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mazEF基因在肠球菌中的分布及与耐药的相关性研究 被引量:1
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作者 张利霞 王占黎 +5 位作者 王翠峰 胡同平 徐军 牛海英 邹绍伟 菅建国 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2018年第4期482-486,共5页
目的研究mazEF基因在肠球菌临床分离株的分布特征,并探讨其与肠球菌耐药的相关性。方法收集包头地区2013年1月—2016年12月临床来源的肠球菌187株,随机选出90株作为实验菌株,采用聚合酶链反应(PCR)法及基因测序技术检测mazEF基因,VITEK-... 目的研究mazEF基因在肠球菌临床分离株的分布特征,并探讨其与肠球菌耐药的相关性。方法收集包头地区2013年1月—2016年12月临床来源的肠球菌187株,随机选出90株作为实验菌株,采用聚合酶链反应(PCR)法及基因测序技术检测mazEF基因,VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定及药敏系统鉴定肠球菌并同步测定10种抗菌药物(氨苄西林、青霉素、四环素、替加环素、左氧氟沙星、环丙沙星、万古霉素、利奈唑胺、高水平庆大霉素和红霉素)最低抑菌浓度(minimal inhibititory concentration,MIC),分析mazEF基因在肠球菌基因组中的分布及与耐药之间的关联。结果 90株肠球菌属,mazEF基因在肠球菌属基因组的阳性率为86.7%。在对氨苄西林、左氧氟沙星、青霉素、四环素、高水平庆大霉素、红霉素、环丙沙星和万古霉素耐药的肠球菌中,mazEF基因阳性率分别为88.7%、86.2%、89.1%、84.6%、81.5%、85.0%、89.4%和60.0%,敏感的肠球菌中,mazEF基因阳性率分别83.7%、87.5%、82.6%、92.0%、94.4%、100.0%、87.1%和88.2%,耐药株和敏感株中,mazEF基因阳性率无统计学差异(P>0.01)。结论 mazEF基因在肠球菌基因组中分布的阳性率为86.7%(78/90),其分布与对氨苄西林、左氧氟沙星、青霉素、四环素、高水平庆大霉素、红霉素和环丙沙星耐药无显著相关性,与天然耐万古霉素也无显著相关性。 展开更多
关键词 肠球菌属 mazef基因 耐药
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鱼腥藻PCC7120染色体MazEF同源基因对asr0757/alr0758的初步研究 被引量:1
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作者 陈思礼 陈洁 吴汇兰 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2016年第1期29-33,54,共6页
鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758,经NCBI比对显示其与大肠杆菌中的毒素-抗毒素基因Maz EF具有较高的同源性,且具有毒素-抗毒素系统基因的保守遗传结构,为研究其是否属于Maz EF家族系统基因,构建同时含有asr0757和alr0758... 鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asr0757/alr0758,经NCBI比对显示其与大肠杆菌中的毒素-抗毒素基因Maz EF具有较高的同源性,且具有毒素-抗毒素系统基因的保守遗传结构,为研究其是否属于Maz EF家族系统基因,构建同时含有asr0757和alr0758基因的双启动子选择性表达载体,先选择性诱导了该基因对的表达,再验证了其表达产物对细菌生长的影响.结果显示:成功诱导表达出了目的蛋白asr0757(13.5KD)和alr0758(17.5KD),当单独诱导asr0757基因表达时,细菌生长状况不受影响,单独诱导alr0758表达时细菌生长明显受到抑制,同时诱导asr0757和alr0758基因时细菌生长恢复正常,说明asr0757/alr0758构成具有生物功能的Maz EF家族系统基因对,具有毒性与抗毒性功能. 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC7120 毒素-抗毒素系统 mazef asr0757/alr0758
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双歧杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统-MazEF的分子进化分析
3
作者 韦艳霞 刘佃滨 +4 位作者 郑纪伟 尤红娟 张鹏 李阳 汤仁仙 《中国医学创新》 CAS 2014年第34期16-19,共4页
目的:对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素(TA)系统MazEF进行分子进化分析。方法:利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属... 目的:对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素(TA)系统MazEF进行分子进化分析。方法:利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属的16 S rRNA序列,应用Clustal X2和MEGA4软件对Maz F做分子进化分析。结果:共搜索到双歧杆菌株染色体编码毒素蛋白MazF 26个。分子进化分析显示:整个双歧杆菌属的MazF保守性不好;MazF与16 S rRNA的共进化仅在个别菌种中发现,大部分MazF的聚类结果与相应菌种16 S rRNA的聚类结果不同。结论:双歧杆菌中的TA系统MazEF可能是通过基因的水平转移整合入基因组中,属于菌株非核心基因组部分。 展开更多
关键词 mazef 毒素-抗毒素系统 分子进化 双歧杆菌
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鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asl3212/all3211构成mazEF家族的毒素-抗毒素系统 被引量:4
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作者 杨自言 冯婷婷 宁德刚 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期1-4,共4页
大肠杆菌染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxin system)mazEF介导多种胁迫诱导的细胞死亡或生长抑制。鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asl3212/all3211具有TA系统保守的遗传结构,其编码产物与大肠杆菌mazEF系统的毒素MazE和抗毒素... 大肠杆菌染色体上毒素-抗毒素系统(TA,toxin-antitoxin system)mazEF介导多种胁迫诱导的细胞死亡或生长抑制。鱼腥藻PCC7120染色体上的基因对asl3212/all3211具有TA系统保守的遗传结构,其编码产物与大肠杆菌mazEF系统的毒素MazE和抗毒素MazE同源,可能构成mazEF家族的TA系统。利用构建的选择性表达系统分析asl3212和all3211表达产物对大肠杆菌细胞生长活性的影响,结果显示诱导all3211表达显著抑制细胞生长,同时诱导asl3212表达使all3211编码产物抑制的细胞恢复生长。提示all3211为毒素基因,asl3212为抗毒素基因,二者组成一个功能性的mazEF家族的TA系统。 展开更多
关键词 鱼腥藻PCC7120 TA系统 mazef asl3212 all3211
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北京和非北京基因型结核分枝杆菌生长曲线及mazEF系统的研究
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作者 谢婉莹 赵继利 +2 位作者 杨赛丽 刘微 袁俐 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期502-508,共7页
目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF... 目的研究北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达有无差异。方法测绘上述菌株及其mazEF3,6,9基因缺失和过表达菌株在标准、低氧和营养饥饿培养条件下的生长曲线。使用qRT-PCR技术检测各菌株的mazEF3, 6, 9、mazF3, 6,9和mazE3, 6,9基因mRNA表达水平;利用Western Blot技术检测MazF9蛋白表达水平。结果在标准和低氧条件下培养的第4、6、8、10 d,营养饥饿条件下培养的第2、4、6、8 d,北京基因型菌株的OD值(细菌数量)均高于非北京基因型菌株,差异有统计学意义(P<0.05);在上述3种培养条件下,北京和非北京基因型mazEF3,6,9缺失突变株和过表达株菌数均低于其亲本株。在mRNA、蛋白水平上,与非北京基因型菌株相比,北京基因型菌株mazEF3高表达9.55倍、mazF3高表达4.86倍、mazF6高表达2.64倍、mazF9高表达5.27倍和mazE9低表达0.16倍;mazF9蛋白高表达1.62倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论北京与非北京基因型结核分枝杆菌的生长曲线、mazEF3,6,9系统表达存在差异,mazEF系统与北京基因型菌株流行相关。 展开更多
关键词 北京基因型结核分枝杆菌 非北京基因型结核分枝杆菌 毒素-抗毒素mazef系统 生长曲线
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结核分枝杆菌标准株H37Rv mazEF3基因过表达菌株的构建及初步鉴定
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作者 屈艳琳 赵继利 +3 位作者 刘微 申爱平 曹帅丽 袁俐 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第1期46-51,共6页
为构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,检测过表达菌株mazEF3 mRNA表达水平。使用穿梭质粒pMV361,把mazEF3基因连入其中,构建重组质粒pMV361-mazEF3;利用电穿孔技术,将穿梭表达质粒导入H37Rv中,并将该菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选,提... 为构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,检测过表达菌株mazEF3 mRNA表达水平。使用穿梭质粒pMV361,把mazEF3基因连入其中,构建重组质粒pMV361-mazEF3;利用电穿孔技术,将穿梭表达质粒导入H37Rv中,并将该菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选,提取阳性菌株质粒进行PCR、双酶切后送公司测序进一步验证;检测不同电转电压下mazEF3 mRNA表达水平,寻找最佳电转电压。结果显示,成功构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,PCR、双酶切后目的基因,测序结果与已知mazEF3基因比对,同源性100%。实时荧光定量检测,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。由此可知,成功构建及初步鉴定了mazEF3 mRNA过表达菌株,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 mazef3 毒素-抗毒素系统 过表达
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大肠杆菌mazG基因参与mazEF介导的严紧反应调控
7
作者 段恒 杜现礼 车永胜 《国际药学研究杂志》 CAS 北大核心 2020年第8期623-631,共9页
目的探索mazG基因参与调控mazEF毒素-抗毒素系统(TAs)介导的细菌生长抑制与程序性死亡的分子机制,明确MazG蛋白真正的生理功能。方法以大肠杆菌MC4100为原型,通过relA基因的回复突变,获得relA野生型的菌株MC4200。通过同源重组的方法,... 目的探索mazG基因参与调控mazEF毒素-抗毒素系统(TAs)介导的细菌生长抑制与程序性死亡的分子机制,明确MazG蛋白真正的生理功能。方法以大肠杆菌MC4100为原型,通过relA基因的回复突变,获得relA野生型的菌株MC4200。通过同源重组的方法,构建大肠杆菌mazG、mazEF、mazEFG基因敲除菌株,测试mazG基因在不同基因背景菌株中过表达对细菌存活率的影响;通过rifampicin、H2O2及serine hydroxamate(SHT)等胁迫条件处理细菌,研究mazG及mazEFG操纵子缺失菌株的生长曲线与存活率;克隆大肠杆菌mazG基因,构建诱导型过表达质粒pET28a-mazG及突变体pET28a-mazG E38A,在BL21菌株中表达纯化MazG蛋白,通过酶学实验验证了MazG蛋白的去磷酸酶活性;测试突变体过表达对细菌存活率的影响。结果mazG过表达对大肠杆菌MC4200的生长无显著影响,但对mazEFG基因敲除株具有显著抑制作用;MazG的细胞毒性依赖于其NTP-PPase酶活性;mazEF的存在会显著抑制mazG的表型;mazEF/mazG/mazEFG敲除不影响大肠杆菌正常环境下的生长曲线;在胁迫条件下,mazG敲除菌株的存活率与mazEFG的敲除菌株基本一致,显著高于野生型。结论mazG基因参与mazEF诱导的细菌程序性死亡调控,并对细菌的生长抑制具有重要作用。本研究为TAs的研究提供了新的角度,有助于进一步理解TAs在细菌生长与死亡调节中的作用机制。 展开更多
关键词 毒素-抗毒素系统 mazef mazG 细胞程序性死亡 严紧反应
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大肠埃希菌和志贺菌mazEF基因搜索及蛋白分子进化分析
8
作者 糜祖煌 翁幸鐾 秦玲 《中华临床感染病杂志》 CAS 2011年第3期-,共4页
目的 对已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺氏菌和1株未定名肠杆菌进行maze和mazf蛋白的分子进化分析.方法 用biocyc提供的pathway tools(13.5版)搜索已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺菌和1株未定名肠杆菌毒素mazf编... 目的 对已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺氏菌和1株未定名肠杆菌进行maze和mazf蛋白的分子进化分析.方法 用biocyc提供的pathway tools(13.5版)搜索已完成基因组测序的10株大肠埃希菌、6株志贺菌和1株未定名肠杆菌毒素mazf编码基因mazf(别名chpa)和抗毒素maze编码基因maze(别名chpr),再用mega4.1软件中的minimum evolution法对maze和mazf蛋白做分子进化分析.结果 共有12株搜索到毒素mazf(编码基因为mazf),11株搜索到抗毒素maze(编码基因为maze),另有5株没有搜索到mazef编码基因.分子进化分析提示大肠埃希菌和志贺菌的maze和mazf的保守性较好.结论 mazef是在原核染色体发现的第一个毒素-抗毒素(ta)系统,但不是每株大肠埃希菌和志贺菌均存在这个系统,有可能存在其他ta系统.mazef缺失株表现为对抗菌约物抵抗,又因mazef介导细菌的细胞程序性死亡,mazef有可能成为抗菌药物的新靶位. abstract: objective to perform molecular evolution analysis of mazef gene in genome sequenced strains of escherichia coli and shigella. methods pathway tools (version 13.5) provided by biocyc was used to search encoding gene mazf of toxin mazf ( chpa) and encoding gene maze of antitoxin maze (chpr) in genome sequenced 10 strains of escherichia coli, 6 strains of shigella and 1 strain of unkown enterobacteria. then minimum evolution method in mega4. 1 software was used to analyze molecular evolution of maze and mazf. results encoding gene mazf of toxin mazf was found in 12 strains, and encoding gene maze of antitoxin maze was found in 11 strains, while neither maze nor mazf was found in rest 5 strains. both maze and mazf had good conservation in molecular evolution analysis. conclusions mazef is the first toxin-antitoxin system found in prokaryotic chromosomes, but not in all strains of escherichia coli and shigella. mazef deletion is associated with antibiotic resistance and it also mediates programmed cell death in bacteria, so mazef might be a new target for antimicrobial agents. 展开更多
关键词 大肠杆菌 志贺菌属 毒素-抗毒素系统 mazef基因 分子进化
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mazEF系统介导胁迫诱导细菌细胞程序性死亡 被引量:2
9
作者 庄强 宁德刚 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期905-909,共5页
mazEF是细菌染色体上的"毒素-抗毒素系统"基因(Toxin-antitoxin system,TA系统),可介导胁迫诱导细菌细胞程序性死亡。本文介绍了mazEF系统的遗传结构特征、生理生化功能、环境胁迫激活mazEF系统介导的细菌细胞程序性死亡的机... mazEF是细菌染色体上的"毒素-抗毒素系统"基因(Toxin-antitoxin system,TA系统),可介导胁迫诱导细菌细胞程序性死亡。本文介绍了mazEF系统的遗传结构特征、生理生化功能、环境胁迫激活mazEF系统介导的细菌细胞程序性死亡的机制,参与细胞死亡过程中的细胞信号和细胞因子的调控,以及关于mazEF系统介导的细菌细胞程序性死亡理论的争论,提出了进一步丰富和完善细菌细胞程序性死亡理论亟待解决的问题。 展开更多
关键词 毒素-抗毒素系统 mazef基因 环境胁迫 细菌细胞程序性死亡
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新疆地区汉族和维吾尔族居民感染结核分枝杆菌mazEF系统天然缺失与耐药相关性研究 被引量:1
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作者 屈艳琳 姜晓刚 +1 位作者 王保生 朱凡河 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期743-746,750,共5页
目的探讨新疆地区汉族和维吾尔族居民感染结核分枝杆菌mazEF系统天然缺失与耐药的相关性。方法采集新疆多地区汉族、维吾尔族活动性结核患者的痰液标本,NaOH处理后接种罗氏培养基培养,比例法药敏试验鉴定其耐药性;分离结核分枝杆菌,煮... 目的探讨新疆地区汉族和维吾尔族居民感染结核分枝杆菌mazEF系统天然缺失与耐药的相关性。方法采集新疆多地区汉族、维吾尔族活动性结核患者的痰液标本,NaOH处理后接种罗氏培养基培养,比例法药敏试验鉴定其耐药性;分离结核分枝杆菌,煮沸法提取DNA,PCR扩增mazEF系统,分析mazEF系统天然缺失与耐药性的相关性。结果共分离结核分枝杆菌838株,其中分离自汉族居民371株,分离自维吾尔族居民467株。汉族分离株中耐药6株,mazEF系统缺失68株;维吾尔族分离株中耐药23株,mazEF系统缺失31株。两民族分离株耐药率及mazEF系统缺失差异均有统计学意义(χ2值分别为6.557和27.123,P<0.05);敏感株与耐药株mazEF系统缺失率分别为12.24%和0,差异有统计学意义(χ2=4.024,P<0.05)。结论维吾尔族分离株结核分枝杆菌较汉族分离株耐药性高;mazEF系统缺失率汉族分离株高于维吾尔族分离株,敏感株mazEF系统缺失率高于耐药株,由此推测mazEF系统天然缺失与结核分枝杆菌耐药相关。 展开更多
关键词 汉族 维吾尔族 耐药 结核分枝杆菌 mazef
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大肠埃希菌TA系统mazEF的研究进展 被引量:1
11
作者 叶露 韦艳霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2012年第10期948-950,954,共4页
大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因。mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成。其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用。环境压力激活mazEF后,Maz... 大部分细菌的遗传物质中含有毒素-抗毒素系统(TA)的遗传基因。mazEF是大肠埃希菌染色体上的一对毒素抗毒素基因,由毒素基因mazF和抗毒素基因mazE组成。其在细菌的生长调控和细胞程序性死亡中发挥了重要的作用。环境压力激活mazEF后,MazF可以通过对mRNA的剪切作用造成翻译停止。mazEF的存在可以增加细菌对环境压力的耐受性、保持细菌遗传物质的稳定、参与抗生素引起的细胞死亡、也在细菌的耐药性中发挥重要作用。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 毒素-抗毒素系统系统 mazef
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细菌的凋亡及抗生素对其影响 被引量:1
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作者 成大荣 徐建生 +1 位作者 孙怀昌 李俊宝 《动物医学进展》 CSCD 2003年第4期63-65,共3页
许多研究表明 ,细菌同其他生物一样 ,其死亡并不是单纯的由于生物学的衰竭而导致的被动过程 ,而是通过有序的可控制的方式激活细胞内的凋亡程序从而导致细胞的死亡。本文以大肠杆菌为例 ,综述了大肠杆菌凋亡的部分机制以及抗生素与凋亡... 许多研究表明 ,细菌同其他生物一样 ,其死亡并不是单纯的由于生物学的衰竭而导致的被动过程 ,而是通过有序的可控制的方式激活细胞内的凋亡程序从而导致细胞的死亡。本文以大肠杆菌为例 ,综述了大肠杆菌凋亡的部分机制以及抗生素与凋亡的关系。重点介绍大肠杆菌 maz EF系统控制的细菌凋亡机理 ,以及氯霉素、壮观霉素、利福平等常见抗生素对凋亡的影响 。 展开更多
关键词 细菌 凋亡现象 抗生素 影响因素 生物学 凋亡程序 大肠杆菌 mazef系统 分子细胞学
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长双歧杆菌染色体上的基因BLJ_864和BLJ_865构成的Ⅱ型毒素—抗毒素系统
13
作者 韦艳霞 叶露 +1 位作者 刘佃滨 郭晓奎 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1319-1324,共6页
目的鉴定Bifidobacterium longum JDM301(B.longum JDM301)染色体上的BLJ_864、BLJ_865是否构成mazEF家族的一组Ⅱ型毒素—抗毒素系统(TA系统)。方法通过RT-PCR分析BLJ_864和BLJ_865在B.longum JDM301以及E.coli中的共转录;通过将带有BL... 目的鉴定Bifidobacterium longum JDM301(B.longum JDM301)染色体上的BLJ_864、BLJ_865是否构成mazEF家族的一组Ⅱ型毒素—抗毒素系统(TA系统)。方法通过RT-PCR分析BLJ_864和BLJ_865在B.longum JDM301以及E.coli中的共转录;通过将带有BLJ_864和BLJ_865的完整操纵子的质粒转化入E.coli,证明同一操纵子中的BLJ_864、BLJ_865所编码的抗毒素蛋白和毒素蛋白共表达;通过在E.coli中单独表达BLJ_864编码的毒素蛋白或将其与BLJ_865编码的抗毒素蛋白共表达,鉴定BLJ_864编码的毒素蛋白对细菌生长的抑制作用及其对应的BLJ_865编码的抗毒素蛋白能否消除毒素蛋白的生长抑制作用。结果 BLJ_864和BLJ_865构成一个二元操纵子,两者在其天然菌株B.longum JDM301中可以共转录;异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下,BLJ_864和BLJ_865所编码的抗毒素蛋白和毒素蛋白在异源宿主E.coli中共表达。BLJ_864编码的毒素蛋白的表达抑制异源宿主E.coli的生长,而将BLJ_865所编码的抗毒素蛋白与BLJ_864编码的毒素蛋白共表达则可以拮抗毒素蛋白的生长抑制作用。结论 B.longum JDM301基因组中的假定基因BLJ_864和BLJ_865编码一组有功能的、隶属mazEF家族的Ⅱ型TA系统。 展开更多
关键词 毒素—抗毒素系统 长双歧杆菌 mazef
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细菌的程序性细胞死亡 被引量:1
14
作者 张霄 李二丽 冯永君 《重庆工学院学报(自然科学版)》 2009年第5期32-39,共8页
真核生物程序性细胞死亡现象在生理病理过程中的作用和分子机制是生物学的热点领域,近年来一些研究表明,某些原核细菌也存在与真核生物相似的程序性细胞死亡现象.在面临外界严苛的生存条件时,程序性死亡是细菌维持种群生存的手段之一.... 真核生物程序性细胞死亡现象在生理病理过程中的作用和分子机制是生物学的热点领域,近年来一些研究表明,某些原核细菌也存在与真核生物相似的程序性细胞死亡现象.在面临外界严苛的生存条件时,程序性死亡是细菌维持种群生存的手段之一.除在分化过程中涉及的细胞自溶现象外,大部分细菌的程序性细胞死亡依赖于特殊的毒素/抗毒素系统(TA系统),例如研究较深入的m azEF系统.虽然目前关于细菌程序性死亡的具体调控机制和其生物学功能还存在着一定的争议,其在生物演化过程中可能的作用和地位已经引起了许多关注. 展开更多
关键词 细菌的程序性细胞死亡 细胞自溶现象 TA系统 mazef系统
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长双歧杆菌抗毒素基因mazE细菌双杂交诱饵质粒的构建与鉴定
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作者 李阳 杨帆 +2 位作者 韦艳霞 郑葵阳 汤仁仙 《徐州医学院学报》 CAS 2016年第6期351-355,共5页
目的构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pBT-mazE,为长双歧杆菌的压力调控机制研究奠定基础。方法PCR扩增抗毒素蛋白MazE的编码基因,插入到带有XcI基因的载体pBT构建诱饵质粒pBT-mazE。将pBT-mazE转化至大肠杆菌报告菌株XL-1 BlueMRF’Ka... 目的构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pBT-mazE,为长双歧杆菌的压力调控机制研究奠定基础。方法PCR扩增抗毒素蛋白MazE的编码基因,插入到带有XcI基因的载体pBT构建诱饵质粒pBT-mazE。将pBT-mazE转化至大肠杆菌报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan,检测诱饵蛋白maze-λcI的表达。将pBT-mazE和pTRG空载体共转化报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan,通过3-氨基-1,2,4-三氮唑(3-amino-1,2,4-triazole,3-AT)选择性筛选平板检测诱饵质粒的自激活作用。结果酶切和测序结果显示MazE蛋白编码序列成功克隆入载体pBT,融合区读码框正确。诱饵质粒pBT-mazE能够表达诱饵蛋白maze-λcI。pBT-mazE和pTRG空载体共转化的报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan在含有3-AT的选择性筛选平板上无菌落生成,而在no3-AT非选择性筛选平板上生长良好,表明诱饵质粒pBT-mazE在细菌双杂交系统中无自激活作用。结论所构建的诱饵载体pBT-mazE可以用于细菌双杂交的进一步实验。 展开更多
关键词 mazef 细菌双杂交系统 诱饵载体 长双歧杆菌
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问号钩端螺旋体MazF蛋白对巨噬细胞的毒性作用分析 被引量:1
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作者 张金良 Komi-Koukoura Komi +3 位作者 楼宏强 林旭瑷 严杰 孙爱华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期561-567,共7页
目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白(rMazE和rMazF)。采用DNA和RNA降解试验确定rM... 目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)MazEF毒素-抗毒素系统中MazF蛋白对巨噬细胞的细胞毒性及其机制。方法采用原核表达系统表达问号钩体赖型赖株MazEF毒素-抗毒素系统中的MazE和MazF蛋白(rMazE和rMazF)。采用DNA和RNA降解试验确定rMazF的DNA或RNA酶活性以及rMazE抑制rMazF酶活性的作用。采用实时荧光定量RT-PCT、Westernblot和激光共聚焦显微镜法,分别检测问号钩体赖株感染THP-1单核细胞时mazE和mazF基因转录、表达及分泌情况。采用CCK-8法和流式细胞术检测mazF基因产物对THP-1细胞的细胞毒性及死亡方式。结果rMazF能水解问号钩体赖株和THP-1细胞的RNA,但无DNA酶活性,rMazE能抑制rMazF的RNA酶活性。感染THP-1细胞后,mazE-mRNA和mazF-mRNA及MazE和MazF蛋白表达水平显著升高,但仅有MazF蛋白外分泌。mazF基因产物对THP-1细胞有细胞毒性并引起细胞坏死。结论MazEF毒素-抗毒素系统中具有RNA酶活性的MazF蛋白是问号钩体的毒力因子,可引起感染的巨噬细胞坏死。 展开更多
关键词 问号钩端螺旋体 mazef操纵子 毒素-抗毒素系统 细胞毒性
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细胞外死亡因子与细菌感染的研究进展
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作者 张霞 伊正君 付玉荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第11期1052-1056,I0001,I0002,共7页
在研究细菌mazEF介导的压力应激诱导细菌细胞程序性死亡的过程中发现一个新的群体感应信号分子,在细胞级联死亡反应中发挥了至关重要的作用。这种信号分子称之为细胞外死亡因子(EDF)。本文介绍了EDF的基本特征,探讨了在环境压力激活ma... 在研究细菌mazEF介导的压力应激诱导细菌细胞程序性死亡的过程中发现一个新的群体感应信号分子,在细胞级联死亡反应中发挥了至关重要的作用。这种信号分子称之为细胞外死亡因子(EDF)。本文介绍了EDF的基本特征,探讨了在环境压力激活mazEF系统介导的细菌细胞程序性死亡的生物学作用,以及EDF在不同的细菌系统中研究的现状和最新理论,对EDF的应用前景提出了进一步展望。 展开更多
关键词 细胞外死亡因子 细胞程序性死亡 mazef EDF家族 综述
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