Megsin基因转染对小鼠肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1及细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞,分别培养12、24、48 h,采用MTT法检测细胞增殖程度,免疫细胞化学和Western blot法检测系膜细胞megsin、MCP-1、ICAM-1蛋白表达水平,ELISA检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果:高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,细胞增殖明显,细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高,megsin基因转染后上述变化趋势更加显著,而megsin shRNA质粒转染可明显减弱上述变化。结论:Megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚。

Megsin基因转染对糖尿病小鼠肾脏炎症反应的影响及其机制研究

目的观察megsin基因转染对糖尿病小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨megsin在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法制备糖尿病小鼠模型,成模后随机选取10只作为糖尿病组(B组),剩余30只每周1次经尾静脉分别注射空质粒(C组),megsin表达质粒(D组),并设立正常对照组(A组)。实验共4周,于第4周末收集各组小鼠肾组织标本,分别应用Western blot和免疫组织化学染色测定肾组织中megsin、MCP-1、ICAM-1的表达;应用电镜观察肾小球超微结构的改变。结果糖尿病小鼠肾组织megsin、MCP-1及ICAM-1表达增强,基底膜普遍增厚,系膜区基质增多,上皮细胞足突融合;megsin基因转染后上述变化趋势更加显著。结论 megsin可上调MCP-1及ICAM-1表达,促进系膜细胞增殖及系膜外基质积聚,是加速肾小球硬化的可能机制之一。

Megsin基因E1-5’UTR区A267G与免疫球蛋白A型肾病阴虚证的相关性

目的:观察增生为主的原发性免疫球蛋白A型肾病(immunoglobulin Anephropathy,IgAN)患者阴虚证(气阴两虚证、肝肾阴虚证)与megsin基因E1-5’UTR区A267G的相关性,寻找原发性IgAN中医证型微观辨证可能的物质基础。方法:筛选符合标准的原发性IgAN患者120例,进行megsin基因E1-5’UTR区A267G的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)测序,观察中医证型与SNP的相关性。结果:120例患者中GG型83例,GA型34例,AA型3例。肝肾阴虚证在AA与GA型IgAN患者中所占比例较高,气阴两虚在GG型中所占比例较高(P<0.01);GG型与GA型+AA型比数比(odds ratio,OR)为9.800,95%可信区间(confidence interval,CI)为3.969～24.199。这样的差异同样存在于不同性别和不同年龄之间。结论:Megsin基因E1-5’UTR区A267G可能是区分原发性IgAN肝肾阴虚证和气阴两虚证的物质基础之一。

汉族人群Megsin基因C-25663G多态性与IgA肾病的关系

目的研究兰州地区汉族人群Megsin基因C-25663G多态性与IgA肾病的关系。方法采集兰州地区汉族的IgA肾病患者44例及体检正常的兰州地区汉族健康体检人群100例作为对照组的Megsin基因C-25663G,应用聚合酶链反应(PCR)进行检测和分析。结果 IgA肾病组与健康对照组的Megsin基因C-25663G多态性检测结果显示,CC基因型、CG基因型、GG基因型和C型、T型等位基因型均没有显著性差异(P<0.01)。结论 Megsin基因C-25663G多态性与兰州汉族人群IgA肾病的发病可能无关。

megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞增殖和基质金属蛋白酶2及其抑制因子表达的影响

目的观察megsin基因转染对高糖环境中肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）的表达及Ⅳ型胶原水平的影响，探讨megsin与系膜细胞增殖和细胞外基质代谢的关系。方法高糖环境中培养小鼠肾小球系膜细胞，分别于培养12、24、48h末，应用MTT法检测细胞增殖程度；Western印迹法检测系膜细胞megsin、MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平；放免法检测细胞培养上清Ⅳ型胶原浓度。结果高糖环境中肾小球系膜细胞megsin、TIMP-2表达上调，MMP-2表达下调，细胞增殖明显，细胞上清液中Ⅳ型胶原浓度升高。megsin基因转染后上述变化趋势更加显著。结论megsin可诱导系膜细胞增殖，并通过上调TIMP-2、下调MMP-2抑制细胞外基质降解，是加速肾小球硬化的可能机制之一。

转染Megsin基因对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响及机制

目的了解Megsin基因高表达对体外系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原分泌的影响,并探讨其机制。方法构建大鼠Megsin基因真核表达载体,体外转染系膜细胞。3H-胸腺嘧啶(3H- TdR)掺入法检测系膜细胞增殖情况。RT-PCR方法检测系膜细胞血小板源生长因子(PDGF)- BB、IL-1β、IL-6、IL—10、TGF-β1和TNF-αmRNA表达变化。ELISA法检测细胞培养上清PDGF- BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原浓度。观察PDGF-BB中和抗体对大鼠系膜细胞转染Megsin基因后细胞增殖和TGF-β1 mRNA表达的影响。结果大鼠系膜细胞转染Megsin基因后,细胞内3H-TdR掺入量显著增加,PDGF-BB和TGF-β1 mRNA表达显著上调,细胞培养上清PDGF-BB、TGF-β1和Ⅳ型胶原的浓度显著升高,3者与转染Megsin基因呈明显时间依赖性关系。PDGF-BB中和抗体显著抑制系膜细胞转染Megsin基因后细胞内3H-TdR的掺入,并下调稳定表达Megsin基因的大鼠系膜细胞TGF-β1 mRNA表达。结论Megsin基因高表达在体外可促进系膜细胞PDGF-BB和TGF-β1的表达和分泌,进而促进系膜细胞增生和Ⅳ型胶原分泌。

盐酸吡格列酮对肾小球系膜细胞megsin基因表达和α-SMA、TGF-β_1合成的影响

目的研究盐酸吡格列酮对培养的人肾小球系膜细胞(hMC)megsin基因表达及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)合成的影响。方法培养hMC,设计并合成针对megsin基因编码区的siRNA双链,经原位杂交方法筛选出有效的序列,采用siRNA专用脂质体RNA-mate将siRNA转染至hMC,同时设盐酸吡格列酮组(1、5、10μmol/L三种浓度)和正常对照组。MTT方法检测细胞增殖,免疫组化方法检测α-SMA、TGF-β1的合成,原位杂交法检测细胞megsin mRNA表达。结果不同浓度盐酸吡格列酮可以抑制hMC megsin基因mRNA的表达,48 h抑制效果最强。megsin siRNA能够阻抑hMC细胞megsin基因表达。结论盐酸吡格列酮可以抑制hMC megsin基因mRNA的表达,但对体外培养的hMC增值无明显影响,对α-SMA、TGF-β1合成无明显影响。