制备及FISH技术体系,为核桃属植物的分子细胞遗传学研究奠定基础,也为花药量大的植物获取高质量染色体制片提供了参考。

池沼公鱼抗凝血作用的试验研究

研究池沼公鱼提取物的抗凝血作用。采用体外试验观察池沼公鱼提取物对家兔离体血浆复钙时间的影响,体内试验采用断尾法测定小鼠出血时间、毛细玻管法测定小鼠凝血时间。结果表明,池沼公鱼提取物能明显延长小鼠的出血、凝血时间及家兔离体血浆复钙时间,说明池沼公鱼提取物具有抗凝血作用。

虹鳟伪雄鱼与正常二倍体群体血清类固醇激素含量的季节变化

用17ɑ-甲睾酮混合饲料投喂诱导2批虹鳟Oncorhynchus mykiss伪雄鱼(三、四龄,平均体质量分别为2 200 g和3 056 g),以正常二倍体群体为对照(三、四龄平均体质量2 510 g和3 600 g),采用组织学和放射性免疫(RIA)方法,每2个月采血一次研究伪雄鱼和正常二倍体血清中性类固醇激素雌二醇(E2)和睾酮(T)的周年变化。结果表明,正常虹鳟和伪雄鱼精巢的组织细胞结构没有明显差异,伪雄鱼性腺组织形态与卵巢相似。3龄和4龄伪雄鱼血清中E2含量均在12月达到峰值,而3龄鱼的T浓度在12月达到峰值,4龄则在翌年2月达到峰值;3龄雌鱼血清中E2含量在10月达到峰值,4龄则在8月达到峰值,而T浓度均在12月达到峰值,进入繁殖期后E2含量开始下降;3龄和4龄正常雄鱼血清T浓度均在12月达最大值,E2在10月达峰值。结果表明,测定血清性类固醇激素浓度可用于准确判断鱼类的生殖状态,为正确利用虹鳟伪雄鱼提供参考。

大刺鳅生殖季节雄鱼的脂肪酸组成研究

[目的]为进一步开发大刺鳅的营养价值和改进大刺鳅亲鱼培育方法提供参考。[方法]采用气相色谱法,对大刺鳅生殖季节雄鱼精巢、肌肉和肝胰脏内的脂肪酸组成和含量进行了测定,分析了脂肪酸在大刺鳅不同组织中的分布及其相互关系。[结果]在雄鱼精巢、肝胰脏和肌肉中的脂肪酸种类不同;雄鱼精巢C22:4n-6含量最高,达33.52%;肌肉中C18:1n-9c含量最高,达23.24%;肝胰脏中DHA含量最高(45.68%)。单不饱和脂肪酸和饱和脂肪酸含量均以肌肉最多,分别为31.18%和35.02%,多不饱和脂肪酸含量以肝胰脏最高(59.52%),多不饱和脂肪酸中的n-3系列脂肪酸含量以肝胰脏最高(50.03%)。[结论]给大刺鳅投喂DHA及AA含量高的饲料原料有助于n-3PUFA在肝胰脏中作为营养物质储存,同时加大C22:4n-6投喂量有助于性腺的发育。

野生斑幼鱼与雌、雄性亲鱼肌肉脂肪酸组成分析

为了研究不同生长阶段和不同性别斑肌肉常规营养成分及脂肪酸组成的差异,试验采用国家标准方法分析野生斑幼鱼与雌、雄性亲鱼肌肉常规营养成分及脂肪酸组成。结果表明:斑肌肉的粗蛋白含量丰富(18.90%~21.59%),粗脂肪含量较低(0.91%~1.33%)。斑肌肉脂肪酸含量因生长期和性别不同而不同,斑幼鱼肌肉硬脂酸(C_(18:0))和十八碳烯酸(C_(18:1n7))显著高于雌、雄性亲鱼(P<0.05),亚油酸(C_(18:2n6))也显著高于雌、雄性亲鱼(P<0.05),斑幼鱼及雄性亲鱼的油酸(C_(18:1n9))显著低于雌性亲鱼(P<0.05),亚麻酸(C_(18:3n3))则由幼鱼期的0.45%显著提高为1.23%~1.57%(P<0.05),花生四烯酸(C_(20:4n6))由幼鱼期的12.21%显著降低为6.24%~7.03%(P<0.05),二十碳五烯酸(C_(20:5n3))在幼鱼及雌、雄性亲鱼肌肉中含量分别为1.01%、2.04%、3.98%,且差异显著(P<0.05)。幼鱼n-3系列多不饱和脂肪酸总量(∑n-3PUFA)为1.46%,显著低于雌、雄性亲鱼(P<0.05),雌性亲鱼(3.61%)显著低于雄性亲鱼(5.21%)(P<0.05);幼鱼n-6系列多不饱和脂肪酸总量(∑n-6PUFA)为20.72%,显著高于雌、雄性亲鱼(P<0.05);雌、雄性亲鱼n-3系列多不饱和脂肪酸总量/n-6系列多不饱和脂肪酸总量(n-3/n-6)显著高于幼鱼(P<0.05)。

中国原始彩陶鱼纹装饰象征寓意探讨

通过分析中国原始彩陶装饰鱼纹,对“鱼纹是图腾崇拜象征”的观点提出了质疑,认为鱼纹是物候特征的象征,是“阴阳鱼”的象征。

半滑舌鳎伪雄鱼性腺发育的组织学研究

[目的]了解半滑舌鳎性逆转的生理发育过程。[方法]对5个家系的半滑舌鳎进行性腺发育的组织学观察、遗传性别鉴定和生理性别分析。[结果]半滑舌鳎性逆转有着明显的群体性,性逆转只发生在特定群体中,有些群体完全不逆转;半滑舌鳎发生逆转的遗传雌鱼在性腺发育过程中,会出现明显的兼性阶段,即雌雄兼有的特有过程。[结论]该研究结果可为剖析半滑舌鳎性逆转的分子、生理机理以及性逆转遗传因子的作用机理提供研究方向和研究线索。

细胞质雄性不育辣椒育性恢复基因特异分子标记的筛选

利用集团分离分析法(Bulked segregant analysis BSA),以辣椒细胞质雄性不育系BU-12、恢复系RF-12为材料共筛选了336条RAPD引物,其中引物S418在恢复系中呈现特异性扩增,得到一条约3000bp的特异片段。回扩得到两条片段,测序表明大小为1515bp,1162bp。荧光原位杂交证实1515bp片段为恢复系特有,命名为S418_(1515)。序列分析表明S418_(1515)为一新发现的序列,Blastn序列比对同源性小于40%,tBlastx比对发现该序列与水稻2、4、7、10号染色体的几个BAC克隆上的序列高度同源。推测可能与其具有相似的编码功能,为进一步从分子水平研究辣椒育性恢复打下了坚实的基础。根据测序结果设计特异引物,将S418_(1515)转化成特异PCR标记,证明能用于候选材料的初筛。

鱼类性别控制研究的进展

鱼类性别控制的研究，对水产养殖来说，具有重人的实用意义。因为许多养殖鱼类其生物学或经济性状诸如生长率、成熟年龄、繁殖方式、体色、体型和个体人小等雌雄鱼之间存在差异。因此，人们可以根据需要专门生产全雌或全雄苗种进行单性养殖以提高经济效益。另外，鱼类性别控制的研究，对阐明鱼类性别分化和性别决定机制等理论问题也是非常有用的。所以，鱼类性别控制的研究，一直受到人们的高度重视，并取得了引人注目的成果。现就国内外鱼类性别控制研究的进展情况作一较为全面的介绍。

从《因为女人》看女性生存的窘境和未来取向

阎真在新作《因为女人》中,以理解同情女性的写作态度和真实细腻的叙述技巧,准确刻画出女性在性别劣势下的无奈选择以及在欲望化社会的伤感结局和在男权文化中的无力挣扎。但是,不自觉的男性视角使作者并没有真正认识到,是男权主导下的文化决定了女性生存的窘境,男女自醒共进下的文化变革才是改变女性未来的必由之路。

澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼营养组成比较分析

【目的】探索澳洲龙纹斑亲鱼生长关键阶段的营养组成,提升澳洲龙纹斑人工繁殖技术,以增加其鱼类苗种资源。【方法】通过分析化学方法检测澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼的蛋白质、脂肪、氨基酸和脂肪酸等含量,并进行分析和评价。【结果】澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼肌肉中脂肪和蛋白质含量都呈极显著差异,雌、雄亲鱼肌肉中17种氨基酸除了组氨酸和胱氨酸的含量无显著性差异(P>0.05)外,其他15种氨基酸均为雌亲鱼含量极显著高于雄亲鱼(P<0.01),雌亲鱼的氨基酸总量、必需氨基酸总量、非必需氨基酸总量、甜味氨基酸总量、苦味氨基酸总量、酸味氨基酸总量、呈味氨基酸总量、含硫氨基酸总量、支链氨基酸总量和芳香族氨基酸总量等均极显著高于雄亲鱼(P<0.01)。澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼脂肪酸组成中含量最高的均是油酸C18∶1n9c,棕榈酸C16∶0次之,而且雌亲鱼的棕榈酸C16∶0含量极显著高于雄亲鱼(P<0.01),但雌、雄亲鱼的油酸C18∶1n9c含量无显著性差异,雌、雄亲鱼n-3/n-6的比值都为1.0。澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼都达到了WHO/FAO提出的E/T应为40%左右和E/NT应为60%以上的参考蛋白质模式标准,雌、雄亲鱼的氨基酸比值系数分SRCAA相近且高达78%,而且富含不饱和脂肪(∑UFA为57.4%和55.4%)。【结论】澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼的主要营养成分脂肪、蛋白质差异显著。建议澳洲龙纹斑雌、雄亲鱼分池饲养,饲喂不同营养的饲料。雌、雄亲鱼肌肉营养价值高,是优质的动物蛋白源。

河川沙塘鳢雌雄亲鱼肌肉中脂肪酸含量的比较研究

[目的]对河川沙塘鳢雌、雄鱼亲鱼肌肉中脂肪酸含量进行比较。[方法]以不同生殖时期(III、IV和V期)的河川沙塘鳢雌、雄鱼亲鱼为研究对象,采用氯仿-甲醇溶液抽提法和气相色谱法分析其肌肉脂肪酸组成的变化。[结果]在雌、雄亲鱼肌肉中检测到27种脂肪酸,不饱和脂肪酸含量丰富。在河川沙塘鳢雌鱼肌肉中n-3系列脂肪酸含量基本保持不变,n-6系列脂肪酸含量在III期达到最高值,在V期达到最低值,n-6系列脂肪酸主要被用于卵巢的发育。在河川沙塘鳢雄鱼肌肉中,在IV期n-6系列脂肪酸含量达到最大值,为精巢的发育储存能源。雌、雄亲鱼肌肉中n-3系列脂肪酸含量大于n-6系列脂肪酸。[结论]该研究为开展河川沙塘鳢的人工增养殖提供理论指导。

尼罗超雄鱼的规模化制种与生产应用

为大量繁殖尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)超雄鱼,利用雌性激素处理刚孵化出膜的YY型鱼苗可使其转化为雌鱼,且具有生殖功能这一关键技术,使原先的"三系配套"技术简化为两系配套,并运用于实际生产。使用该技术建立了YY♂/YY△♀种质库,储备超雄鱼近20万尾,YY型生理雌鱼近万尾,生产XY型全雄鱼近3亿尾,现已应用于福建、海南和广东等省区。

小公鱼方便食品的研制

以新鲜的小公鱼为原料,探讨小公鱼方便食品的加工工艺,对盐渍条件、调味配方、油炸条件、杀菌条件等工艺进行了研究。结果表明,以湿盐渍腌制法效果为最好,其最佳工艺条件为盐质量分数5%,浸泡时间20 min;调味时间20 min;油炸温度195℃,油炸时间55 s;杀菌温度121℃,杀菌时间10 min。采用正交试验确定最佳配方为白砂糖10%,食盐6%,辣椒2%,料酒10%,胡椒1%,八角1%,花椒0.5%,在此条件下制得小公鱼方便食品色泽、风味、咀嚼口感好。

煤矿井下可退式卡瓦打捞筒的研制及应用

煤矿井下卡钻、埋钻导致的孔内断钻杆事故时常发生,目前常用的公母丝锥造扣的打捞方法成功率较低,不仅耗费大量的人力物力,还会影响煤矿开采生产进度。基于此,设计了井下可退式卡瓦打捞筒,通过外筒的螺旋锥面驱动卡瓦径向卡紧断裂的钻杆,实现起拔打捞井内钻杆。卡瓦抱紧钻杆的结构设计,提高了打捞筒对断裂钻具的把持力。控制环的键槽结构设计,实现了复杂工况下可退式操作。分析了打捞作业时钻机回转扭矩产生的切应力与打捞筒强度的关系、钻机起拔力产生的正应力与打捞筒强度的关系,为打捞筒壁厚参数设计提供理论支持;分析了钻机起拔力转换为卡瓦对钻杆抱紧力的公式,验证了卡瓦打捞筒打捞孔内钻具的可行性;试制的打捞筒在山西新源煤矿井下现场进行了打捞试验,试验表明其结构设计合理,打捞性能可靠。本研究为煤矿井下处理复杂钻孔断钻事故提供新型工具,为打捞工具结构设计提供了理论依据。

钻具打捞技术在盐卤水平对接井中的应用

随着盐卤水平井对接井的数量越来越多,钻具事故出现也越来越多。钻具打捞技术在盐卤水平对接井中的应用,目的是减少事故出现机率。文章提出了简单的解决方案。

几种K型不育系及其后代染色体的细胞学分析

在杂交小麦的育种研究中,创制核质杂种小麦能够集纯系育种和雄性不育杂种优势2种方法的优点,拓宽小麦品种改良和杂种优势的遗传基础。应用荧光原位杂交和基因组原位杂交技术检测了8个K型不育系及其后代的染色体组成,结果表明,K型不育系材料除YM3和YM3B外,其他不育系材料均含有1BL/1RS易位染色体,且易位染色体着丝粒组成未发生变化;K型不育系材料杂交后代均产生比例不等的单倍体,其中,K-Salmon不育系杂交后代还检测到一定比例的双生苗。这些K型不育系材料及其杂交后代的细胞学分析结果可为揭示单倍体分子机制提供数据基础和研究思路。

马岭水利枢纽集运鱼系统设计研究

马岭水利枢纽位于贵州省马别河峡谷河段,受坝高和地形条件的限制,采用“固定集鱼平台集鱼+公路转运+滑槽放流”的过鱼方案,是国内第一个采用这种过鱼方案的工程。中国电建集团贵阳勘测设计研究院有限公司和四川大学水力学与山区河流开发保护国家重点实验室在鱼类游泳能力测试和水力学模型试验的基础上,对该水利枢纽集鱼系统进行了重点研究,通过工程措施,塑造了诱鱼水力学条件,研究成果可为类似工程过鱼设施的设计提供参考。