甘蓝型油菜与紫罗兰体细胞杂交研究

以甘蓝型油菜湘油15号和紫罗兰的下胚轴为材料,分离制备原生质体。采用PEG-高Ca2+-高pH法进行原生质体融合,在PEG浓度为30%,原生质体融合密度为5.0×105个/mL下融合25min,融合率可达17%。在附加1.5mg/L2,4-D,0.5mg/LNAA,0.5mL/LBA的改良的KM8p培养基中,以0.3mol/L蔗糖和0.1mol/L葡萄糖作渗透稳定剂进行液体浅层培养融合体,培养3～6d细胞发生第1次分裂,7d时统计分裂频率最高为13.8%,35d后形成大量的细胞团和肉眼可见的小愈伤组织,其植板率最高为6.5%。然后转移到含有0.1mg/L2,4-D和0.2mg/LBA的MS固体培养基上使其增殖。当愈伤组织长至5mm左右时,将其转到含有0.5mg/LBA,0.1mg/LNAA和0.2mg/LGA3的MS分化培养基上诱导芽分化。当芽长1～2cm时,将其切下插入附加0.5mg/LIBA的1/2MS生根培养基上,两周后即可获得完整植株。细胞学鉴定表明获得了杂种植株。