Mdivi-1通过修复黑质网状部线粒体改善肝性脑病小鼠运动功能

目的:探讨急性肝性脑病(AHE)模型小鼠中黑质网状部(SNr)的线粒体变化,以及线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对AHE小鼠运动功能和SNr线粒体功能的影响。方法:使用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射构建小鼠的AHE模型并通过腹腔注射给予Mdivi-1处理,利用生化检测试剂盒检测小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和血氨的变化,并进行旷场实验、转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验观察AHE小鼠的运动功能;电镜下观察SNr的线粒体结构变化,商品化试剂盒检测SNr的线粒体膜电位(MMP)以及细胞的活性氧(ROS)和ATP水平。结果:与对照组相比,AHE小鼠血清中的AST、ALT和血氨含量均增加;小鼠在旷场中的总运动距离减少,转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验中的运动时间均缩短;SNr的线粒体变小变圆、线粒体分裂增加,MMP降低,细胞ROS增加,ATP产生减少。使用Mdivi-1干预后,AHE小鼠血清中的AST、ALT和血氨含量均降低;小鼠在旷场中的总运动距离增加,转棒疲劳实验以及高架十字迷宫实验的运动时间均增多,SNr的线粒体变大、圆率降低,线粒体分裂减少,MMP增加,细胞ROS降低,ATP产生增多。结论:Mdivi-1可以通过修复AHE小鼠SNr的线粒体从而改善运动功能。

Mdivi-1对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的作用及机制研究

目的 观察动力相关蛋白Drp1抑制剂Mdivi-1对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎的作用,并探讨其作用机制。方法 雌性8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、咪喹莫特(IMQ)模型组、IMQ+Mdivi-1实验组。使用咪喹莫特构建小鼠银屑病样模型,实验组予以Mdivi-1腹腔注射,对照组及模型组予以等剂量溶剂腹腔注射。于造模第7天处死小鼠并取材。用PASI评分评判小鼠皮损严重程度,冰冻切片荧光染色检测小鼠皮肤组织中ROS含量,HE染色观察皮损组织形态学变化,免疫组织化学染色检测小鼠皮肤内Drp1蛋白的表达,Western blot检测小鼠皮肤组织中Drp1、NLRP3、IL-1β蛋白水平,ELISA技术检测小鼠血清中IL-17A、IL-18的表达。结果 模型组小鼠背部皮肤出现红斑、鳞屑、增厚等典型银屑病样皮损,实验组皮损明显减轻。实验组的PASI评分明显低于模型组。HE染色提示,实验组小鼠背部皮肤表皮厚度明显低于模型组,且Munro微脓肿明显减少。ROS荧光染色提示实验组ROS含量明显低于模型组。免疫组化结果显示,Drp1蛋白在实验组中表达明显低于模型组。Western blot结果显示,Drp1、NLRP3、IL-1β在实验组中的表达量明显低于模型组。ELISA结果提示,实验组小鼠血清中IL-17A、IL-18的含量低于模型组。结论 Mdivi-1可通过抑制动力相关蛋白Drp1的表达,减轻咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮炎。

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用

目的拟探讨线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对脓毒症大鼠肠道屏障功能的保护作用。方法采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠脓毒症模型,根据脓毒症救治指南采用乳酸林格氏液(35 mL/kg)进行常规复苏,输液速度3 mL/h。同时在常规复苏的基础上静脉予以1 mg/kg Mdivi-1进行治疗。复苏结束后2 h观察各组大鼠肠道屏障功能、肠道中闭锁小带蛋白(zonula occludes-1,ZO-1)的表达、小肠病理变化、血清炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素1-β(Interleukin-1β,IL-1β)的浓度、平均动脉血压(mean arterial blood pressure,MAP)和生存时间及72 h存活率。结果与假手术组相比,脓毒症大鼠肠通透性明显增加,D-乳酸明显升高,血清中炎性因子TNF-α和IL-1β浓度显著增高(P<0.05);病理结果显示肠绒毛断裂,腺体萎缩,炎性细胞显著增多。常规复苏治疗后,与脓毒症组相比,血清中TNF-α和IL-1β浓度、肠通透性、D-乳酸浓度轻微降低,肠绒毛紊乱轻微改善,提示常规复苏治疗后对脓毒症的保护作用是有限的。与常规治疗组相比,常规治疗联合线粒体分裂抑制剂Mdivi-1治疗后大鼠血清中TNF-α和IL-1β浓度、肠通透性、D-乳酸浓度显著降低(P<0.05),病理结果显示肠绒毛结构清晰,炎性细胞浸润明显改善。肠组织免疫荧光结果显示,与假手术组相比,脓毒症后紧密连接发生断裂,Mdivi-1治疗后较脓毒症组紧密连接断裂发生明显好转。细胞水平上,LPS刺激后肠上皮细胞间ZO-1表达量显著降低(P<0.05),Mdivi-1治疗后可逆转LPS导致的ZO-1表达量的降低(P<0.05)。结论Mdivi-1对脓毒症大鼠的肠道屏障功能具有保护作用,其机制可能是通过调节ZO-1的表达。

线粒体自噬抑制剂Mdivi-1调控线粒体未折叠蛋白反应改善癫痫海马神经元损伤

目的探讨线粒体未折叠蛋白反应在无镁外液致痫海马神经元中的变化及线粒体自噬抑制剂Mdivi-1对其影响。方法原代培养海马神经元用无镁外液诱导体外癫痫模型,并进一步采用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1干预;采用线粒体荧光探针MitoSOX检测线粒体ROS生成、Rhodamine 123检测线粒体膜电位、采用Western blotting方法观察C/-EBP同源蛋白CHOP、线粒体内热休克蛋白HSP60、线粒体蛋白酶ClpP表达、CytC释放和caspase-3激活。结果(1)与对照组相比,致痫组海马神经元CHOP、HSP60和ClpP表达明显增加;与致痫组相比,线粒体自噬抑制剂Mdivi-1可明显增加海马神经元CHOP、HSP60和ClpP表达;(2)与对照组相比,致痫组海马神经元线粒体ROS生成增多,并且线粒体膜电位降低;与致痫组相比,线粒体自噬抑制剂Mdivi-1可明显减少线粒体ROS生成,增加线粒体膜电位;(3)与对照组相比,致痫组海马神经元CytC释放及caspase-3激活增加;与致痫组相比,线粒体自噬抑制剂Mdivi-1可明显减少CytC释放及caspase-3激活。结论癫痫海马神经元线粒体未折叠蛋白反应激活,而抑制线粒体自噬可通过增强线粒体未折叠蛋白反应而发挥癫痫保护作用。

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对高原战创伤休克大鼠的保护作用

目的观察线粒体分裂抑制剂(mitochondrial division inhibitor-1,Mdivi-1)对高原战创伤休克的早期救治作用。方法SD大鼠从平原(重庆)急进(空运)至高原(拉萨,海拔3600 m)72 h后,通过脾动脉离断自由出血至平均动脉血压(mean arterial pressure,MAP)降至40 mmHg,建立高原战创伤休克模型。实验分为假手术组、休克组、乳酸林格氏液(Lactate Ringer’s,LR)对照组、0.1和0.5 mg/kg Mdivi-1组。实验分两部分,第一部分大鼠不接受止血处理,仅采用LR或联合0.1、0.5 mg/kg Mdivi-1进行复苏,将MAP维持在50~60 mmHg,观察大鼠血压、失血量、输液量以及存活的变化;第二部分低压复苏1 h后,经彻底止血后进行确定性复苏,观察大鼠失血量、输液量、器官功能、组织氧分压、肺脑含水量以及动物存活情况的变化。结果在不进行止血处理时,采用LR进行低压复苏,大鼠MAP可维持在50~60 mmHg约1 h。而后增加液体输入量,MAP不升高反而进行性降低,且失血量明显增加。Mdivi-1联合低压复苏能将MAP较好地维持在50~60 mmHg约3 h;与LR对照组相比,大鼠失血量、输液量显著减少。低压复苏1 h、行止血及确定性治疗后,单纯LR复苏大鼠的组织氧分压仍在较低水平,同时肺脑含水量增加,重要器官如心、肝和肾脏功能受损严重;而给予0.1或0.5 mg/kg Mdivi-1后大鼠的组织氧分压明显提高,肺脑含水量降低,心、肝和肾脏功能受损明显减轻,与LR对照组相比,大鼠存活明显延长。结论Mdivi-1适用于高原战创伤休克的早期救治,可改善器官功能,延长黄金救治时间窗。

mdivi-1对急性心肌缺血小鼠心脏的保护作用

目的观察线粒体分裂抑制剂mdivi-1对缺血小鼠心肌的保护作用。方法采用结扎心脏左前降支制作小鼠急性心肌缺血模型,将140只C57小鼠按随机数表分成4组,每组35只:假手术组(只穿线不结扎),假手术+mdivi-1组(穿线不结扎同时尾静脉注射mdivi-1),缺血组(结扎心脏左前降支制作急性心肌缺血模型),mdivi-1组(结扎心脏左前降支并尾静脉注射mdivi-1)。通过测定SOD、MDA、ATP、ROS、心肌损伤标志物并对心肌及细胞线粒体进行形态学观察,研究mdivi-1对心肌缺血小鼠心脏的保护作用。结果缺血后小鼠心肌结构显著受损且线粒体碎片化程度增高,排列紊乱,线粒体功能显著受损,表现为线粒体分裂抑制剂mdivi-1能显著减轻心肌线粒体结构及功能损伤,缺血心肌细胞周围损伤带缩窄、心肌ATP(1.587±0.227)μmol/mg和SOD(0.401±0.138)U/mg含量显著上升(P<0.05),ROS(4 276.0±687.5)荧光强度/mg和MDA(3.538±1.110)μmol/mg含量显著下降(P<0.05),降低心肌氧化损伤、心肌损伤标志物水平,保护心肌功能,显著延长模型小鼠存活时间,提高存活率。结论线粒体分裂抑制剂mdivi-1对心肌缺血小鼠心脏有保护作用。

Mdivi-1对顺铂诱导的L1210细胞活性氧产生及凋亡的影响

采用流式Annexin V-FITC/PI双染法检测对照组、DDP(顺铂)处理组、Mdivi-1+DDP处理组三组L1210细胞凋亡情况,用荧光探针DCFH-DA检测各组细胞内ROS水平,探讨Mdivi-1对顺铂诱导L1210细胞活性氧产生及细胞凋亡的影响。结果表明与对照组相比,DDP处理组L1210细胞凋亡数量明显增加,且细胞内ROS水平明显升高;Mdivi-1+DDP处理组细胞凋亡数量及ROS产生较DDP处理组均明显减少。Mdivi-1可抑制顺铂诱导的L1210细胞ROS产生及细胞凋亡。

Mdivi-1对帕金森病大鼠多巴胺能神经元损伤的保护作用研究

目的 研究线粒体分裂引发帕金森病(Parkinson ’ s disease,PD)大鼠模型中多巴胺能神经元损伤作用及线粒体分裂抑制剂1(mitochondrial division inhibitor 1,Mdivi-1)对神经元损伤的保护作用机制。方法 将大鼠随机分成对照组(生理盐水组)、模型组、美多巴组和Mdivi-1组,采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)注射大鼠单侧纹状体的方法建立PD动物模型,利用阿朴吗啡(apomorphine,APO)引起的大鼠旋转实验和转棒实验来观察行为学变化。利用免疫组化方法评估酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylasez,TH)在中脑黑质中阳性细胞比例以及纹状体中TH阳性纤维数量,采用ELISA法检测大鼠黑质和纹状体中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的含量。结果 与对照组相比,PD模型组大鼠在APO诱发第3周和6周后旋转圈数均显著增加,同时转棒上停留时间均显著缩短;大脑黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目显著减少;组织内SOD、GSH-Px、CAT的活性显著降低,而NOS 活性显著升高,MDA和NO含量升高,而GSH含量则降低。美多巴及Mdivi-1处理3周和6周后均可显著改善PD大鼠的相关行为学症状,并增加黑质TH阳性细胞数和纹状体中TH阳性纤维数目,同时增加组织内SOD,GSH-Px,CAT,GSH含量,降低NOS 活性,减少MDA和NO含量。结论 Mdivi-1对6-OHDA诱导PD大鼠的多巴胺能神经元损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化能力有关。

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1改善血管紧张素Ⅱ介导的内皮功能紊乱（英文）

动力相关蛋白(dynamin-related protein 1,Drp1)与线粒体的动态变化有着密切的联系,是介导线粒体分裂的主要功能蛋白。本研究旨在探讨血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)对血管内皮细胞线粒体融合和分裂的影响以及Drp1功能抑制剂Mdivi-1对Ang II介导的内皮损伤是否有减轻作用。Ang II或联合Drp1抑制剂Mdivi-1处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)后,用Western blot检测Drp1、e NOS和凋亡相关酶的蛋白表达,用Mito Tracker Red染色观察细胞内线粒体形态,用JC-1探针染色检测线粒体膜电位变化,用DCFH-DA染色检测细胞活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成,用Transwell实验检测细胞迁移情况,用Annexin V/PI染色检测细胞凋亡情况。结果显示,Ang II处理12 h后,HUVECs的Drp1的表达水平显著升高,内皮细胞迁移、凋亡及ROS的生成显著增加,e NOS表达量显著降低;同时,Ang II处理还诱导了线粒体形态的改变,使网状的线粒体变成了短管状,并伴随着线粒体膜电位的下降。Mdivi-1可以显著逆转Ang II对内皮功能的上述损伤作用,提高内皮细胞线粒体膜电位及e NOS的表达量,降低细胞内ROS水平,抑制内皮细胞凋亡及迁移能力。以上结果提示,Drp1抑制剂Mdivi-1可以减轻Ang II介导的内皮损伤。

线粒体分裂抑制剂Mdivi-1对大鼠心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨Mdivi-1对缺血再灌注损伤后大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)的保护作用。方法:分离培养大鼠CMECs,建立缺血再灌注(SI/R)模型,随机分为对照组、SI/R组、和SI/R+Mdivi-1组。采用MTT法检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测CMECs凋亡率;western blot法检测各组细胞Drp1,Fis1水平;活性氧检测试剂盒测细胞ROS水平。结果:与对照组比较,SI/R组和SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显降低,凋亡明显增加,Drp1,Fis1表达增高,ROS水平明显升高,结果具有统计学意义(P<0.05);与SI/R组比较,SI/R+Mdivi-1组细胞增殖和迁移能力明显增加,凋亡明显降低,ROS水平明显降低,结果具有统计学意义(P<0.05),而Drp1,Fis1表达则无明显改变。结论:Mdivi-1可减轻CMECs的缺血再灌注损伤,这种保护作用可能是通过抗氧化应激来实现的。

Mdivi-1减轻异丙酚诱导的发育期神经元凋亡

目的:探讨mdivi-1对异丙酚诱导胎鼠海马神经元凋亡的影响。方法:原代培养孕16～18 d SD大鼠胎鼠海马神经元5 d,采用随机数字表法,将神经元随机分为5组(n=6):对照组(C组)、异丙酚组(P组)和不同浓度mdivi-1组(M1～M3组,浓度分别为1,2. 5,5μmol·L-1,P组加入异丙酚(终浓度为30μmol·L-1)孵育3 h,M1～3组给予异丙酚前4 h加入mdivi-1,使各组mdivi-1浓度分别为1、2. 5和5μmol·L-1,C组加入等量生理盐水。检测发育期神经元活性和caspase3活性; Western blot法测定线粒体p-drp1 (ser616)、Bax表达;采用实时定量PCR检测BDNF及Bcl-2 mRNA的表达。结果:与C组相比,P组神经元活性降低(P <0. 05),Caspase3活性增加(P <0. 05);与P组比较,M1～M3组神经元活性增高(P <0. 05)、Caspase3活性降低(P <0. 05);与M1组比较,M2-3组神经活性增高(P <0. 05)、Caspase3活性降低(P <0. 05); M2与M3比较,神经元活性及Caspase3活性差异无显著性(P> 0. 05),因此后续实验选择M2浓度处理,称为M组。与C组比较,P组线粒体p-drp1(ser616)及Bax表达升高(P <0. 05)、BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调(P<0. 05);与P组比较,M组线粒体p-drp1 (ser616)及Bax表达降低(P <0. 05),BDNF和Bcl-2 mRNA表达下调(P <0. 05)。结论:Mdivi-1通过减少p-drp1 (ser616)和Bax向神经元移位,抑制线粒体过度分裂及降低线粒体通透性并且上调BDNF和Bcl-2,从而减轻异丙酚诱导发育期海马神经元凋亡。

Mdivi-1对Aβ致伤大鼠海马区神经元线粒体凋亡率及drp-1表达的影响

目的:观察线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)对Aβ致伤离体培养的大鼠海马神经元线粒体的凋亡率及线粒体动力相关蛋白1(drp-1)表达的影响。方法:选择出生年龄小于24 h的大鼠,取其海马神经元进行原代培养。将培养的海马神经元细胞分成4组,正常组不给予任何处理,Aβ组在细胞培养基中加入Aβ毒素,Mdivi-1组为在细胞培养基中加入Mdivi-1,Aβ+Mdivi-1组为在细胞培养基中加入Aβ和Mdivi-1。采用MTT比色法检测细胞凋亡率,Western blot技术检测drp-1的表达。结果:MTT检测结果显示与正常组比较Aβ组的海马神经元凋亡率明显上升,差异有统计学意义(P<0.05),与Aβ组比较,Aβ+Mdivi-1组的海马神经元凋亡率下降,差异有统计学意义(P<0.05);WB检测结果显示与正常组比较,Aβ组的drp-1表达上调,差异有统计学意义(P<0.05),Aβ+Mdivi-1组较Aβ组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mdivi-1能抑制Aβ毒素作用,从而减少神经元细胞线粒体的调亡,drp-1表达的减少也能稳固线粒体的分裂。因此,对Aβ和drp-1的定向干预治疗可能会成为治疗AD的关键靶点。

线粒体动力相关蛋白Drp1在大鼠术后认知功能障碍中的作用

目的探讨线粒体动力相关蛋白1(Drp1)在大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法采用随机数表法将64只健康清洁级成年雄性SD大鼠分为生理盐水对照组(C组)、Drp1选择性抑制剂Mdivi-1腹腔注射组(M组)、手术组(O组)和Mdivi-1腹腔注射+手术组(MO组)。M组和MO组腹腔注射Mdivi-1(50 mg/kg)0.5 mL,C组和O组腹腔注射0.5 mL生理盐水。分别于术前、术后第1日和术后第3日进行水迷宫测试,观察大鼠的游泳距离和逃避潜伏期。术后24 h处死大鼠,取海马组织,检测其中三磷酸腺苷(ATP)含量,用透射电镜观察线粒体分裂情况,用蛋白免疫印迹法检查线粒体电子传递链复合物Ⅰ和Ⅴ的表达。结果与C组比较,O组线粒体过度分裂,线粒体电子传递链复合物Ⅰ和Ⅴ水平下降,ATP含量减少,O组术后第1日和第3日逃避潜伏期及游泳距离延长(P均<0.05)。与O组比较,MO组线粒体分裂减少,线粒体电子传递链复合物Ⅰ和Ⅴ水平升高,ATP含量增多;O组术后第1日和第3日逃避潜伏期及游泳距离缩短(P均<0.05)。结论线粒体Drp1介导的线粒体过度分裂参与了术后认知功能障碍的发生过程。

杨梅素通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:观察杨梅素与mdivi-1分别或联合作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞凋亡和线粒体分裂情况,探讨杨梅素诱导SKOV3细胞凋亡的机制。方法:体外培养SKOV3细胞,随机分为对照组、mdivi-1组、杨梅素组和联合给药组,mdivi-1组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换普通细胞培养液继续培养23h,杨梅素组以50g·L^(-1)杨梅素作用24h,联合给药组以50μmol·L^(-1) mdivi-1作用1h后更换含50g·L^(-1)杨梅素的细胞培养液继续培养23h。MTT法检测各组细胞存活率;Muse~凋亡检测试剂盒检测各组细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blotting)观察细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase3)、动力相关蛋白1(DRP1)和分裂蛋白1(FIS1)表达水平;MitoTracker~ Red荧光探针特异性标记线粒体观察各组细胞线粒体分裂情况。结果:与对照组比较,杨梅素组细胞存活率明显降低(P<0.05);与杨梅素组比较,联合给药组细胞存活率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞凋亡率升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞中Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组Cyt C和caspase3蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组比较,杨梅素组细胞线粒体分裂程度增强;与杨梅素组比较,联合用药组线粒体分裂程度下降。与对照组比较,杨梅素组细胞中DRP1和FIS1蛋白表达水平升高(P<0.05);与杨梅素组比较,联合用药组DRP1和FIS1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:杨梅素可通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡。

线粒体分裂抑制剂-1在香烟诱导小鼠气道炎症与氧化应激中的作用机制

目的 探索线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)在香烟诱导小鼠气道炎症与氧化应激中的作用及相关的作用机制。方法 香烟暴露构建小鼠气道炎症与氧化应激动物模型,腹腔注射Mdivi-1进行干预,收集肺泡灌洗液进行细胞分类计数,ELISA检测肺泡灌洗液炎症因子TNF-α、IL-6及MMP-9水平,生化试剂盒测定肺组织匀浆氧化应激指标MDA含量及SOD的活性,HE染色评估肺组织病理改变。在PubChem数据库中检索Mdivi-1作用靶点基因,对基因进行GO和KEGG分析,Western blot检测小鼠肺组织Drp1和Mfn2的表达变化及相关富集的通路。结果 熏烟诱导小鼠气道中的炎症细胞浸润增加、气道上皮细胞过度增生、气道上皮增厚,增加肺泡灌洗液中总细胞、中性粒细胞、巨噬细胞数量及炎症因子TNF-α、IL-6及MMP-9水平,增强氧化应激反应,而Mdivi-1预处理可以减轻上述改变。生物信息分析显示Mdivi-1潜在作用基因100个,GO分析显示富集到线粒体结构调节、凋亡过程、线粒体自噬等生物过程,KEGG分析显示富集到的主要通路为Tnf、Mtor、Ampk、Adipocytokine及Nod-Like受体信号通路。Western blot显示Mdivi-1干预抑制香烟诱导小鼠肺组织NF-κB信号通路激活,下调香烟诱导的Drp1表达并上调Mfn2表达。结论 Mdivi-1缓解香烟诱导的小鼠气道炎症和氧化应激,其机制可能通过改善线粒体功能和抑制NF-κB信号通路活化实现,Mdivi-1有可能是治疗香烟诱导的气道炎症性疾病的新药物。

选择性线粒体分裂抑制剂对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞的保护作用及其机制

目的：检测选择性线粒体分裂抑制剂-1（Mdivi-1）对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞线粒体中丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、细胞色素C（Cyt-C）及神经细胞凋亡的影响。方法成年雌性SD大鼠36只，体质量250~300 g，随机分为假手术组（Sham组）、单纯脊髓损伤组（SCI组）、Mdivi-1预处理组（1.20 mg/kg，Mdivi-1组），各12只。Sham组只暴露脊髓，不打击。SCI组和Mdivi-1组采用Allen’s方法制备脊髓损伤模型。Mdivi-1组在脊髓打击之前15 min尾静脉给予Mdivi-1，而SCI组给予等量二甲基亚砜（DMSO）。Sham组在暴露脊髓8 h后立即处死，SCI组和Mdivi-1组均于脊髓损伤后8 h处死；然后取出脊髓节段T9~T11，用分光光度计检测各组脊髓组织线粒体中MDA和GSH的含量，Western Blot法检测线粒体及胞浆内Cyt-C表达情况，荧光TUNEL法观察神经细胞凋亡情况。结果与Sham组相比，SCI组线粒体中Cyt-C和GSH明显减少，但线粒体中的MDA，胞浆中Cyt-C及神经细胞凋亡数目明显增多（P＆lt;0.01）；与SCI组相比，Mdivi-1组线粒体中Cyt-C和GSH明显增多，但线粒体中MDA，胞浆中Cyt-C以及神经细胞凋亡数目明显减少（P＆lt;0.01）。结论 Mdivi-1具有减轻ASCI后神经细胞线粒体氧化损伤，抑制线粒体中Cyt-C的释放及神经细胞凋亡的作用，促进了脊髓功能恢复。

选择性线粒体分裂抑制剂抑制大鼠急性脊髓损伤后的细胞凋亡

目的检测mdivi-1预处理对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后线粒体膜电位,凋亡诱导因子(AIF)释放及细胞凋亡的影响。方法大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、二甲基亚砜预处理组(DMSO组),mdivi-1预处理组(mdivi-1组)。采用Allen's方法制备ASCI模型。JC-1标记法检测线粒体膜电位(MMP),Western blot方法检测线粒体及细胞核内AIF,TUNEL法检测细胞凋亡。结果与Sham组相比,SCI组线粒体中AIF先降低后升高,最低点是8h(P<0.01),而细胞核中AIF却呈相反趋势(P<0.01),术后8 h MMP明显降低(P<0.01),凋亡细胞数目明显增多(P<0.01)。与SCI 8 h组相比,mdivi-1组MMP明显升高(P<0.01),线粒体中AIF明显增多(P<0.01),细胞核中AIF明显降低(P<0.01),凋亡细胞数目明显减少(P<0.01)。结论 Mdivi-1具有保护大鼠ASCI后MMP,抑制线粒体中AIF的释放和细胞凋亡的作用。

线粒体分裂在甲状腺鳞癌SW579细胞增殖、凋亡以及侵袭中的作用

目的研究线粒体动力学蛋白Mfn2和Drp1在甲状腺鳞癌SW579细胞中的表达和线粒体分裂抑制剂-1(Mdivi-1)对SW579细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法采用RT-PCR检测Mfn2和Drp1 m RNA,Westernblot检测Mfn2和Drp1蛋白在Nthy-ori 3-1和SW579两种细胞中的表达;然后将SW579分为对照组(DMSO,0.1%)和Mdivi-1低、中、高剂量组(浓度分别为15、30、45μmol/L),培养16 h,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,用荧光分光光度计检测线粒体膜电位的变化,用RT-PCR检测细胞色素C(Cyt C)和Caspase-3 m RNA的变化,Westernblot检测Cyt C和Caspase-3蛋白的变化,用Transwell小室侵袭实验检测侵袭能力的变化。结果与Nthy-ori 3-1细胞系相比,SW579细胞系中Mfn2 m RNA和蛋白表达明显降低,Drp1 m RNA和蛋白表达明显升高(P<0.01);与对照组相比,Mdivi-1各组SW579细胞存活率和线粒体膜电位均明显降低,Cyt C和Caspase-3的m RNA及蛋白表达均明显增加,侵袭能力明显减弱(均P<0.01),并且呈药物浓度依赖性。结论甲状腺鳞癌SW579细胞中存在线粒体动力学异常,Mdivi-1可以抑制此细胞的增殖和侵袭,并能诱导其凋亡。

线粒体分裂蛋白抑制剂对匹鲁卡品致痫大鼠海马神经元的保护作用

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂(Mdivi-1)对匹鲁卡品(PILO)致痫大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法:121只雄性SD大鼠随机分成对照(CON)组、PILO组、PILO+DMSO组和PILO+Mdivi-1组,PILO组又分为癫痫持续状态(SE)2 h、8 h、24 h和72 h 4个亚组。观察各组大鼠行为学改变,并分别采用Nissl染色法检测神经元损伤,比色法检测SOD活力及MDA含量,Western blot和RT-PCR法检测Drp1、细胞色素C(Cyt C)、凋亡诱导因子(AIF)和cleaved-半胱天冬酶3(caspase-3)表达水平。结果:与PILO组(114.571±5.420)相比,PILO+Mdivi-1组海马神经元数目增加[(157.429±6.183);F=68.693,P<0.001]。与PILO组SE 24 h亚组[(113.429±4.980),(6.102±0.193)]相比,PILO+Mdivi-1组SOD活力增加[(138.571±3.380);F=21.779,P<0.001],MDA含量减少[(4.353±0.231);F=27.226,P<0.001]。与PILO组[(0.594±0.020),(1.099±0.015)]相比,PILO+Mdivi-1组线粒体Cyt C增加[(0.897±0.015);F=296.177,P<0.001],细胞质Cyt C减少[(0.433±0.010);F=562.684,P<0.001]。与PILO组[(0.878±0.037),(1.465±0.076)]相比,PILO+Mdivi-1组线粒体AIF增加[(1.279±0.051);F=59.298,P<0.001],细胞核AIF减少[(0.896±0.044);F=46.424,P<0.001]。与PILO组(0.587±0.192)相比,PILO+Mdivi-1组cleaved caspase-3减少[(0.463±0.022);F=40.500,P<0.001]。结论:Mdivi-1对癫痫大鼠海马神经元有保护作用,其机制可能与降低氧化应激,抑制Cyt C释放、AIF移位及caspase-3激活有关。

线粒体分裂蛋白抑制剂对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:研究线粒体分裂蛋白抑制剂(mitochondrial division inhibitor,Mdivi-1)对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响及机制。方法:121只雄性SD大鼠随机分成4组,分别为对照(CON)组、PILO组、PILO+DMSO组和PILO+Mdivi-1组。观察各组大鼠行为学改变,并分别采用尼氏染色法及TUNEL法检测神经元损伤及凋亡,Western blot法检测动力相关蛋白1(dynamin-releted protein 1,Drp1)和半胱天冬酶3(caspase-3)表达水平。结果:Mdivi-1组较PILO组致痫成功率降低(P>0.05),海马神经元损伤显著减轻(P<0.05)。Mdivi-1明显降低癫痫持续状态(status epilepticus,SE)引起的海马神经元凋亡和caspase-3激活(P<0.05)。结论:Mdivi-1对癫痫大鼠海马神经元凋亡有明显的抑制作用,其机制可能是抑制caspase-3激活。