McAb-ELISA检测丝虫特异IgG_4的应用研究

目的 探讨McAb -ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术 ,经细胞融合 ,建立起 7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体 (McAb)。以此为探针 ,采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏微丝蚴血症者血清的敏感性为 96 3% (10 4 / 10 8) ,测得IgG4的最低限量为 0 0 1ul/ml;检测丝虫病非流行区健康者、肠道线虫感染者、华支睾吸虫感染者和囊虫病患者等血清均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。经现场应用研究 ,同样获得良好的实用性 ,有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻—加热浓缩法，将尿样浓缩20倍。应用MCAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了43份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样，两法的阳性检出率分别为81．39％和69．76％；假阳性率分别为14．85％和0％。应用MCAb-RIHA和MCAb－Dot－ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样，前者出现的交叉反应率分别为16．36％和14．28％；后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb-RIHA和McAb-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻-加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样,两法的阳性检出率分别为78.31％和65.06％;假阳性率分别为14.85％和0％。就用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36％和14.28％;后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测尿中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

通过建立的冰冻—加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA 平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和110例慢性血吸虫病尿样。前者两法的阳性检出率分别为78.31%和65.06%。后者两法的阳性检出率分别为20%和10%。检测101份健康人尿样。两法的假阳性率分别为14.85%和0%。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36%和14.28%。后者出现的交叉反应率均为0%。12例尿路感染病人中5例含有蛋白的尿样加热前 McAb-Dot-ELISA 检测均阳性,而经76℃2h 加热后均为阴性。

McAb共激活T细胞介导肝癌细胞前后的膜分子与TCRVβ基因的表达

Ｔ淋巴细胞活化是一个涉及多种膜表面分子和受体以及一系列相关多肽的复杂过程，为了使Ｔ细胞发挥更好的识别和杀伤癌细胞的功能，采用抗ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ８０（Ｂ７１）、ＣＤ２、ＣＤ５８ＭｃＡｂ分别刺激健康人ＰＢＬｓ后作用肝癌细胞，对作用前后ＰＢＬｓ用ＦＡＣＳ进行表型分析，结果发现：作用后ＣＤ３和ＣＤ８分子表达比作用前明显增高，而ＣＤ４分子无显著变化，同时基因家族采用ＲＴＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析ＴＣＲＶβ基因１～２０亚家族表达水平与特征，健康人ＰＢＬｓ分别加入ＩＬ２、ＰＨＡ、抗ＣＤ３和ＣＤ３＋ＣＤ２８、ＣＤ２８＋ＣＤ８０、ＣＤ２＋ＣＤ５８作用肝癌细胞（ＢＥＬ７４０２）前表达水平平均约为５％，作用ＢＥＬ７４０２后表达水平约为１３％～２５％，其特征为Ｖβ７增高，这提示在癌抗原的参与下ＭｃＡｂ共刺激的Ｔ细胞活化，ＴＣＲ接受ＡＰＣ相应抗原的刺激，具有该ＴＣＲ的淋巴细胞迅速增殖而成为针对抗原的Ｔ细胞克隆，发挥其识别和杀伤癌细胞的作用，这将为肿瘤生物治疗的研究提供分子免疫学依据。

McAb检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制

本文报道了McAb(4F_2)ELISA检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制。实验对227例脑囊虫病患者脑脊液进行检测,循环抗原阳性率为84.58％,其中活动型脑囊虫病患者171例,循环抗原阳性率为93.57％。56例非活动型脑囊虫病患者,循环抗原阳性率为57.14％,前者的循环抗原强度也明显高于后者。83例患有其它中枢神经系统疾病的患者,1例阳性,阴性符合率为98.80％。本试验方法简便,结果客观,对脑囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高、特异性强。

检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。

^(131)I-抗VEGF McAb的制备及其体外免疫结合活性鉴定

目的 制备13 1I 抗 VEGFMcAb( 13 1I sc 72 69) ,并探讨其作为肿瘤放射免疫显像剂的可能性。方法 采用Iodogen法碘化标记制备13 1I sc 72 69。SephadexG5 0分离纯化标记产物 ,三氯醋酸法测定标记产物的放射化学纯度 ,体外细胞结合分析法鉴定13 1I sc 72 69的免疫结合活性。结果 ①13 1I标记率为 2 7.46% ,标记产物的放射性比活度为 1.0 2MBq/μg ,平均放射性化学纯度为96.2 0 %。平均放射性浓度为 18.3 0MBq/ml。②体外结合分析显示 ,13 1I sc 72 69与人膀胱癌T2 4细胞结合率达 5 9.12 % ,而与人脐静脉血管内皮细胞结合率仅为 7.16% (P <0 .0 0 1)。13 1I sc 72 694℃保存 7d后与T2 4细胞的结合率仍为 5 6.3 1%。结论 本实验制备的13 1I sc 72 69,其放射性化学纯度 >95 % ,有良好的免疫活性和稳定性 ,具备作为放射性显像剂的条件。

弗氏不完全佐剂优于降植烷生产McAb腹水

自Kohler G.Milstein C创立B淋巴细胞杂交瘤技术以来,各实验室均采用降植烷(2、6、10、14甲基十五烷,P,Pristane)作为生产MCAb腹水的诱发剂。近年来发现降植烷有致癌作用,因此,以降植烷为诱发剂生产的McAb腹水,难以用于临床治疗。作者用弗氏完全佐剂(complet Freund＇sadjuvant,CFA)、弗氏不完全佐剂 (Incomplete Freund＇s adjuvant,IFA)以及降植烷作为诱发剂,进行对比研究,实验结果表明,IFA优于降植烷,而且是对动物的毒性很低的诱发剂。

^(211)At标记CEA-McAb的HPLC分离分析研究

利用HPLC进行了放射性核素(^(211)At,^(231)I)标记McAb的分离分析研究,采用1.0mol/l(NH_4)_2-SO_4-0.1mol/l PBS液梯度淋洗。先后经225nm紫外和放射性检测结果证明,^(211)At-CEA-M_(?)Ab偶联物与原始CEA-McAb的紫外峰一致,均在R_t=13.40±0.05min出现.而副产物及其它物质的紫外峰滞留时间与之完全不同。此外,定量地测定了McAb含量和峰面积的关系以及放射性计数。

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的 探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法 用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果 CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论 CD3McAb能增强rhIL

用McAb—AST对黑热病患者疗效考核的进一步研究

用单克隆抗体一抗原斑点试验(McAb—AST)对我国山丘疫区27例(32人次)黑热病患者在斯锑黑克治疗前、后检测循环抗原作了对比观察,以考核疗效。其中25例治前骨髓涂片查见病原体,2例骨髓片漏诊。32人次治疗前MeAb—AST均显阳性反应。一个疗程后McAb—AST转为阴性的16人次,临床表现为痊愈,McAb—AST仍为阳性反应的9例,临床表现也未愈;余7人次McAb—AST与临床症状均有一定程度好转。本法显示的结果与患者病情的归转状况及病原体的查获与否是相吻合的。表明McAb—AST可用于黑热病治后近期疗效考核,且可弥补骨髓涂片的漏诊。

McAb免疫组化法对淋巴结转移性胃癌检出率的价值

组织病理学判断胃癌标本淋巴结有无转移灶,对临床分期、治疗和预后具有重要价值。HE染色法较易识别淋巴结内成片的转移性癌细胞,但要发现微小转移灶较困难。对于那些播散到淋巴窦内的、形态酷似窦组织样细胞的癌细胞,或以淋巴瘤样形式浸润于淋巴网状组织中的癌细胞,仅以HE染色,则更难判断。为此,本研究应用胃癌单克隆抗体(McAb)免疫酶法,检测胃癌淋巴结转移,以探讨免疫组化法在提高胃癌淋巴结转移的检出率。材料与方法一、标本所有标本均系胃癌手术切除组织,福尔马林固定,石蜡包埋。

McAb共刺激PBLs细胞超微结构的变化和作用肝癌细胞时间的选择

目的 根据ＭｃＡｂ共刺激 ＰＢＬｓ在不同抗体和不同时间里淋巴细胞的形态变化，找出免疫治疗的最佳时间。方法 用ＭｃＡｂ抗ＣＤ３，ＣＤ２８＋ＣＤ８０激活健康人的ＰＢＬｓ，对各组不同时间段的淋巴细胞超微结构进行观察，并将淋巴细胞作用于肝癌细胞后ＢＥＬ－７４０２，结果 ＣＤ３及 ＣＤ２８＋ＣＤ８０除刺激淋巴细胞增殖外，也能使淋巴细胞活化，细胞表现为胞体增大，细胞器增多，具有粗大的绒毛和突出伪足，并可见单核细胞吞噬活跃；ＣＤ２８＋ＣＤ８０ ＭｃＡｂ组ＰＢＬｓ ７２ｈ后作用 ＢＥＬ－７４０２肝癌细胞出现典型的凋亡现象。结论 本研究对肿瘤的Ｔ细胞治疗有重要意义，为肿瘤生物治疗用药时机提供依据。

HRP-F1McAb酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原应用效果评价

目的评价辣根过氧化酶标记鼠疫F1单克隆抗体(HRP-F1McAb)酶免疫染色技术检测小鼠脏器鼠疫F1抗原的应用效果。方法通过HRP-F1McAb酶免疫染色法检测鼠疫菌EV株感染小鼠脏器标本和对照小鼠脏器标本,同时用细菌学、RIHA和ELISA做平行检测。结果 HRP-F1McAb酶免疫染色法与细菌学一致率为96.36%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05);HRP-F1McAb酶免疫染色法和RIHA一致率为98.18%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05);HRP-F1McAb酶免疫染色法和ELISA一致率为96.36%,阳性检出率差异无统计学意义(χ^(2=0),P>0.05)。结论酶免疫染色法检测小鼠脏器鼠疫F1抗原特异敏感、简单快速。

应用McAb·BA-ELISA快速检测动物源空肠弯杆菌的研究

应用抗空肠弯杆菌共同抗原的单克隆抗体,建立了快速检测动物源空肠弯杆菌的 BA-ELISA 程序。此程序可检出每 ml 含5个空肠弯杆菌24小时增菌培养物或每ml 含3.2×10~4个空肠弯杆菌纯培养物,不与金黄色葡萄球菌等16种对照菌及混合菌液发生交叉反应。用其对雉鸡等10种动物456份肛拭粪便标本进行检测,总阳性率为45.5%,与常规分离鉴定法的阳性符合率为99.1%.敏感性为99.2%.特异性为100%。统计学分析表明,所建立的 BA-ELISA 检测程序与常规分离鉴定法间具有极显著的一致性(p【0.01),能使检测时间缩短4～5天.

芦荟多糖联合Anti-CD3McAbr、hIL-2干预的PBMC对HepG2生长的影响

目的探讨芦荟多糖(AP)的抗肿瘤作用机制。方法采用AP单独及联合Anti-CD3McAbr、hIL-2诱导干预外周血单个核细胞(PBMC)的方法建立效应细胞;采用MTT法测定效应细胞及其上清液对靶细胞HepG2生长的影响;ELISA法测定干预后各组PBMC分泌IFN-γ、TNF-α的水平,测定效应细胞及其上清液对靶细胞上清液中IFN-γ、TNF-α和AKP水平的影响。结果AP单独及其联合Anti-CD3McAbr、hIL-2可提高PBMC分泌IFN-γ水平,对TNF-α水平没有明显影响;效应细胞的上清液对HepG2的生长无明显抑制作用,而效应细胞细胞悬液对HepG2的生长有抑制作用,可升高混合培养后上清液中TNF-α、IFN-γ水平,降低AKP水平。结论AP体外抗肿瘤作用与提高免疫和促进肿瘤坏死因子释放有关。

McAb快速ELISA诊断旋毛虫病

作者应用抗人IgG McAb酶结合物,吸附面积较大的聚氯乙烯载体和无毒底物3,3′,5,5′四甲基联苯胺来研究简便、恢速的ELISA方法,其诊断旋毛虫病的效果良好。McAb快速ELISA诊断旋毛虫病具有以下的优点:1.采用吸附表面积较大的PVC载体,提高了试验的敏感性,而且PVC薄膜载体价廉,成本较原来的降10倍;2.此法以目视判断为主,可以不要任何仪器设备。PVC载体孔间距离大,可防止PS反应板因光线衍射对目视判断结果的干扰;3.采用抗人IgG McAb酶结合物,不仅酶结合物效价高,而且反应的本底很清晰,便于观察判断结果;4.用无毒底物TMB代替OPD,不需在临用前新鲜配制,省时间又安全;5.本研究采用预固相抗原方法,减少了试验操作程序,同时通过提高反应系统浓度来缩短孵育时间,使本法达到了操作简便、反应快速。