兔骨关节炎模型的建立以及关节炎软骨组织中MMP-1/-13的表达

目的评价家兔膝关节前交叉韧带切断(ACLT)及内侧半月板前1/3切除制作骨关节炎(OA)模型方法的可行性,同时探索关节炎发病的不同时期,关节软骨中基质金属蛋白酶(MMP)-1,MMP-13的基因表达、蛋白表达水平的变化情况。方法实验组家兔30只行ACLT及内侧半月板前1/3切除术造模,分别于术后4周、8周、12周处死10只,假手术对照组家兔10只于术后12周处死。进行股骨髁关节软骨退变的大体评分;取退变的软骨组织,用实时定量PCR(Real-time PCR)及Western blot印记杂交方法测定软骨组织中MMP-1和MMP-13的mRNA和蛋白表达水平。结果ACLT及内侧半月板前1/3切除术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,对照组无明显软骨退变,不同组动物关节软骨评分有统计学差异。MMP-1的mRNA表达和蛋白表达在正常对照组水平均较低,造模4周开始升高,到第8周及第12周持续升高,且mRNA表达和蛋白表达升高的趋势相同;MMP-13在造模4周时表达开始升高,mRNA表达和蛋白表达趋势相同,造模第8周时持续升高,但在造模第12周时MMP-13mRNA表达和蛋白表达下降。结论家兔膝关节ACLT及内侧半月板前1/3切除制作OA模型的方法简便可行,MMP-1和MMP-13在骨关节炎的发病过程中有不同程度的升高,可以作为OA研究的评价指标。本实验结果提示,在OA发展的过程中,MMP-1和MMP-13的表达不平行,二者调控通路可能存在差异。MMP-13的mRNA表达的变化趋势与其蛋白水平的变化趋势相符合,说明引起MMP-13在OA病程中晚期下降的调控发生在翻译前水平。

复元胶囊对兔膝骨关节炎滑膜IL-1β、MMP-13及iNOS表达的影响

目的:通过观察复元胶囊对实验性兔膝骨关节炎(Osteoarthritis,OA)滑膜组织形态学变化的影响,以及复元胶囊对滑膜白细胞介素-1β(Interleukin-1 β)、基质金属蛋白酶-13(Matrix metallo proteinase-13)及诱导型一氧化氮合酶(Induced nitric oxide synthase)表达的影响,探讨具有补益肝肾、益气活血作用的复元胶囊对实验性兔膝OA的治疗作用及其机理。方法:60只新西兰兔,随机分为复元胶囊低、中、高剂量组、模型组和正常组,用改良Hulth法制造兔膝OA模型,中药组给予复元胶囊灌胃,模型组给予生理盐水灌胃,连续分别用药4、8周和12周。HE染色光镜观察滑膜组织形态并评分,透射电镜观察滑膜组织超微结构,免疫组化检测滑膜IL-1β、MMP-13及iNOS的表达。实验后对滑膜评分和3个指标(IL-1β、MMP-13、iNOS)进行前后比较和组间比较。结果:复元胶囊低、中、高剂量组3个时间段的滑膜炎症明显小于同期模型组(P<0.05),这3个治疗组3个时间段的滑膜IL-1β、MMP-13及iNOS的表达显著低于同期模型组(P<0.05),中、高剂量组的差异非常显著(P<0.01)。结论:复元胶囊可明显改善实验性兔膝OA滑膜组织形态学的病理改变,显著抑制实验性兔膝OA滑膜组织的IL-1β、MMP-13和iNOS的表达。复元胶囊可改善实验性兔膝OA滑膜组织形态学的病理改变的作用与其抑制滑膜组织IL-1β、MMP-13和iNOS的表达密切相关。

外源性H_2S对糖尿病大鼠心肌纤维化及MMP-13、MMP-14和TIMP-1表达的影响

目的:探讨外源性H2S对糖尿病大鼠心肌纤维化及基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)、MMP-14和金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metallo proteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法:52只SD雄性大鼠随机分成4组(每组13只):正常对照组、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组)、硫化氢干预正常大鼠组(H2S组)。腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(40 mg/kg)建立糖尿病模型;正常对照组每天腹腔注射等剂量生理盐水;STZ组与H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg)。HE和VG染色观察心肌纤维化,Western blot检测Ⅲ型胶原蛋白以及MMP-13、MMP-14和TIMP-1的表达。结果:排除死亡后每组成功建模量分别为12、9、9、10只;与正常对照组相比,STZ组心肌细胞排列紊乱,细胞间胶原纤维堆积明显增加,Ⅲ型胶原蛋白表达明显上调(P<0.01),而MMP-13、MMP-14和TIMP-1蛋白表达也增加(P<0.01);与STZ组相比,STZ+H2S组大鼠心肌细胞排列紊乱有所改善,细胞间胶原纤维堆积减少,Ⅲ型胶原蛋白表达下调(P<0.01),MMP-13、MMP-14和TIMP-1蛋白的表达也明显减少(P<0.01)。结论:H2S可改善糖尿病大鼠心肌纤维化,其机制可能与下调MMP-13、MMP-14和TIMP-1蛋白的表达有关。

脂联素随原代HSC活化表达的动态变化及其对原代HSC表达MMP-13的影响

目的:探讨脂联素mRNA在原代肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化过程中表达的变化趋势,以及其对体外培养的原代HSC增殖状况和金属基质蛋白酶-13(MMP-13)mRNA与蛋白表达的影响.方法:改良的肝脏二步原位灌注法分离培养原代HSC;以α-SMA为原代HSC活化的标志,Real-time PCR方法检测随HSC活化脂联素表达的动态变化;MTT方法检测脂联素对活化HSC增殖的影响,以外源性脂联素处理原代HSC,根据脂联素浓度,分为对照组,脂联素处理浓度62.5μg/L,125μg/L,250μg/L,500μg/L五组,Real-time PCR方法检测MMP-13 mRNA表达;ELISA方法检测原代HSC分泌的MMP-13蛋白量.结果:HSC存活率的下降与脂联素浓度呈线性相关(OR=0.828).MMP-13 mRNA和蛋白表达水平与外源性加入脂联素浓度正相关,当脂联素浓度增加至500 g/L时,MMP-13 mRNA表达增高至对照组的5.54倍,MMP-13含量增加至30.951μg/L显著高于对照组的24.127μg/L,差异具有显著统计学意义.结论:脂联素具有抑制肝纤维化的作用,其机制可能与抑制HSC增殖和增强MMP-13在HSC细胞的表达有关.

慢性肝病患者转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α和基质金属蛋白酶-13表达与临床价值

目的:分析慢性肝病患者转化生长因子(TGF)-β1、肿瘤坏死因子(TNF)-α及基质金属蛋白酶(MMP)-13的表达水平及其相互关系。方法:采用双抗体“夹芯”酶联免疫吸附法,对慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者及正常对照血TGF-β1、TNF-α及MMP-13进行检测,并分析其表达特点与临床价值。结果:慢性肝病患者血TGF-β1、TNF-α及MMP-13表达水平均高于正常对照组;肝癌患者组血清TGF-β1和TNF-α表达水平均明显高于肝硬化组和慢性肝病组(P<0.01);肝硬化组与肝癌患者组血MMP-13水平显著高于慢性肝炎组(P<0.01);慢性肝炎、肝硬化及肝癌患者的血清中TNF-α和TGF-β1表达水平呈显著相关性,但MMP-13水平与TNF-α、TGF-β1间无明显相关性。结论:TGF-β1、TNF-α和MMP-13在肝癌发展过程中过度表达,动态分析有助于肝癌的诊断和鉴别。

膝骨性关节炎患者治疗前后血清基质金属蛋白酶-9、12和13水平的变化

目的探讨膝骨性关节炎(KOA)患者治疗前后血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、12和13水平的变化。方法将45例KOA患者(病例组)予以双氯芬酸钠肠溶胶囊75 mg,1次/d,连用14 d。观察并比较患者治疗前和治疗14 d后血清MMP-9、12和13水平的变化。另取同期的健康体检者30例作为健康组。结果治疗前病例组患者血清MMP-9、12和13水平明显高于对照组(P<0.01)。治疗14 d后,病例组患者血清MMP-9、12和13水平均较前明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论 KOA患者体内存在MMP-9、12和13水平紊乱,在其诊断和治疗中起重要作用。MMP-9、12和13水平的变化可作为KOA患者疗效评价的敏感血清学指标。

血管内皮生长因子对关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）对体外培养的关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达的影响。方法体外培养SD乳鼠关节软骨细胞，分为4组，每组加入不同处理因素进行干预，A组：（对照组）不加任何处理因素；B组：10μg／LVEGF；C组：10μg／L白细胞介素（IL）-1B；D组：10μg/LVEGF＋10μg／L IL-1β。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测MMP-13mRNA的表达，蛋白免疫印迹法检测MMP-13蛋白的表达。结果B组（0．88±0．47）、C组（3．69±0．45）及D组（3．85±0．48）的MMP-13mRNA表达水平均显著高于A组（0．73±0．56），D组软骨细胞MMP-13的mRNA表达水平明显高于B组（P〈0．01）及c组（P〈0．05）。与A组（0．36±0．17）比较，B组（0．63±0．21）、c组（0．76±0．24）及D组（0．99±0．26）的MMP-13蛋白表达水平显著升高，D组MMP-13的蛋白表达水平明显高于B组（P〈0．05）及c组（P〈0．05）。结论在骨关节炎的发病过程中VEGF可能通过上调软骨细胞MMP-13的表达发挥重要作用。

干扰素-γ对大鼠肝组织中的MMP-13与TIMP-1表达的干预作用

目的探讨干扰素-γ对实验性大鼠肝组织中的基质金属蛋白酶-13(MMP-13)与金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。方法SD大鼠22只,随机分为3组:正常组(7只)、模型组(6只)和干扰素-γ组(9只);用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,在10周末处死各组大鼠,取肝脏进行HE染色,并运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达量。结果MMP-13 mRNA的表达,与正常组对比,模型组和干扰素-γ组的MMP-13 mRNA的表达量增高(P<0.01),但模型组和干扰素-γ组之间还不能认为有统计学差别(P>0.01);而TIMP-1 mRNA表达与正常组相比,模型组和干扰素-γ组中的TIMP-1 mRNA的表达都升高(P<0.01),而且模型组中的TIMP-1 mRNA表达量比干扰素-γ组高(P<0.01)。在肝纤维化病理学观察的量化秩和分析中,各组之间的差别明显(P<0.005)。结论干扰素-γ逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中的TIMP-1mR-NA的表达,从而逆转肝纤维化。

膈下逐瘀汤逆转猪血清诱导大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的:通过观察膈下逐瘀汤对实验性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP-13)及金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法:大鼠随机分为空白对照组、膈下逐瘀汤组、猪血清组、猪血清+膈下逐瘀汤组。猪血清2.0 mL.kg-1腹腔注射,每周2次共12周诱导大鼠免疫性肝纤维化模型,同时膈下逐瘀汤每天按7.37 g.kg-1灌胃给药12周。Masson染色法观察肝组织病理学改变,ELISA检测肝组织MMP-13和TIMP-1含量,实时定量Rt-PCR检测肝组织MMP-13和TIMP-1 mRNA表达。结果:猪血清组肝组织胶原面积为(10.38±2.01)%;MMP-13蛋白(14.05±2.64)ng.g-1;MMP-13 mRNA(1.91±0.73)倍;TIMP-1蛋白(14.91±1.07)ng.g-1;TIMP1 mRNA(18.40±2.84)倍。与猪血清组比较,膈下逐瘀汤给药可显著降低肝组织胶原面积(6.66±1.04)%(P<0.05),增加肝组织MMP-13蛋白(20.03±2.14)ng.g-1和MMP-13mRNA(4.12±0.59)倍(P<0.05),降低肝组织TIMP-1蛋白(13.47±1.22)ng.g-1和TIMP-1mRNA(4.89±0.74)倍(P<0.05)。结论:膈下逐瘀汤可有效地逆转实验性肝纤维化大鼠肝组织胶原纤维含量,其机制可能与调节MMP-13和TIMP-1的表达有关。

益母草对产后子宫内膜炎大鼠内膜止血修复的实验研究

目的建立产后大鼠子宫炎症模型,从分子生物学角度探讨益母草对产后子宫复旧的内在机制。方法将大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、益母草组、三七总皂苷组。建立产后子宫炎症模型,用三七总皂苷作阳性对照,采用ELISA法对各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的量进行测定,对各组大鼠的子宫组织进行HE染色观察,同时用免疫组化法检测子宫组织中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、I型胶原(collagen I)的表达。结果模型组血清TNF-α水平明显高于空白对照组;与模型组比较,益母草组血清TNF-α水平显著降低。模型组与空白对照组比较,MMP-13、TIMP-1明显升高,collagen I表达上调;与模型组比较,益母草组MMP-13无明显变化,TIMP-1明显降低,collagen I表达下降。结论益母草可能使产后炎症子宫的TNF-α水平下降,下调TIMP-1的表达,启动止血修复机制,并加快细胞外基质(ECM)降解,从而加速产后子宫复旧。