ABC-McAb ELISA和BA-FA技术检测HSV抗原及其在眼科临床诊断中的应用

将生物素—亲和素放大系统(BAS)与McAb ELISA 及FA 技术结合,建立ABC-McAb 和BA-FA 技术,并与组织培养相结合初步应用于眼科临床检测HSV 抗原。实验表明ABC-McAb ELISA 的灵敏度比McAb ELISA 高2.5～4倍,特异性较好,与其它感染眼部的病毒无交叉反应,与病毒分离符合率达96%,特异性95%;BA-FA 技术可直接进行临床标本检测,与病毒分离阳性一致率达91%,该技术与组织培养相结合可明显提高培养24小时阳性检出率。

检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。

ELISA和ABC免疫组化染色法在肿瘤McAbs筛选中的比较研究

本文比较分析了ELISA和ABC两种方法在肿瘤McAbS筛选应用中的一些利弊关系。结果表明,ELISA测出为阳性并与结肠癌细胞系反应的99.5％(198/199)孔杂交瘤细胞所分泌的抗体,经ABC法染色后是不与其癌组织反应的,其中只有0.5％(1/199)孔细胞的抗体才是这两种方法同时均能测得为阳性和是有意义的。而ABC法不仅可检出ELISA阳性的抗体,而且亦能检出ELISA漏筛为性阴、最终是有意义的理想抗体。

McAb-ELISA检测丝虫特异IgG_4的应用研究

目的 探讨McAb -ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术 ,经细胞融合 ,建立起 7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体 (McAb)。以此为探针 ,采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏微丝蚴血症者血清的敏感性为 96 3% (10 4 / 10 8) ,测得IgG4的最低限量为 0 0 1ul/ml;检测丝虫病非流行区健康者、肠道线虫感染者、华支睾吸虫感染者和囊虫病患者等血清均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。经现场应用研究 ,同样获得良好的实用性 ,有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用

本研究建立了McAb快速诊断猪旋毛虫病的ELISA试剂盒,应用旋毛虫单克隆抗体系和层析纯化抗原(PAA)与旋毛虫肌幼虫排泄一分泌抗原(ES)作常规ELISA平行检测61头人工感染旋毛虫病猪血样,阳性率均为100％,检测健康猪血样1082头,阴性率也为100％,检测疫区自然感染猪血样1253头,阳性率分别为1.44％和1.12％,随机抽采175头猪血样和肉样作旋毛虫病消化法,常规法和快速法对比试验,诊断符合率分别为100％、97.6％和95.34％。通过对25万多头活猪检测证明,该诊断盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性,深受广大检疫人员的欢迎。

直接法McAb-Dot-ELISA检测日本血吸虫感染耕牛血清循环抗原的研究

将抗日本血吸虫单克隆抗体标记辣根过氧化物酶,进行直接法单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA),检测日本血吸虫感染耕牛的血清循环抗原。结果,该方法对实验感染耕牛的阳性检出率为100％(32/32);对安徽、江西和湖南3省血吸虫病流行区自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率分别为93.93％(418/445),88.50％(100/113)和81.71％(143/175);对健康耕牛的阴性符合率为98.51％(66/77),对16份感染锥虫和8份实验感染肝片吸虫的耕牛血清均未见交叉反应。提示,该方法具有操作简便、快速等优点,可作为一种新的耕牛血吸虫病免疫诊断方法在疫区基层推广应用。

McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原

目的 应用 Mc Ab- Dot- EL ISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原并观察其与现场粪孵结果的符合情况。方法 用辣根过氧化物酶标记日本血吸虫单抗 SSJ14 ;应用 Mc Ab- Dot- EL ISA检测现场和实验室感染牛日本血吸虫血清循环抗原。结果 检验酶标单抗的特异性和敏感性显示该株单抗有较高的特异性和敏感性 ,用实验室感染血吸虫病的阳性牛血清及阴性血清检测有 10 0 %的符合率 ,检测现场采集血清的循环抗原的结果和粪孵结果对比 ,总符合率达到 82 .91%。结论 SSJ14单抗和由此研制的 Mc Ab- Dot- EL ISA方法能应用于牛日本血吸虫病血清循环抗原的检测。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻—加热浓缩法，将尿样浓缩20倍。应用MCAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了43份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样，两法的阳性检出率分别为81．39％和69．76％；假阳性率分别为14．85％和0％。应用MCAb-RIHA和MCAb－Dot－ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样，前者出现的交叉反应率分别为16．36％和14．28％；后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb捕获抗原检测EDS76病毒抗体的ELISA方法的建立和应用

将三株EDS76病毒单克隆抗体IgG混合,包被ELISA板,捕获病毒抗原后用于检测鸡血清中的EDS76抗体,以OD490nm>0.3,P/N>2.1判为阳性结果。经测定,待检血清做1∶100倍稀释时可以很好地区分阴阳性。所建方法与鸡的其它传染病血清无交叉反应,可被免抗EDS76病毒高免血清竞争性抑制。对11个鸡场330份未接种EDS76疫苗的产蛋鸡血清检测结果表明,血清阳性率最高可达93.33%。

检测莱姆病McAb-ELISA竞争法的建立及初步应用

用自制的莱姆病单克隆抗体VLG2 F9株,建立了检测血清中莱姆病抗体的ELISA非限制性竞争法。用超声波粉碎、高速离心相结合制备可溶性抗原;用羟基磷灰石层析法对单克隆抗体进行纯化均获得了满意结果。实验结果表明,ELISA竞争法特异性高、稳定性和可重复性好,操作简便,可用于不同种动物血清的检测,用该方法检测92份人血清阳性率22.8％,同时测定101份牛血清阳性率为69.9％,该法用于莱姆病的实验诊断尚属首次。该法的建立对莱姆病实验诊断的标准化以及流行病学调查具有重要的实际意义。

McAb-RIHA和McAb-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻-加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样,两法的阳性检出率分别为78.31％和65.06％;假阳性率分别为14.85％和0％。就用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36％和14.28％;后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测尿中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

通过建立的冰冻—加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA 平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和110例慢性血吸虫病尿样。前者两法的阳性检出率分别为78.31%和65.06%。后者两法的阳性检出率分别为20%和10%。检测101份健康人尿样。两法的假阳性率分别为14.85%和0%。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36%和14.28%。后者出现的交叉反应率均为0%。12例尿路感染病人中5例含有蛋白的尿样加热前 McAb-Dot-ELISA 检测均阳性,而经76℃2h 加热后均为阴性。

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究

本试验应用McAb快速ELISA诊断盒,对感染了4个旋毛虫隔离种的猪定期检测其血清中抗体出现情况。结果表明,猪旋毛虫和猪旋毛形线虫(T.spiralis)在感染24天后、犬旋毛虫和本地毛形线虫(T.natica)31天后,可在猪血清中检出抗体;在抗体出现时间上前二者较后二者早7天左右。

华支睾吸虫排泄分泌抗原McAb的制备及双抗夹心ELISA的初步建立

目的以华支睾吸虫排泄分泌抗原(ESA)免疫小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并建立一种可检测ESA的双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法。方法用ESA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株,制备高效价单克隆抗体并鉴定;单抗经HRP标记和配对筛选,建立双抗夹心ELISA并分析其特异性及灵敏度。结果成功制备出抗华支睾吸虫ESA McAb:B7、F1;抗体类型均为IgG1,抗体滴度高,特异性好,以筛选到的两株单抗建立双抗夹心ELISA法,最佳线性范围为0.014~0.248μg/mL(R2=0.996 9),最低检出限为0.014μg/mL。结论初步建立了检测华支睾吸虫ESA的免疫诊断方法。

应用McAb－Dot－ELISA法现场调查血吸虫病的效果观察

对流行程度不同的血吸虫病疫区人群，用ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测循环抗原进行现场查病，同时与粪检虫卵和ＩＨＡ法查抗体相对照。结果，各不同流行区ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法反应的阳性率和ＧＭＲＴ差异均与流行程度相吻合，从而能反映各流行区疫情状况。在重疫区，大多数受检者循环抗原测定结果与粪检及抗体测定结果相一致，符合率分别为７２．０９％和７１．５５％。在有重复感染机遇下，对治疗后一年人群进行复查，结果，循环抗原阴转快于抗体阴转。本实验表明：ＭｃＡｂ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ二法联合应用查病，具有敏感、特异、简便等优点，能较好地评估防治效果。

相思子毒素-a双抗体夹心ELISA法的建立和初步应用

以已制备的抗相思子毒素-a(abrin-a)的单克隆抗体(McAb)4G1和兔源多抗建立了abrin-a双抗体夹心ELISA法。abrin-a质量浓度在15.62~250.00μg/L的范围内,质量浓度的对数值与其D450值呈直线相关,回归方程为y=1.0467x+0.5277(R2=0.9992,n=5),检测灵敏度为7.81ng/mL。该法与相思子凝集素、蓖麻毒素(ri-cin)和蓖麻凝集素无交叉反应。经初步用于人工污染abrin-a香肠样品和自来水样品检测,回收率分别为92.0%和85.0%,变异系数(CV)<6%。表明该检测方法具有快速、特异、灵敏等特点,可望用于食品、饲料和饮用水中abrin-a检验。

猪伪狂犬病病毒单抗双夹心ELISA的构建

建立了检测猪伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV)的单克隆抗体双夹心酶联免疫吸附试验(Enzyme linkedimmunosor bentassay,ELISA)方法,为该病的快速诊断奠定了基础.作者对其组装条件进行了筛选,认为兔抗PRVIgG最佳包被质量浓度为4.59mg·L-1;抗PRV的单克隆抗体(Monoclonalantibodies,McAb)的最佳质量浓度为6.45mg·L-1;最佳封闭剂为10g·L-1BSA(牛血清白蛋白),封闭时间为60min,制定了科学的结果判定标准,最低病毒检出量为200μg·L-1.与病毒分离、动物试验和中和试验相比较,该方法特异、灵敏、可靠、方便.

McAb检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制

本文报道了McAb(4F_2)ELISA检测囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病试剂盒的研制。实验对227例脑囊虫病患者脑脊液进行检测,循环抗原阳性率为84.58％,其中活动型脑囊虫病患者171例,循环抗原阳性率为93.57％。56例非活动型脑囊虫病患者,循环抗原阳性率为57.14％,前者的循环抗原强度也明显高于后者。83例患有其它中枢神经系统疾病的患者,1例阳性,阴性符合率为98.80％。本试验方法简便,结果客观,对脑囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高、特异性强。

泰乐菌素单克隆抗体的制备及竞争ELISA检测方法的建立

目的制备泰乐菌素(Tylosin)单克隆抗体,并建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法。方法用羰基二咪唑将半抗原泰乐菌素分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备泰乐菌素免疫抗原Tylosin-BSA和检测抗原Tylosin-OVA,用紫外光谱扫描检测Tylosin-BSA偶联物,辣根过氧化物酶标记Tylosin-OVA偶联物。采用杂交瘤技术,制备特异性抗泰乐菌素单克隆抗体,建立泰乐菌素竞争ELISA检测方法。结果筛选出2株稳定分泌抗泰乐菌素单抗的杂交瘤细胞株3E4和2G10,2G10分泌的单抗腹水效价为6×10-4,抗体类型为IgG1型,轻链为κ链,在酸、碱及热条件下均较稳定。选择该单抗建立了泰乐菌素竞争ELISA检测方法。该方法灵敏度达50ng/ml,标准曲线线性关系良好(r=0.9827),且特异性、稳定性较好,准确性、精密性较高。结论已成功制备了泰乐菌素单克隆抗体,并建立了竞争ELISA检测方法,可用于动物源性食品中残留泰乐菌素含量的检测。

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗，建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定，ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ，ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００，该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ，与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测，发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％