Mcl-1基因在阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常克隆抗凋亡机制中的作用研究

目的探讨Mcl-1基因异常表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)异常克隆中的抗凋亡作用。方法选取2020年2月至2022年2月在宁德师范学院附属宁德市医院血液科就诊的13例PNH患者为病例组(男7例,女6例,中位年龄27岁),15例健康体检者为对照组(男8例,女7例,中位年龄38岁)。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测PNH异常克隆细胞与正常细胞中Mcl-1基因mRNA的表达水平,然后敲除PNH患者CD59^(-)细胞中Mcl-1基因后检测siRNA-Mcl-1转染前后PNH异常克隆细胞的增殖、凋亡及细胞周期分布等生物学变化。统计学方法采用Fisher确切概率法、独立样本t检验、秩和检验。结果PNH患者CD59^(-)细胞组、CD59^(+)细胞组、对照组的Mcl-1基因mRNA的表达量分别为(2.48±0.25)、(1.61±0.19)、(1.21±0.08),CD59^(-)细胞组高于CD59^(+)细胞组及对照组(P=0.031、0.022),而CD59^(+)细胞组和对照组间比较差异无统计学意义(P=0.126)。同时PNH患者Mcl-1基因mRNA的相对表达量与CD59^(-)克隆细胞数呈正相关(r^(2)=0.523,P=0.012)。PNH患者CD59^(-)细胞转染靶向siRNA-Mcl-1后,Mcl-1 mRNA表达水平明显下降。siRNA-Mcl-1转染组细胞凋亡率高于转染无义序列组(siRNA-scr转染组)和空白对照组[(43.12±16.33)%比(24.07±15.42)%、(21.56±14.85)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。siRNA-Mcl-1转染组G_(0)/G_(1)期细胞比例高于siRNA-scr转染组和空白对照组[(93.16±3.06)%比(91.52±4.01)%、(90.78±3.62)%],而S期细胞比例低于siRNA-scr转染组和空白对照组[(4.96±3.21)%比(6.86±3.87)%、(7.05±3.59)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论siRNA-Mcl-1转染能减弱PNH患者CD59^(-)细胞的增殖,促进凋亡。Mcl-1基因的过表达可能在PNH克隆抗凋亡中起作用。

靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异

目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

JAK/STAT信号转导途径活化和Mcl-1表达上调介导IL-6在人骨髓瘤细胞系XG-7上的凋亡抑制效应(英文)

背景和目的:IL-6能够抑制多种因素诱发的骨髓瘤细胞凋亡反应,在此过程中涉及到胞浆内一系列信号蛋白分子的参与。本研究旨在确定能够介导IL-6在人骨髓瘤细胞系XG-7上凋亡抑制效应的Bcl-2家族抗凋亡蛋白(Bcl-2,Bcl-xL,Mcl-1)和IL-6信号转导途径(JAK/STAT、Ras/MAPK、PI-3K/Akt途径)。方法:采用碘化丙腚(PI)染色和流式细胞术分析XG-7细胞的凋亡情况;采用免疫印迹方法检测Bcl-2家族分子在XG-7细胞中的表达情况;分别采用针对JAK/STAT、Ras/MAPK和PI-3K/Akt途径的特异性抑制剂AG490、PD98059和LY294002处理XG-7细胞,从而确定哪条信号转导途径能够介导IL-6在XG-7细胞上的凋亡抑制效应。结果:IL-6能够抑制XG-7细胞凋亡,同时上调Bcl-2家族抗凋亡蛋白Mcl-1表达。AG490处理的XG-7细胞中Mcl-1表达上调被明显抑制;但PD98059和LY294002处理后对Mcl-1表达没有显著影响。结论:IL-6在XG-7细胞上的凋亡抑制效应是通过上调Mcl-1表达和激活JAK/STAT途径而介导的,与Ras/MAPK和PI-3K/Akt途径的活化状态无关。

姜黄素在急性髓性白血病HL-60细胞中对凋亡调控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影响

为了探讨姜黄素在诱导急性髓性白血病 HL- 6 0细胞凋亡时 ,Bcl- 2基因家族成员是否参与了其调控过程。选用 Bcl- 2基因家族成员 Mcl- 1、Bax、Bak蛋白为研究对象 ,SABC法检测其表达状况 ;用流式细胞术测定 DNA直方图中 Sub- G1 峰值、末端 Td T酶标技术检测 TUNEL 细胞阳性率。发现当 2 5 μmol/ L 姜黄素分别处理 HL- 6 0细胞 2 4h、 36h、 48h后 ,可使 Mcl- 1表达下调 ,Bax和 Bak上调 ,呈时间依赖性。在各处理组 ,Mcl- 1、 Bax、 Bak表达同对照组相比有显著差异 (F值分别为 3.44 3、 8.32 8;P值分别为 0 .0 40、 0 .0 0 1)。结果表明 :Bcl- 2基因家族成员确实参与了姜黄素诱导 HL- 6

靶向沉默Mcl-1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的:通过RNA干扰技术特异性沉默Mcl-1基因,探讨下调Mcl-1基因对感染不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响。方法:分别用制备好的新疆地区流行的优势强毒结核分枝杆菌临床分离株(简称强毒株)、结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(简称H37Rv)、结核分枝杆菌国际标准无毒株H37Ra(简称H37Ra)和卡介苗(BCG)菌悬液感染BALB/c小鼠,再以筛选并构建好的Mcl-1-shRNA作用于感染的小鼠模型,同时设立相应对照组,于作用后1 d、3 d、5 d和7 d提取小鼠腹腔巨噬细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测各组小鼠腹腔巨噬细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白的表达;应用流式细胞术检测各组巨噬细胞的凋亡水平。结果:小鼠被不同毒力的结核杆菌感染后其腹腔巨噬细胞中Mcl-1 mRNA和蛋白的表达水平均有不同程度的升高,其中以感染了强毒株和H37Rv的腹腔巨噬细胞升高最为明显(P<0.05);应用RNA干扰技术沉默Mcl-1基因后,Mcl-1mRNA和蛋白的表达水平明显低于对照组(P<0.05);流式细胞术分析显示,下调Mcl-1基因的表达可诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡。结论:应用Mcl-1-shRNA可有效沉默Mcl-1在感染了不同毒力结核杆菌小鼠腹腔巨噬细胞中的表达,并能上调巨噬细胞的凋亡水平。

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞凋亡的机制。用2-ME预处理MUTZ-1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因—髓细胞白血病基因-1(mcl-1)和bcl-2相关X蛋白(bax)mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性(p<0.05);随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl-1mRNA表达下降(p<0.05),且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关(r=-0.992,p<0.01),而baxmRNA表达没有明显变化(p>0.05)。结论:2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDS细胞凋亡。

Mcl-1短发夹RNA在Raw264.7细胞内特异性的筛选

目的:将Mcl-1shRNA转染到Raw264.7细胞内,针对shRNA对小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1表达的影响,筛选出沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。方法:将特异性shRNA经脂质体介导转染小鼠巨噬细胞系Raw264.7;半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染24、48 h后Mcl-1 mRNA水平变化和Mcl-1蛋白表达情况,分析对应不同位点的三对特异性shRNA片段对Mcl-1的沉默效果。结果:特异性shRNA片段在24、48 h均能有效降低Mcl-1 mRNA和蛋白水平,沉默效率高于正常组、脂质体组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);对应不同位点的三对shRNA真核表达质粒,其中Mcl-1 shRNA3对Mcl-1 mRNA和蛋白的抑制作用均最强。结论:RNA干扰技术可有效下调小鼠Raw264.7巨噬细胞系中Mcl-1 mRNA水平,明显下调Mcl-1蛋白表达。成功筛选出了沉默Mcl-1基因效果最明显的特异性shRNA真核表达质粒。

Mcl-1信号通路阻断剂对H37Rv感染小鼠巨噬细胞凋亡的影响

目的:探讨Mcl-1信号通路阻断剂在结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠模型中对Mcl-1表达、巨噬细胞凋亡情况及结核分枝杆菌的影响。方法:小鼠腹腔注射H37Rv菌悬液,建立感染小鼠模型,针对Mcl-1的信号通路选用JAK/STAT信号通路阻断剂AG490、MAPK信号通路阻断剂PD98059和PI3K信号通路阻断剂LY294002用腹腔注射方式作用于各组感染小鼠模型,分为H37Rv感染组、AG490处理组、PD98059处理组、LY294002处理组和对照组。通过细胞抗酸染色观察结核分枝杆菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬细胞的动物模型是否建立成功;通过免疫细胞化学检测结核分枝杆菌H37Rv感染巨噬细胞的Mcl-1表达情况,使用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率,采用结核分枝杆菌菌落计数来判断巨噬细胞凋亡对结核分枝杆菌的清除效果。结果:细胞抗酸染色结果可见感染的巨噬细胞内散在排列的红色短小抗酸结核分枝杆菌。免疫细胞化学结果显示H37Rv感染组、AG490处理组和LY294002处理组中的Mcl-1蛋白为强阳性表达,PD98059处理组中Mcl-1蛋白为弱阳性表达,对照组Mcl-1蛋白为阴性表达。流式细胞术检测发现H37Rv感染组巨噬细胞凋亡率较对照组高,PD98059处理组的凋亡率显著高于各组,差异显著(P<0.05)。结核分枝杆菌菌落计数结果显示PD98059处理组对H37Rv菌株抑菌作用最明显。结论:Mcl-1信号通路阻断剂通过抑制JAK/STAT、MAPK和PI3K信号通路增加结核分枝杆菌H37Rv感染巨噬细胞的凋亡率,抑制结核分枝杆菌生长;其中,MAPK信号通路干扰Mcl-1的作用最明显,感染的巨噬细胞凋亡率最高,抑菌作用最强。

Mcl-1在二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞G_2/M阻滞中的作用

目的:探讨Mcl-1在二烯丙基二硫(DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞过程中的作用。方法:CCK-8检测DADS抑制HL-60细胞的作用;流式细胞术观察DADS对HL-60细胞的周期阻滞效应;West-ern blotting分析DADS处理HL-60细胞后Mcl-1、PCNA(细胞核增殖抗原)、CDK1(周期依赖激酶1)表达情况;RNAi干扰Mcl-1观察Mcl-1对白血病细胞周期的影响;免疫共沉淀分析Mcl-1与PCNA、CDK1结合作用。结果:CCK-8比色结果显示,15、30、60、120、240μmol/L DADS处理HL-60细胞,细胞增殖抑制率分别为31.15%、55.88%、66.14%、75.29%、80.35%,呈浓度依赖性增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L和120μmol/L DADS作用HL-60细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。Western blotting分析发现60μmol/LDADS处理HL-60细胞后PCNA、Mcl-1、CDK1表达下调(P<0.05)。Mcl-1基因沉默24 h后G2/M期百分率增加到19.4%,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。而Mcl-1基因沉默后加入60μmol/L DADS作用时,G2/M期百分率比60μmol/L DADS处理组增加6.0%(P<0.05)。免疫共沉淀发现,HL-60细胞中存在Mcl-1与PCNA、CDK1的相互结合,DADS处理HL-60细胞后Mcl-1与PCNA、CDK1的结合作用减弱。结论:DADS能诱导HL-60细胞增殖抑制和G2/M阻滞,其抑制增殖作用与PCNA表达下调有关。Mcl-1基因沉默可增强DADS对HL-60细胞G2/M期阻滞作用。

索拉非尼诱导HepG2细胞凋亡过程中Mcl-1与bFGF-2的表达及意义

目的观察索拉非尼体外诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡效应,以及对髓样细胞白血病-1蛋白质(Mcl-1)及人碱性成纤维细胞生长因子-2(bFGF-2)的表达的影响。方法采用不同浓度梯度的索拉非尼作用于人肝癌细胞株HepG2,CCK-8试剂盒测定细胞杀伤效应,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡率,采用Western blot测定Mcl-1表达,ELISA法检测细胞培养液中bFGF-2的水平。结果与对照组相比,索拉非尼能诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡,呈一定的浓度时间效应(P<0.05),Mcl-1及bFGF-2表达均减少。结论索拉非尼可抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导其凋亡,Mcl-1及bFGF-2可能在肝癌细胞的增殖分化中起着重要的作用。

阻断小鼠Mcl-1表达信号通路对BCG感染的影响

目的探讨下调Mcl-1表达信号通路对BCG感染的小鼠模型的影响。方法首先制备好BCG菌悬液感染BALB/c小鼠,再分别用调控Mcl-1表达的不同信号通路阻断剂腹腔注射感染小鼠模型,并同时设立对应的对照组,于处理后的1d、3d、5d、7d处死小鼠并收集腹腔巨噬细胞。应用TUNEL检测不同阻断剂在不同时间点处理后小鼠巨噬细胞凋亡率,细胞免疫化学分析不同阻断剂处理下Mcl-1的表达,HE染色和脏器指数分析不同阻断剂处理对小鼠脏器病变的影响。结果与对照组比,信号通路阻断剂处理后,BCG感染组巨噬细胞凋亡率均有不同程度的增高,其中PD98059处理组巨噬细胞凋亡率最高(F=40.621,P<0.001)。而且阻断剂PD98059处理后,巨噬细胞内BCG的菌落数量明显减少(t=3.392,P<0.001),小鼠肝、肺、脾、肾的病变程度明显减轻(F=59.24,F=811.134,F=34.091,F=9.543,P<0.05),脏器病理损伤也有所改善。结论应用阻断剂PD98059阻断Mcl-1表达信号通路可有效控制结核病的潜伏感染和持续感染。

Mcl-1小分子抑制剂在肿瘤治疗中的应用进展

目的阐述近年来Mcl-1小分子抑制剂的结构及在肿瘤治疗中的应用。方法归纳国内外的最新研究进展报道,按照分子结构类型,对主要的、具有发展潜力的重要分子抑制剂进行综述。结果采用计算机分子模拟、对接、活性预测,进一步通过毒性和活性测定,各种分子具有大小不等的抑制活性,并在肿瘤治疗中取得了较好的效果。结论 Mcl-1有望作为一种开发前景广阔的肿瘤治疗靶点。

MCL-1蛋白在结肠癌中的表达及与耐药相关蛋白GST-π、P-gp的关系

目的探讨髓细胞白血病基因-1(MCL-1)、谷胱甘肽巯基转移酶π(GST-π)、P-糖蛋白(Pgp)在结肠癌发生发展及其在化疗耐药中的意义。方法应用免疫组化的方法检测168例结肠癌及相应癌旁正常组织中MCL-1蛋白的表达水平,分析其表达与结肠癌临床病理参数的关系并探讨其与GST-π、P-gp蛋白的相关性。结果结肠癌中MCL-1、GST-π、P-gp的表达均显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。结肠癌中MCL-1的表达与肿瘤分化程度、临床分期、浸润深度及淋巴结转移相关(P<0.05),与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05);P-gp与肿瘤浸润深度有关,与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移、性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05);GST-π与分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移等各临床参数均无关(P>0.05)。MCL-1与P-gp呈正相关(P<0.01),与GST-π无关(P>0.01);P-gp与GST-π呈正相关(P<0.01)。结论 MCL-1的异常表达可能参与了结肠癌的发生发展,并且可能与肿瘤的多药耐药有关。MCL-1可能为临床肿瘤治疗提供新的药物干预靶点,并且可能成为判断结肠癌预后及指导临床化疗的重要因子。

MCL-1在原代急性髓系白血病细胞中的表达及其临床意义

目的:通过检测MCL-1在核型正常的原代急性髓系白血病(AML)细胞中的表达,探讨其表达水平与临床参数和预后之间的关系。方法:收集37例初诊AML(除APL外)且染色体核型为正常的患者标本,采用CD3单克隆抗体负分选法分离出原代AML细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)和Western b1ot方法检测MCL-1及其蛋白表达水平,分析MCL-1表达水平与初诊时白细胞计数、血小板计数、血红蛋白水平、原始细胞比例、髓外浸润、肿瘤药敏、获得CR所需疗程数等临床参数之间的关系。结果:在原代AML细胞中,MCL-1及其蛋白水平的表达量与白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数、原始细胞比例无相关性;初诊时发生髓外浸润和无髓外浸润的AML患者MCL-1表达无差别;1-2个疗程标准方案后获得CR的AML患者,其MCL-1表达水平低于未获得CR的AML患者(P<0.05);MCL-1蛋白表达高的原代AML细胞对常规化疗药物体外药敏的耐药率高于表达低者(P<0.05)。结论:MCL-1表达量可能与AML患者的多药耐药相关,可能成为AML患者临床预后判断的一个指标。

miR-506通过调控MCL-1抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化的作用机制

目的:探究miR-506通过调控MCL-1对耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation,EMT)及侵袭转移的影响和作用机制。方法:收集2017年12月至2018年12月我院肿瘤科收治的经PET-CT结合组织病理活检及药敏试验确诊为耐阿立替尼的74例非小细胞肺癌患者的癌及癌旁组织以及人非小细胞肺癌A549细胞为研究对象,分别采用细胞转染、免疫组化染色(IHC)、qRT-PCR和Western Blot法检测上述临床组织和细胞样本中miR-506、MCL-1、BAX/Bcl-2凋亡信号途径及EMT标志蛋白表达水平;此外,采用Transwell细胞实验观察miR-506过表达和MCL-1敲减对A549细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:免疫组化(IHC)结果显示肺癌患者癌组织中浸润性坏死性病理损伤较癌旁组织明显加重,且癌组织中MCL-1的阳性表达率为94.64%,明显高于癌旁组织的23.27%(P<0.05)。qRT-PCR和Western Blot结果显示,肺癌组织中miR-506、BAX和E-cadherin的表达明显低于癌旁组织,而MCL-1、Bcl-2和N-cadherin的表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。细胞实验结果表明miR-506过表达和MCL-1敲减能够明显上调BAX和E-cadherin的表达,同时抑制Bcl-2和N-cadherin的表达(P<0.05);此外,miR-506过表达和MCL-1敲减均能显著抑制肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:miR-506可能通过抑制BAX/Bcl-2/MCL-1凋亡途径发挥抑制耐阿立替尼非小细胞肺癌A549细胞EMT及诱导细胞凋亡作用,有望为临床抗肺癌转移及凋亡抑制靶向治疗提供新分子和靶点。

凋亡调控基因Mcl-1在T细胞性淋巴瘤中的表达及临床意义

背景与目的:T细胞性非霍奇金淋巴瘤(T-cell non-Hodgkin's lymphoma,T-NHL)预后不良,有体外研究表明淋巴瘤细胞株的髓细胞白血病1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)基因过表达能够拮抗放射和药物诱导的细胞凋亡。本研究探讨Mcl-1在各类型T-NHL中的表达及其与治疗反应和预后的关系。方法:收集临床资料完整的各类型T-NHL病例72例,回顾性分析其临床特点、治疗经过和随访结果,免疫组化染色方法检测Mcl-1表达,并进行相关性分析。结果:Mcl-1在T淋巴母细胞性NHL(precursor T lymphoblastic lymphoma,T-LBL)、间变T细胞性NHL(anaplastic large T-cell lymphoma,ALCL)和其他外周T细胞性NHL(peripheral T-cell lymphoma,PTL)中的弱阳性率分别为44.4%、0%和18.9%,阳性率分别为0%、100%和49.1%(P=0.000)。Mcl-1在T-LBL中呈胞浆均匀一致的浅染色,在ALCL中呈核周块状棕黄色强染色。Mcl-1阳性与弱阳性/阴性PTL患者的中位总生存期(overall survival,OS)分别>32个月和15个月(P=0.007),对化疗有效率分别为75%和53%(P=0.18),多因素分析结果显示国际预后指数(international prognostic index,IPI)和Mcl-1阳性为PTL的独立预后因素;Mcl-1阴性与弱阳性T-LBL患者的中位OS分别为21个月和7个月(P=0.58)。结论:不同病理亚型的T-NHL的Mcl-1表达差异具有显著性。Mcl-1在ALCL呈特征性高表达。PTL中Mcl-1阳性患者预后优于阴性/弱阳性患者。

miR-363下调HepG2细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其凋亡

目的:探讨微小RNA-363(microRNA-363,miR-363)的作用靶点及其对Hep G2细胞的抑制作用。方法:通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。实时荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Hep G2、Huh7、PLC的miR-363和Mcl-1的表达水平。将miR-363转染人Hep G2细胞,检测miR-363对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测Hep G2细胞在转染miR-363后的相对细胞活力,Annexin V/PI染色法检测miR-363转染对Hep G2细胞凋亡的影响。结果:Mcl-1 mRNA 3’-非翻译区(3’-UTR)存在miR-363的假定结合位点,在肝癌细胞中转染miR-363后Mcl-1的表达下降。转染miR-363可抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论:miR-363过表达可显著抑制Hep G2细胞的活力并诱导其发生凋亡,其机制可能与miR-363能下调Hep G2细胞Mcl-1蛋白的表达有关。

Mcl-1基因与肝细胞癌

Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调节中起着重要的作用,髓样细胞白血病-1(Mcl-1)是Bcl-2家族中一个重要的抗凋亡成员,并作为促耐药因子在不同肿瘤组织中表达。进展期肝细胞癌对各种化疗药物有着高度的耐药性,Mcl-1下调使HCC癌细胞对不同化疗药物敏感,并增加癌细胞的凋亡率。因而,Mcl-1靶向治疗有望成为肝细胞癌治疗的新途径。

肝癌组织中Mcl-1和Bax的表达与临床病理及预后的关系

目的研究Mcl-1、Bax在肝细胞癌及癌旁肝组织中表达的关系及临床意义,探讨Mcl-1表达与肝癌组织学分级及预后的关系。方法对48例人肝细胞癌及相应的癌旁肝组织标本,进行免疫组织化学EnVisionTM法检测。结合Mcl-1、Bax的表达情况与肝癌的临床病理、随访资料进行分析。结果肝癌组织中Mcl-1、Bax阳性率分别为60.4%(29/48)、31.3%(15/48),癌旁肝组织Mcl-1、Bax分别为14.5%(7/48)、52.1%(25/48),两者差异具有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织中Mcl-1的表达与Edmonson grade分级、肿瘤直径、静脉浸润、肝内外转移有关(P<0.05)。在肝癌中Mcl-1与Bax的表达呈显著负相关(r=-0.373,P=0.009)。肝癌组织中III、IV级组Mcl-1/Bax≥1的比例显著高于I、II级组(P<0.05)。Mcl-1阳性病例的3年生存率显著高于Mcl-1阴性病例(P=0.032)。结论 Mcl-1在肝癌组织中呈高表达,与肝癌的分级、预后关系密切,Mcl-1、Bax在HCC的发生发展过程中起一定作用。

特异性siRNA质粒的构建及其抑制癌细胞中mcl-1表达的研究

本文构建了靶向mcl-l基因构建的特异性siRNA重组质粒,在细胞水平检测的其抑制效果,并筛选出能高效抑制mcl-l基因表达的siRNA重组质粒,针对mcl-1的特异性siRNA重组质粒,将其转染到人肝癌细胞HepG2,用Rt-PCR(实时荧光定量PCR)方法和WesternBlot方法分别检测转染前后mcl-1mRNA水平和Mcl-1蛋白表达水平,比较对应不同位点的两个siRNA重组质粒对mcl-1的抑制效果。结果表明,Rt-PCR结果显示对应不同位点的两个siRNA重组质粒对mcl-1均可降低mcl-1mRNA水平,最大抑制效率达70.0%,远高于作为对照非相关组;Western-Blot结果显示转染特异性siRNA重组质粒后Mcl-1蛋白表达受到抑制,最大抑制率为44.2%。合理设计的特异性siRNA重组质粒可大幅度下调mcl-1mRNA水平,能有效抑制Mcl-1蛋白表达。