移植物化学修饰与阻断OX40一OX40L途径预防异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病的研究

目的观察甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酸酯（mPEG-SPA）与抗OX40L单抗预处理移植物对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病（aGVHD）的影响及其机制。方法供、受鼠的脾淋巴细胞体外混合培养，加入抗OX40L单抗孵育培养后，再用mPEG—SPA化学修饰，与C57BIM6供鼠骨髓细胞混合后移植给经致死量全身照射的BALB／c受鼠。同时设相应的对照组。观察移植后受鼠aGVHD的临床表现、病理学改变、存活时间及生存率等，检测移植鼠T淋巴细胞亚群，细胞因子的变化及异基因嵌合体。结果①单纯骨髓移植对照组小鼠均出现aGVHD临床表现，17d内全部死于aGVHD，存活时间为（12．1±5．5）d；而mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠一般状态较好，部分出现aGVHD表现，且较单纯骨髓移植对照组症状轻，皮肤、肝脏、小肠病理表现均较单纯骨髓移植对照组明显减轻，mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组小鼠存活时间分别为（36．2±24．9）、（32．0±24．8）和（44．3±23．2）d，均较单纯骨髓移植对照组明显延长（P〈0．05），其中抗OX40LmPEG—SPA联合预处理组小鼠平均存活时间最长（P〈0．05），mPEG—SPA单独预处理组和抗OX40L单独预处理组生存率分别为50．0％、41．7％，明显高于单纯骨髓移植组，OX40LmPEG—SPA联合预处理组生存率最高，为66．7％。②移植后对照组小鼠血清IFN一吖浓度升高，在＋10～＋15d时达高峰；而mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组降低，＋10d时降至最低，OX40LmPEG—SPA联合预处理组降低最明显（P〈0．01）。移植后对照组IL4、IL一10浓度轻度降低，而mPEG-SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组均明显升高（P〈0．05），＋10～＋15d达高峰，以联合组升高最明显（P〈0．01）。@mPEG—SPA和抗OX40L单抗单独或联合预处理组＋60d时异基因嵌合率为95％～100％，证实为完全供者型植入。结论mPEG—SPA与抗OX40L单抗联合应用能够阻断T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路，协同抑制T细胞的增殖活性，促进Th0细胞向Th2细胞分化，从而明显减轻小鼠骨髓移植中aGVHD的发生。

体外阻断CD134对LN患者外周血单个核细胞T_H1/T_H2细胞因子表达的影响

目的探讨CD134/CD134L共刺激分子对TH1/TH2细胞因子表达的影响及在狼疮性肾炎(LN)发病机制中的可能作用。方法活动期LN患者10例,分别采取外周静脉血,用密度梯度离心法制备新鲜PBMC,分成6组:(1)对照培养组;(2)单纯刺激组;(3)抗CD134组;(4)抗IL-4组;(5)rh-CD134∶Fc组;(6)地塞米松(Dex)组。另选取10例健康体检者作为健康对照组。采用ELISA法分别测定培养液上清中IFN-γ、IL-4、IL-10表达水平。结果(1)在抗CD3ε单抗PrIL-2刺激前,活动期LN患者PBMC培养液上清分泌的IFN-γ、IL-4和IL210水平都明显高于健康对照组;(2)在抗CD3ε单抗PrIL-2刺激下,活动期LN患者PBMC分泌的IFN2γ、IL-4和IL-10又较刺激前明显增加;(3)抗IL-4单抗、抗CD134单抗均可使经抗CD3ε单抗PrIL22刺激的LN患者PBMC分泌IL24、IL210水平显著下降,导致IFN2γ水平显著增高,免疫应答朝TH1方向偏离;(4)Dex能显著抑制抗CD3ε单抗PrIL22刺激的原代培养PBMC中IL24、IFN2γ的分泌水平,但对IL210的产生并没有明显的抑制或促进作用;(5)rhCD134∶Fc能显著降低抗CD3ε单抗PrIL-2刺激的原代培养PBMC中IFN-γ及IL-4、IL-10的分泌水平,对TH1和TH2细胞因子的产生都有显著抑制作用。结论糖皮质激素的抗炎机制具有多重性,对TH1、TH2细胞因子的作用并不均衡;抗CD134单抗对减轻LN患者PBMC的异常活化有一定作用;CD134-IgG融合蛋白与抗CD134单抗相比,抑制作用更明显,对急性期LN有更好的治疗作用。