一种简单、精确计算EC_(50)的方法

提出了一种计算药物量 -效曲线参数半数效量 ( EC50 )的新方法 ,可精确计算落在两已知浓度间的 EC50 ,不需绘图测算或计算机曲线拟合。该方法比常用的绘图计算的方法更加快速、精确和简单 ,能广泛应用于药效动力学研究。

斑马鱼胚胎评价5种药物的发育毒性与模型验证

目的用斑马鱼胚胎探究环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷5种已知对人类胚胎致畸药物的毒性和安全性。方法挑选4 hpf发育正常的受精卵,采用水浴染毒法,将药物添加到人工海水中,每种药物分别设置5个浓度组,另设空白对照组和溶剂对照组,观察给药120 hpf后斑马鱼的死亡情况,统计各实验组斑马鱼胚胎的死亡数、畸形数,并求出120 hpf时斑马鱼胚胎的死亡率、畸形率、半数致死浓度(LC50)、半数致畸浓度(EC50)、致畸指数(TI)。并利用公式:TI=LC50/EC50计算出阳性药物的致畸指数。根据已经测得的LC50,求出各药物的最大非致死浓度(MNLC),分别设置1/10 MNLC、1/3 MNLC,MNLC和LC104个浓度,以沙利度胺为阳性对照,维生素C为阴性对照,人工海水为空白对照,0.5%DMSO为溶剂对照,28.5℃下作用至120 h,每天观察胚胎的发育情况,统计胚胎死亡及畸形状态。结果 5种药物的LC50从大到小依次为:环磷酰胺>阿扎胞苷>盐酸四环素>乙酰水杨酸>乙酸地塞米松。EC50从大到小依次为:环磷酰胺>盐酸四环素>阿扎胞苷>乙酰水杨酸>乙酸地塞米松。环磷酰胺、乙酰水杨酸、盐酸四环素、乙酸地塞米松、阿扎胞苷TI值分别为1.92,1.11,1.05,1.44,2.99。结论斑马鱼胚胎模型可用于初步评价药物的发育毒性和安全性。

右美托咪定镇静下瑞芬太尼抑制光棒插管反应的药效学观察

目的测定瑞芬太尼在右美托咪定镇静下抑制光棒插管反应的半数有效效应室浓度(EC50)。方法择期乳腺肿瘤手术患者36例,年龄18~59岁,ASAⅠ~Ⅱ级,体重指数﹤30 kg/m2。入室后统一用18G套管针开放下肢静脉,静卧15 min后开始静脉输注负荷剂量右美托咪定1. 0μg/kg (10 min泵完),后以0. 5μg/(kg·min)持续泵入,待患者意识消失,脑电双频指数值降至60~65时,靶控输注瑞芬太尼(Minto模型),第1例患者瑞芬太尼初始效应室浓度为3. 0 ng/m L,待效应室浓度与血浆浓度达到平衡,利用非窥喉光棒技术经口气管内插管。入选样本从发生插管阳性反应的前一例阴性反应病例开始计算。瑞芬太尼的效应室浓度采用改良序贯法进行试验,相邻效应室靶浓度之间比率为1. 20。结果瑞芬太尼在右美托咪定镇静下抑制光棒插管反应的EC50为2. 85 ng/m L,95%可信区间为2. 61~3. 12 ng/m L。结论右美托咪定镇静下瑞芬太尼抑制光棒插管反应的半数有效效应室浓度为2. 85 ng/m L。

α-晶型碱式氯化铜的水环境效应研究

分别采用静态法和生长抑制法进行了α-晶型碱式氯化铜对水生生物模糊网纹蚤(Ceriodaphnia dubia)、呆鲦鱼(Pimephalespromelas)、月牙藻(Selenastrum bibraianum)和斜生栅列藻(Scenedesmus oblignus)的毒性试验,旨在明确α-晶型碱式氯化铜在水环境中对水生生物的毒性效应,为碱式氯化铜的生态评价提供安全依据。结果表明,碱式氯化铜对模糊网纹蚤48 h半数致死浓度(48 h LC50)、呆鲦鱼96 h半数致死浓度(96 h LC50)分别为29.7 mg.L-1、39.25 mg.L-1,对月牙藻72 h生长抑制浓度(72 h EC50)、斜生栅列藻96 h生长抑制浓度(96 h EC50)分别为11.1 mg.L-1、101 mg.L-1。以上结果表明,α-晶型碱式氯化铜不具有水生生物毒性。

携带Fluc与mCherry双报告基因的重组痘苗病毒WR株的构建及体外应用

【目的】构建同时表达双报告基因(荧光素酶Fluc和红色荧光蛋白mCherry)的重组痘苗病毒WR株。【方法】采用CRISPR/Cas9技术构建针对WR株J2R区的gRNA CRISPR/Cas9质粒及表达Fluc和mCherry的质粒pJSE-Fluc/mCherry,插入至TK区构建重组痘苗病毒rWR-Fluc/mCherry。采用PCR与测序分析基因插入位置与序列的准确性;通过mCherry、Fluc活性、空斑形态鉴定重组病毒;重组病毒连续盲传12代,检测双报告基因及E3L表达分析重组病毒的遗传稳定性;检测重组病毒(rWR)与野生型病毒(WR)感染Vero和HeLa细胞后的细胞病变、TCID50、报告基因表达,分析病毒的复制动力学。采用空斑法、qPCR法、双报告基因活性检测,评价ST-246作为阳性药物的体外抗病毒药效。【结果】体外鉴定结果显示,Fluc和mCherry准确插入WR株的TK区域,感染Vero细胞后可检测到mCherry荧光及Fluc酶活性,空斑形态与野生型病毒一致,连续盲传12代病毒滴度保持稳定,并且双报告基因活性及E3L表达均可稳定检出,表明重组病毒rWR-Fluc/mCherry构建成功且遗传稳定;重组病毒感染Vero和HeLa细胞后的细胞病变、TCID50滴定、双报告基因活性检测均表明,感染后48-72h达到复制高峰,与WR的复制动力学一致。采用重组病毒rWR-Fluc/mCherry测得ST-246的 EC50与WR野生型病毒一致,多个检测方法(病毒蚀斑、DNA拷贝数、双报告基因活性) EC50结果(2-7 nmol/L之间)间均具有良好的一致性(相关系数r均大于0.500 0,P<0.05)。【结论】成功构建了可同时表达Fluc与mCherry双报告基因且遗传稳定的重组痘苗病毒rWR-Fluc/mCherry,可应用于抗病毒药物体外快捷筛选及药效分析。

杀螺剂室内筛选实验方法标准化的研究Ⅳ不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂的敏感性

目的了解不同月份钉螺对氯硝柳胺乙醇胺盐可湿性粉剂(WPN)的敏感性,为制定杀螺药筛选与药效评价标准化方法提供参考依据。方法自2010年6月至2011年5月每月采集江苏省镇江市江滩钉螺,实验室饲养24h后随机分组,用现配制的WPN药液在温度(25±1)℃、湿度60%、光照充足的培养箱内对上述钉螺进行浸杀试验,采用敲击法鉴别钉螺死活并计数,计算钉螺死亡率及其半数致死浓度(LC50)。结果 0.5mg/L及以上浓度WPN浸杀钉螺24h,各月采集的钉螺死亡率均为100%;浓度为0.25mg/L时,钉螺死亡率为60%～100%;浓度为0.125mg/L时,钉螺死亡率为3%～27%;浓度为0.0625mg/L时,钉螺死亡率为3%～20%;0.032mg/L及以下浓度钉螺死亡率均为0;浸杀24h钉螺LC50为0.140～0.209mg/L。0.5mg/L及以上浓度WPN浸杀钉螺48h,各月采集的钉螺死亡率均为100%;浓度为0.25mg/L时,钉螺死亡率为90%～100%;浓度为0.125mg/L时,钉螺死亡率为3%～57%;浓度为0.0625mg/L时,钉螺死亡率为3%～13%;浓度为0.032mg/L时,钉螺死亡率为0～10%;0.016mg/L及以下浓度时,钉螺死亡率均为0;浸杀48h钉螺LC50为0.112～0.170mg/L。不同月份钉螺经WPN浸杀24h与48h时的死亡率差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论全年不同月份采集的钉螺对WPN的LC50波动范围不大,敏感性变化较小,对杀螺药筛选以及药效评价结果影响有限,在实验误差范围内。